斗鸡新城疫强毒感染的诊治     

周思旋  史开志  姜玲玲 《黑龙江畜牧兽医》2014,(9):63-64

为对某斗鸡场病死斗鸡病死因进行确诊,进行了流行病学调查、剖检病变观察、细菌分离及RT-PCR检测试验,结果该场病死斗鸡肛门周围粘有灰绿色粪便,腹部、颈部、胰腺、腺胃等多处出血;在培养基上肝脏组织液无细菌生长。针对新城疫病毒（NDV）强弱毒基因序列之间的差异设计通用、强毒和弱毒引物,样本RNA经RT-PCR扩增后,通用型和强毒型鸡新城疫病毒扩增出特异性片段,弱毒引物未扩增出相应片段。由此确诊该场病死斗鸡为新城疫强毒感染。  相似文献   

RT—PCR对新城疫病毒（NDV）分离株的鉴定及其临床应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

温贵兰  瞿继红  李永明 《中国兽医学报》2008,28(10)

采用新城疫病毒的通用引物PA PB、强毒引物PA PC、弱毒引物PA PD对11株贵州新城疫分离毒株与4株新城疫参考毒株进行了RT-PCR扩增.结果15株新城疫毒株均被PA PB引物扩增出359 bp的条带,F48E8、ND98、Fw、H2、P3、BY、L2、P1,P2被PA PC引物扩增出254 bp的条带,而PA PD引物未扩增出DNA条带;ND89、Lasota被PA PD引物扩增出254 bp的条带.而PA PC引物未扩增出DNA条带.采用3对引物对自然发病斗鸡脑、脾、咽喉试子、泄殖腔试子进行RT-PCR检测,确诊为斗鸡新城疫强毒感染,且与传统病毒分离与毒力鉴定的结果相一致.  相似文献   

鉴别新城疫强、弱毒一步RT-PCR方法的建立及应用     

《中国兽医学报》2015,(7):1056-1059

设计2对引物分别用于新城疫强、弱毒的检测。使用强毒引物F1、R1可从NDV强毒株中特异性扩增出349bp的目的片段,使用弱毒引物F2、R2可从NDV弱毒株中特异性扩增出255bp目的片段,该方法对H9亚型禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)的检测结果均为阴性。灵敏性试验结果显示,该方法对NDV强、弱毒株的最小检出量分别为1pg和10pg。利用该方法对7份临床样品进行检测,结果与测序结果一致,说明该方法可用于新城疫强、弱毒的快速鉴别诊断。  相似文献   

新城疫强、弱毒株分子生物学鉴别诊断方法的建立     

黄淑坚  ;龚中贵  ;黄兴国  ;吴志新  ;蔡丽丽  ;梁小英 《养禽与禽病防治》2009,(4):18-21

为了快速、敏感、特异地鉴别区分新城疫强、弱毒株,根据新城疫病毒F基因序列设计出并合成两对特异性引物,XsXq、XrXa,用来区分新城疫强毒株和弱毒株,其中XsXa可组合用来扩增新城疫所有毒株,利用这三对引物对新城疫病毒的F基因片段进行多联RT—PCR扩增,并对该多联RT—PCR检-测方法进行敏感性及特异性试验。结果表明：这三对引物能特异性地扩增出新城疫强、弱毒株及NDV毒株的F基因片段,大小分别为259bpNDV（F48E9）、522bpNDV（LaSota）、757bp（NDV）,该检测方法敏感性高,特异性强,初步建立起快速、敏感、特异的鉴别诊断新城疫强、弱毒株的分子诊断方法。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒强毒株和弱毒疫苗株的免疫磁珠-多重RT-PCR鉴别方法的建立     

《中国家禽》2017,(10)

利用鸡传染性支气管炎病毒(IBV)多克隆抗体构建的免疫磁珠富集IBV,对Gen Bank中896株IBV S1基因序列及其多变区进行分析,根据IBV强毒株和弱毒疫苗株序列差异设计引物,建立了一种基于免疫磁珠富集IBV后检测S1基因多变区的多重RT-PCR方法。结果表明:该方法能扩增出强毒株约710 bp的通用片段和约350 bp的特异片段,弱毒疫苗株能扩增出约710 bp的通用片段和约210 bp的特异片段,能鉴别出强毒株和弱毒疫苗株。免疫磁珠富集IBV后比不富集病毒用RT-PCR方法检测敏感性提高100倍。该方法为IBV检测提供了新的技术支持。  相似文献   

