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1.
一规模化猪场断奶仔猪腹泻大肠杆菌毒力因子的检测 总被引：3，自引：1，他引：3
从疑似断奶仔猪腹泻的仔猪中分离、鉴定出15株病原性大肠杆菌。经O血清型鉴定,11株为0131、4株未定型,所有O131血清型菌株呈β溶血。多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6、F41、F18)检测菌毛,O131菌株的毒素为STa、STb、SLT-2e,表达F18粘附素,未定型菌株的毒素为STa,共表达F6和F18粘附素。对15株大肠杆菌用16种抗生素进行药敏试验,结果表明:分离株对阿米卡星、痢特灵、新霉素敏感,而对多种抗生素产生了不同程度的耐药性。运用本场大肠杆菌分离株灭活苗免疫猪群,取得良好效果。 相似文献
2.
猪水肿病大肠杆菌分离、鉴定及药敏试验 总被引：6，自引：3，他引：3
本实验从疑似猪水肿病的病例分离到5株大肠杆菌,O抗原鉴定结果表明所有菌株均为O139血清型;应用F18ab菌毛单克隆抗体对这5株大肠杆菌能否表达F18ab菌毛进行了鉴定,结果表明其中2个菌株能表达F18ab菌毛;利用聚合酶链式反应(PCR)对志贺氏菌样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)操纵子基因保守区进行了扩增,结果发现在能表达F18ab菌毛2个菌株中可扩增一段特异性序列。以上数据表明这2株大肠杆菌为致仔猪水肿病大肠杆菌。药敏试验表明这两株菌株均对氟哌酸、妥布霉素、庆大霉素、利福平等抗生素高度敏感。 相似文献
3.
为建立一种可以同时扩增大肠杆菌(E.coli)F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因保守序列的多重PCR检测方法,本研究设计合成5对分别针对F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的特异性引物,以具有相应菌毛基因的E.coli参考菌株DNA为模板,通过对多重PCR反应条件的优化,建立了检测F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的多重PCR方法。所建立的多重PCR方法能够特异性扩增F4、F5、F6、F41、F18菌毛基因的目的片段,大小分别为770 bp、533 bp、422 bp、643 bp和1140 bp,该方法对沙门氏菌、猪丹毒杆菌、巴氏杆菌以及无菌毛基因的E.coli等参考菌株均无特异性扩增片段,检出F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的最低活菌浓度分别为5.3×10^5cfu/mL、3.7×10^6cfu/mL、3.1×10^5cfu/mL、3.7×10^7cfu/mL、6.9×10^5cfu/mL。用不同批次的引物和试剂进行3次多重PCR检测均能扩增出目的条带,表明建立的多重PCR方法有很好的批内和批间重复性。对90株大肠杆菌临床分离菌株菌毛基因进行检测,F4阳性率为3.33%,F5阳性率为2.22%,未检测到F6、F41和F18阳性菌株,其检测结果与常规单一PCR的检测结果一致。研究表明:建立的E.coli菌毛基因多重PCR分型方法具有很好的特异性、敏感性和重复性,可用于E.coli分离菌株菌毛基因型的快速鉴定,同时提高了检测效率。 相似文献
4.
对江苏省海安县2003年5月-2004年5月各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查,发现猪水肿病在该地区呈零星散发性发生,发病率为0.31%～1.84%,死亡率为0.07%～0.56%,病死率为16.0%～35.0%。水肿病主要侵害仔猪,育成猪也偶有发生,一般以气温比较高的季节多发。同时从疑似猪水肿病的病料中分离到12株大肠杆菌,经O血清型鉴定,5株为O139,2株为O45,O55、O93、O9、O101、O119各1株。经多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6、F41、F18)检测菌毛,共6个分离株带有SLT-2e基因,其中O139分离株5株,O55分离株1株,其余6株均带STb基因。12个分离株中,单独表达F18菌毛的4株(O1392株,O45、O119各1株),F5 F411株(O93),F41 F181株(O139),F5 F41 F182株(均为O139)。经药敏试验,多数分离菌株对壮观霉素和新霉素高度敏感。 相似文献
5.