多重RT-PCR快速检测鉴别新城疫病毒强毒株和弱毒疫苗株方法的建立   总被引：5，自引：0，他引：5  

唐小飞谢芝勋  刘加波庞耀珊邓显文  谢志勤 《中国兽医科技》2005,35(11):888-891

根据新城疫病毒（NDV）基因结构的特点及强、弱毒株融合基因裂解位点的序列差异设计了4条引物，建立了一种可以快速鉴别NDV强毒株和弱毒疫苗株的多重PCR方法。检测结果显示，强毒株可以扩增出442bp的特异性片段和671bp的通用片段，弱毒疫苗株可以扩增出252bp的特异性片段和671bp的通用片段。该方法只需进行一次RT-PCR，整个过程可在数小时内完成。经敏感性测定，该方法最低能检测到100pg的NDV RNA。  相似文献   

用RT-PCR对新城疫病毒分离株毒力的快速鉴定   总被引：2，自引：0，他引：2  

王泽霖  王丽  张建武  黄娟  宋云清 《河南畜牧兽医(综合版)》2001,22(10):6-8

根据新城疫病毒NDV强、弱毒株在F蛋白裂解位点氨基酸组成的序列上的差异,参照有关文献,设计了三对引物A+B,A+C,A+D。引物A+B能从Lasoa,B1,I系和强毒F48E8的含毒尿囊液中扩增出362bp的核酸片段,引物A+C仅能从强毒F48E8的含毒尿囊液中扩增出254bp的片段,引物A+D仅能从Lasota,B1,I系的含毒尿囊液扩增出254bp片段。三对引物均不能从IB,IBD,AI的含毒尿囊液和正常鸡胚尿液中扩增出特异片段。从发病鸡群中分离到3株NDV毒株中均被A+C引物扩出,它们的鸡胚平均死亡时间MDT分别为51.8h、53.2h、52.6h,1日龄雏鸡脑内接种指数ICPI为1.65、1.63、1.60,证明是NDV强毒。利用RT-PCR对NDV人工感染鸡最早可于攻毒后第二天从病鸡气管中检测到NDV,其次为泄殖腔和脾、肾。利用RT-PCR对NDV毒力的鉴定与传统生物学试验对强弱毒的测定结果完全吻合。但前者可在24小时内直接对组织匀浆进行诊断,具有快速简便和敏感的特点。  相似文献   

山东新城疫病毒分离株F基因的遗传进化分析     

苏文政  韩红  朱荣生 《家畜生态》2010,(2):80-82

应用特异性引物从山东某发病鸡场病鸡体内分离到的命名为JN09的新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）中扩增其F基因,预计扩增片段大小为1 700 bp。RT-PCR扩增出的目的片段大小与预计扩增片段大小相符合,测序结果表明扩增片段与新城疫病毒F基因序列相符。对其F基因进行遗传进化分析,并结合山东地区近几年来的分离毒株的相关信息,着重分析该地区近年来新城疫病毒F基因的变异情况。  相似文献   

某赛鸽养殖场新城疫感染的诊治报告     

《黑龙江畜牧兽医》2017,(12)

为了确诊贵州省贵阳市某赛鸽养殖场赛鸽死亡的原因,采用了流行病学调查、临床症状观察、病理剖解、细菌分离、发病鸽HI试验和RT-PCR检测诊断等方法对发病死亡的赛鸽进行诊断。结果表明:根据流行病学调查、病理剖检初步诊断送检的病死赛鸽疑似禽流感、新城疫和细菌感染,经病毒核酸检测和细菌分离,结果新城疫病毒RT-PCR检测出特异性条带,判断为阳性。确诊造成该赛鸽场赛鸽发病死亡的原因为新城疫病毒感染。  相似文献   

聚合酶链反应检测鉴别鸡毒霉形体强毒株和弱毒疫苗株的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

邓显文谢芝勋  唐小飞谢志勤  庞耀珊廖敏刘加波  何竟铭 《中国兽医科技》2003,33(9):7-11

根据鸡毒霉形体(MG)强毒株和弱毒疫苗株基因组结构特点，分别设计合成2对引物XZ1、XZ2和XZ45、XZ16，建立了可检测MG强、弱毒株的PCR方法。以引物XZ1、XZ2对MG强毒株和弱毒株进行的PCR，均可扩增出732bp的特异性片段；而以另1对引物XZ45、XZ46对MG弱毒株进行PCR，可扩增出524bp的特异性片段，但对鸡毒霉形体标准强毒株和野毒株的PCR，则扩增不出任何条带。特异性试验表明，这2对引物对其他种类鸡毒霉形体及其他对照禽病病原核酸模板的扩增均为阴性。敏感性试验结果显示，2对引物PCR均能检出100fg的MGDNA。研究结果表明，通过上述2对引物的2次PCR扩增，在数小时内即可鉴别出MG毒株是强毒株还是弱毒疫苗株。  相似文献   

检测和鉴别犬瘟热病毒强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立及初步应用     

司微  崔尚金  张洪英  刘立奎 《中国预防兽医学报》2007,29(3):222-226

根据GenBank上登录的犬瘟热病毒（Canine distemper virus，CDV）基因组全序列，选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4，并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3，用引物P1／P4进行RT—PCR，然后用引物P2／P3／P4进行复合套式PCR，建立了一种能区分CDV强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应（RT—nPCR）的鉴别诊断方法。应用该方法从CDV强、弱毒株的基因组中分别扩增出了大小为247bp和177bp的特异性片段，从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为247bp和177bp的两条特异性片段，与犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒、新城疫病毒的细胞培养物以及正常细胞对照组进行复合RT—nPCR扩增时均为阴性。对从黑龙江省和吉林省采集的20份疑似CDV病料进行的检测结果表明，有15份类似CDV强毒，5份类似CDV弱毒。本研究建立的复合RT—nPCR可以有效检测CDV感染，能够将强、弱毒株区分开，可用于临床快速检测、流行病学监测以及追踪疫苗免疫效果等。  相似文献   

用PCR技术鉴定犬细小病毒弱毒疫苗株   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘忠华  钟翎  贺星亮  徐耀基  黄韧 《中国兽医学报》2003,23(5):444-446

通过分析比较犬细小病毒(CPV)弱毒疫苗株和强毒株的基因序列，设计了3条引物并组成2对引物，对弱毒疫苗株和强毒株进行了半嵌套式PCR扩增。第1轮PCR扩增的结果为CPV弱毒疫苗株和强毒株有相同的目的片段(585bp)；第2轮PCR扩增的结果为CPV强毒株有375bp目的片段，而CPV弱毒疫苗株没有375bp目的片段。对PCR产物进行电泳和酶切分析，结果证明PCR产物片段大小和酶切位点与设计的产物完全一致。特异性和敏感性测定结果表明，该方法是高度特异和敏感的，可用于弱毒疫苗毒株与强毒株的鉴定。  相似文献   

山东新城疫病毒分离株F基因的遗传进化分析     

苏文政  韩红  朱荣生 《家畜生态学报》2010,31(2):80-82

应用特异性引物从山东某发病鸡场病鸡体内分离到的命名为JN09的新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)中扩增其F基因,预计扩增片段大小为1 700 bp. RT-PCR扩增出的目的片段大小与预计扩增片段大小相符合,测序结果表明扩增片段与新城疫病毒F基因序列相符.对其F基因进行遗传进化分析,并结合山东地区近几年来的分离毒株的相关信息,着重分析该地区近年来新城疫病毒 F基因的变异情况.  相似文献   

用PCR技术鉴定犬传染性肝炎病毒强、弱毒株的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

王雷  夏咸柱  卫广森  邹啸环  刘维全  扈荣良  黄耕 《畜牧与兽医》2002,34(2):10-12

根据Genebank中发表的犬传染性肝炎病毒 (ICHV)标准强毒株Glaxo和人工驯化的弱毒疫苗株CLL的保守序列间大小不同 ,按照引物设计的原则 ,设计合成了一对通用引物。该对引物可由ICHV强毒株扩增出 569bp的片段 ,而弱毒株可扩增出 2 4 4bp的片段。对PCR产物分别进行电泳、酶切和测序 ,证明PCR产物片段大小、酶切位点和核苷酸序列与设计的产物完全一致。正常DK细胞上清和犬传染性喉气管炎病毒 (CAV 2 )强、弱毒株细胞培养物均不能被该引物扩增 ,说明具有良好的特异性。其检测到的病毒量分别为 1 5TCID50 、 31TCID50 、说明该技术具有很高的敏感性。可用于ICHV强、弱毒株的鉴定和ICH的诊断  相似文献   

新型反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别猪瘟强毒和弱毒疫苗方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

李安  崔言顺  沈志强  谢金文  王金良  曲光刚  李峰  李建亮 《中国兽医学报》2011,31(1)

对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守区设计1对通用引物,扩增片段为609bp,并在该对引物扩增区域内设计针对疫苗弱毒的特异引物,扩增片段为237bp,建立一种能够区分猪瘟病毒强毒和疫苗弱毒的敏感、特异、重复性好的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别诊断方法。该方法能将我国大陆地区流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒与疫苗弱毒完全区分开来,且不与牛病毒性腹泻病毒及其他猪源病毒发生非特异反应。应用本试验建立的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)方法可以及早对猪瘟作出准确诊断,并可将强毒感染猪迅速从弱毒疫苗免疫猪群中筛选出来,减少了未感染免疫猪被误杀的可能性。  相似文献   