牛产肠毒素大肠杆菌毒力因子多重PCR检测方法的建立 总被引：6，自引：1，他引：6
通过多重PCR扩增产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigentic E.coli，ETEC）的毒力因子F41菌毛、K99菌毛和STa肠毒素的编码基因来检测和鉴定ETEC。试验中对影响PCR扩增的dNTP、Mg^2＋、引物浓度以及退火温度等因素进行优化，在优化条件的基础上，确定多重PCR的特异性和灵敏性，以此建立同时检测ETEC多个毒力因子的多重PCR方法。用该方法对分离于犊牛腹泻和犊牛肠毒血症的7株大肠杆菌进行检测，结果2株为F41、K99和STa阳性，4株为F41、STa阳性，1株为K99STa阳性。这与玻片凝集试验检测菌毛的结果一致。试验表明，该方法特异性强、敏感性高、简便、快速，适用于临床鉴定和检测牛ETEC菌株。 相似文献
6.
从临床疑似大肠埃希菌感染病鸡的肝脏,分离到24株能在麦康凯平板生长但呈灰白色菌落的革兰阴性中等大小杆菌.通过IMViC试验、糖发酵试验、三糖铁斜面接种试验确定为大肠埃希菌,且其中16株为不发酵乳糖型,8株为迟发酵乳糖型.血清学试验表明,其中12株(50%)为O78抗原型,9株(37.5%)为O1抗原型,3株(12.5%)未能定型.利用PCR方法检测了该24株大肠埃希菌的F1菌毛与P菌毛基因,结果表明,其中10株(41.67%)为F1+大肠埃希菌,未发现P+分离株.药敏试验发现,所有菌株均对头孢拉定和阿米卡星敏感,部分菌株对链霉素、庆大霉素、环丙沙星、复方新诺明敏感,而对新霉素均为耐药. 相似文献
7.
高伟 《畜牧兽医科技信息》2003,(2)
江苏畜牧兽医职业技术学院陆桂平等,以K88~+菌毛结构基因保守序列为靶序列,设计合成一对可扩增长201bp的目的片段引物,成功地建立了检测肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88菌毛基因的PCR方法。进行了PCR方法的特异性试验和敏感性试验。对K99~+、F41~+,987P~+参考菌株和鼠伤寒沙门氏菌, 相似文献
8.
为调查犬源大肠杆菌氨基糖苷类药物4种耐药基因的携带情况,探讨氨基糖苷类耐药表型与耐药基因的相关性,本试验选用氨基糖苷类代表药物庆大霉素、阿米卡星、大观霉素和妥布霉素进行药敏试验,参照相关文献用已建立的检测氨基糖苷类4种主要耐药基因的PCR方法对分离鉴定的156株犬源大肠杆菌进行分子检测。随机选取4种耐药基因阳性进行克隆测序并对药敏试验结果和耐药基因检测结果进行比较分析。结果显示,犬源大肠杆菌对庆大霉素、妥布霉素、大观霉素和阿米卡星的耐药率分别为55.8%、32.7%、25.0%和20.5%;所检大肠杆菌4种耐药基因aacC2、aphA3、aadA和aacC4的检出率依次为55.8%、26.3%、23.1%和9.0%。两株携带4种耐药基因,8株携带了3种耐药基因,携带两种或两种以上耐药基因菌株数占总菌株的40.4%(63/156)。序列分析结果表明,犬源大肠杆菌扩增产物与GenBank中的相应序列同源性较高。犬源大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因以aacC2为主,耐药率与耐药基因的符合率基本呈正相关。 相似文献
9.