鸭新城疫病毒山东分离株F基因的克隆和序列分析     

张太翔  王炳军  田国华  田国宁  张金玲  韩光来  韩亮  张丽萍 《中国动物检疫》2009,26(5):41-43

本实验选择最近分离的1株鸭源新城疫病毒,采用已经发表的鸡新城疫病毒序列设计引物,应用RT-PCR技术扩增鸭源新城疫病毒的F基因,并将其克隆至载体上,然后进行了核苷酸序列、氨基酸序列测定,结果表明该分离株为新城疫强毒株。  相似文献   

鉴别诊断鸡传染性法氏囊病RT-PCR方法的建立     

严红亚  赵鹤庭  赵蓉  信爱国  常志顺 《云南畜牧兽医》2019,(3)

诊断鉴别鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)对该病的临床诊治具有重要意义。从IBDV弱毒疫苗中提取病毒RNA,采用二步RT-PCR方法,建立诊断和鉴别IBDV毒株性质的分子诊断方法。结果表明:针对IBDV VP2基因高变区的基础RT-PCR引物和巢式RT-PCR引物,分别能够扩增出目标大小的特异性片段;区分IBDV超强毒株和经典毒株的RT-PCR扩增结果与预期目标一致。该方法可用于鸡传染性法氏囊病毒病的快速分子诊断及鉴别。  相似文献   

有PCR技术鉴定犬传染性肝炎病毒强、弱毒株的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

王雷  卫广森等 《畜牧与兽医》2002,34(2):10-12

根据Genebank中发表的犬传染性肝炎病毒（ICHV）标准强毒株Glaxo和人工驯化的弱毒疫苗株CLL的保守序列间大小不同，按照引物设计的原则，设计合成了一对通用引物，该对引物可由于ICHV强毒株扩增出569bp的片段，而弱毒株可扩增出244bp的片段，对PCR产物分别进行电泳，酶切和测序，证明PCR产物片段大小，酶切位点和苷酸序列与设计的产物完全一致。正常DK细胞上清和犬传染性喉气管炎病毒（CAV－2）强、弱毒株细胞培养物均不能被该引物扩增，说明具有良好的特异性，共检测到的病毒量分别为15TCID50、31TCID50，说明该技术具很高的敏感性，可用于ICHV强，弱毒株的鉴定和ICH的诊断。  相似文献   

应用RT-PCR对新城疫病毒分离株毒力的快速鉴定   总被引：4，自引：3，他引：1  

王泽霖  王丽  姚惠霞  马仲彬  宋云清 《中国兽医学报》2004,24(4):317-320

根据新城疫病毒 (NDV)强、弱毒株在 F蛋白裂解位点氨基酸组成和序列上的差异 ,参照有关文献 ,设计了 3对引物 (A B,A C,A D)。引物 A B能从 L a Sota、B1 、 系和强毒 F4 8E8的含毒尿囊液中扩增出 36 2 bp的核酸片段 ,引物 A C仅能从强毒 F4 8E8的含毒尿囊液中扩增出 2 5 4 bp的片段 ,引物 A D仅能从 L a Sota、B1 、 系的含毒尿囊液中扩增出 2 5 4 bp片段。 3对引物均不能从 IB、IBD、AI的含毒尿囊液和正常鸡胚尿囊液中扩增出特异片段。从发病鸡群中分离的 3株 NDV毒株均被 A C引物扩出 ,它们的鸡胚平均死亡时间 (MDT)分别为 5 1.8、5 3.2、5 2 .6 h,1日龄雏鸡脑内接种指数 (ICPI)为 1.6 5、1.6 3、1.6 0 ,证明是 NDV强毒。利用 RT- PCR对 NDV人工感染鸡最早可于攻毒后第 2天从病鸡气管中检测到 NDV,其次为泄殖腔和脾、肾。利用 RT- PCR对 NDV毒力的鉴定结果与传统生物学试验的测定结果完全吻合 ,但前者可在 2 4 h内直接对组织匀浆进行诊断 ,具有快速、简便和敏感的特点  相似文献   

一起鸡新城疫的诊断研究     

任章章  张小宁 《国外畜牧学(猪与禽)》2014,(12):54-55

甘肃某养鸡场饲养的鸡群突然发病,经流行病学调查和病理解剖观察,初步分析诊断为鸡新城疫。然后采集病死鸡脑组织,提取总RNA,针对新城疫F基因全序列设计引物,进行RT-PCR诊断,结果为新城疫阳性,对F0位点的氨基酸序列分析,符合新城疫强毒序列特点,确定鸡场为新城疫感染。  相似文献