[目的]为了分析河西走廊地区犊牛腹泻致病性大肠杆菌携带毒力基因和耐药性情况,[方法]2020—2021年在河西走廊地区采集患腹泻病犊牛的粪便、肛拭子及肝脏等病料组织279份,采用人工感染试验动物、PCR方法和K-B药敏纸片法分别检测犊牛腹泻性大肠杆菌致病性、毒力因子和耐药性。[结果]结果表明,分离得到了126株大肠杆菌,其中79株犊牛腹泻性大肠杆菌能引起小鼠死亡;分离的79株致病性大肠杆菌的毒力基因crl、irp2、fimH、papC、K88、K99、stx1、stx2检测率在40.5%～100%之间,其他毒力基因检测率在15.2%～34.2%之间;分离的79株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、新霉素等8种药物的耐药率在49.4%～96.2%之间,对其他药物的耐药率在5.1%～32.9%之间。[结论]从河西走廊地区患腹泻病犊牛病料组织中分离得到79株致病性大肠杆菌,这些菌株携带多种毒力基因,对临床中常用的抗菌药物产生了耐药性。 相似文献
10.
某定点肉牛屠宰场中非O157致病性STEC的分离鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
为了了解新疆伊犁地区肉牛屠宰过程中大肠杆菌的污染情况,检测非O157致病性产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)的感染情况,本试验采集新疆伊犁地区某定点肉牛屠宰场中屠宰肉牛的粪样和屠宰后的胴体表面拭子,并对样品进行了大肠杆菌的分离鉴定、毒力基因(eae、stx1、stx2)的PCR检测、O157鉴定(rfbE)、ERIC-PCR基因分型和小鼠致病性试验。结果显示,在采集的45份样品中分离鉴定出42株大肠杆菌,分离率为93.3%。其中2株菌株同时编码了毒力基因stx1和stx2,检出率为4.8%,毒力基因eae未被检出。PCR鉴定均为非O157STEC。ERIC-PCR基因分型检测发现,2株菌的基因型非常相似,同源关系密切。对小鼠进行腹腔注射攻毒,攻菌6h后,小鼠开始出现死亡,立即解剖死亡小鼠发现,其肠道出血,肝脏、脾脏、肾脏明显出血肿大,解剖对照小鼠表现正常,表明菌株具有一定的致病性。综上所述,在肉牛屠宰过程中存在大肠杆菌污染,其中粪便中非O157STEC菌株对胴体造成了污染,需要加强控制肉牛的屠宰加工关键环节的环境卫生。 相似文献
11.
检测K88~+肠毒素性大肠杆菌PCR方法的建立 总被引：5，自引：0，他引：5
以K8 8菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了一对可扩增长 2 0 1bp的目的片段的引物 ,成功地建立了检测肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88菌毛基因的PCR方法。进行了PCR方法的特异性试验和敏感性试验。对K99+ ,F41 + ,987p+ 参考菌株和鼠伤寒沙门氏杆菌 ,链球菌 ,金黄色葡萄球菌和猪肺疫巴氏杆菌的检测结果均为阴性 ;该检测方法的敏感度可达 1 0个细菌。用此方法对 1 0株腹泻仔猪粪便分离物进行检测 ,结果有 2株阳性 ;与血清学检测的结果一致。结果表明此方法特异性和敏感性都很高 ,可用于临床K88+ 肠毒素性大肠杆菌病的快速诊断和流行病学调查 相似文献
12.
动物性食品源大肠杆菌O血清型鉴定及其K88菌毛基因检测 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究对河北省冀东地区农贸市场和超市采集的生猪肉、生鸡蛋和生羊肉等分离得到的20株大肠杆菌进行大肠杆菌血清型鉴定;并检测不同血清型大肠杆菌的K88菌毛基因。采用常规方法进行大肠杆菌的O血清型鉴定,用PCR方法检测K88菌毛基因。分离鉴定的20株大肠杆菌有7种血清型,包括O38、O78、O88、O11、O107、O91、O9,其中O38、O78为优势血清型菌,均占分离菌株的25%(5/20)。在分离的动物性食品源大肠杆菌中有30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增呈阳性。结果表明,O78、O38为冀东地区动物性食品源大肠杆菌常见血清型,30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增阳性。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2020,(3)
为了了解牦牛屠宰过程中大肠杆菌污染状况、菌株所携带的毒力基因及其耐药情况。2018年11月份以随机采样方式从成都市某屠宰场采集样品150份,其中牦牛胴体拭子30份,鼻腔拭子60份,土壤拭子31份,皮毛拭子29份,应用伊红美蓝琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基对大肠杆菌进行初步分离和鉴定,PCR法扩增分离菌株携带的主要毒力因子基因est、elt、stx、eaeA、ipaH、aggR、ehxA、hlyA、astA等,采用K-B纸片扩散法检测细菌的耐药性。结果表明:从150份牦牛屠宰样品中共分离到20株大肠杆菌,分离率为13.33%(20/150)。不同样品中大肠杆菌检出率由高到低依次为牦牛胴体拭子(16.67%,5/30)、鼻腔拭子(15.00%,9/60)、土壤拭子(12.90%,4/31)和皮毛拭子(6.90%,2/29)。从20株大肠杆菌中均检出astA基因,15株菌株检出eaeA基因,9株菌株检出aggR基因,5株菌株检出ipaH基因,3株菌株检出stx2基因,分别从1株菌株检出stx1、ehxA和hlyA基因。大肠杆菌对氨苄西林的耐药率为50%,其次为氯霉素(45%)、链霉素(5%)、四环素(5%)。说明在牦牛屠宰过程中会污染致病性大肠杆菌,对食品安全带来潜在风险。 相似文献
14.
《黑龙江畜牧兽医》2017,(3)
为了进一步了解黑龙江省部分牛场致犊牛腹泻大肠杆菌毒力因子的流行情况,试验采用常规分离和PCR检测方法对2014—2015年黑龙江省部分牛场采集的72份犊牛病料进行检测,鉴定得到63株大肠杆菌,并应用PCR技术对CS31A、K88、K99、F17、F41、irp2、eae A、sta、lt、bfp A、EAST1等毒力因子进行检测。结果表明:有46株大肠杆菌含有毒力因子,通常含1~2种毒力因子,其中有18株携带(占39.13%)CS31A基因,说明CS31A基因为优势基因;通过毒力因子对大肠杆菌进行分型,共鉴定出产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)35株(占76.09%),为犊牛腹泻的主要致病型。 相似文献
15.
16.
《中兽医医药杂志》2017,(4)
采用K-B法对89株兔源大肠杆菌进行了8种β-内酰胺类药物的药敏实验,采用普通PCR法检测全部菌株的ESBLs酶基因和多重PCR法检测AmpC酶基因。结果显示,山东省部分规模化兔场分离的大肠杆菌除对头孢噻肟(CTX)和头孢哌酮(CFP)的耐药率为0之外,对头孢呋辛(CXM)、青霉素G(PEN)、氨苄西林(AMP)、头孢曲松(CRO)、哌拉西林(PIP)的耐药率分别为30.33%、70.79%、65.17%、17.98%和12.36%;耐药基因检测结果显示,89株大肠杆菌中有38株未检出β-内酰胺类药物的耐药基因,占所检菌株的42.70%;44株仅携带一种耐药基因(23株携带产ESBLs酶基因,占25.84%;21株携带产AmpC酶基因,占23.60%);4株携带产ESBLs酶2种基因;2株同时携带产ESBLs酶和AmpC酶3种耐药基因,仅1株同时携带产ESBLs酶和AmpC酶4种耐药基因。结果提示兔源大肠杆菌对β-内酰胺类耐药未产生较为广泛的耐药性。 相似文献
17.
《中国兽医学报》2016,(2):252-255
为确定某规模化牛场犊牛脑炎的病原,从2头病死犊牛的大脑、肝脏中分离到6株革兰阴性杆菌,对分离菌进行生化鉴定、O血清学测定、粘附素及肠毒素的测定、实验动物人工感染、药敏试验、病理组织学观察。结果分离菌符合大肠杆菌的生物学特性,对小白鼠有致病性;O血清型为161,PCR检测分离株均携带STa基因,其中4株携带K99菌毛基因,分离株不携带F41菌毛基因;分离株对氨苄西林、庆大霉素、阿莫西林、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、卡那霉素、氯霉素、四环素、链霉素、复方新诺明、头孢噻吩耐药,对阿米卡星、头孢唑林及新霉素敏感;解剖病死犊牛及人工感染死亡小鼠,大脑及脑干严重出血,脑脊液增多,组织学变化呈现脑组织血管扩张、充血、神经元细胞空泡变性坏死。结果表明,致该奶牛场犊牛脑炎死亡系由产毒性大肠杆菌引起。 相似文献
18.
海安县猪水肿病的流行病学调查 总被引：1，自引：0，他引：1
对江苏省海安县2003年各乡镇猪水肿病的发病和死亡情况进行了流行病学调查，发现猪水肿病在海安地区呈零星散发，发病率为0．29％～1．36％，死亡率为0．08％～0．35％。从疑似猪水肿病的病料中分离到22株大肠埃希氏茵，其中12株经血清型鉴定，O139 5株，O15 2株，O55、O93、O9、O101、O119各1株。经多重PCR检测毒素基因和黏附素单抗检测菌毛，发现6个分离株带有SLT-Ⅱe基因，其余6株带有STb基因。单独表达F18茵毛的4株，F5 F41的1株，F41 F18的1株。F5 F41 F18的2株。药敏试验结果表明，多数分离株对恩诺沙星、庆大霉素、阿米卡星和壮观霉素高度敏感。 相似文献
19.
《中国畜牧兽医》2019,(12)
为了解西藏那曲市羊大肠杆菌的耐药情况,指导临床进行合理用药,本试验从那曲市采集羊新鲜无污染腹泻物92份,进行大肠杆菌显色培养基分离、革兰氏染色镜检、生化鉴定、分子生物学鉴定、致泻性大肠杆菌生化鉴定、药敏试验及耐药基因检测。结果显示,分离菌株在大肠杆菌显色培养基上呈蓝色菌落、革兰氏染色为粉红色的短杆菌,通过生化鉴定及23S rRNA的PCR检测得到26株羊源大肠杆菌,分离率为28.3%;其中25株符合致泻性大肠杆菌生化特性,致泻菌株分离率为27.2%。药敏试验结果显示,所得25株羊源大肠杆菌对氨苄西林的耐药性较高,耐药率为24.0%;对羧苄西林、卡那霉素的耐药性次之,耐药率为8%;对哌拉西林、头孢呋辛、庆大霉素、四环素、米诺霉素等药物耐药率为4%;对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星等药物极为敏感,可作为临床用药。5种耐药基因检测结果显示,bla_(TEM)基因检出率为100%,表明分离菌均含有相应的耐药基因。以上结果表明,西藏那曲市羊源大肠杆菌对多种药物耐药,提示在临床实践过程中应注重合理用药、联合用药,减缓大肠杆菌耐药性的产生。 相似文献
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利用F18菌毛a因子单克降抗体以及已建立的鉴定F18菌毛及其亚型的双重PCR法,对来自断奶仔猪水肿病和／或腹泻病例的60株VTEC、24株VTEC／ETEC以及24株ETEC的进行了F18菌毛检测,以了解F18ab^＋和F18ac^＋大肠杆菌在江苏省断奶仔猪群的分子流行病学。结果表明：通过F18菌毛a因子单克隆抗体,可检测出52株大肠杆菌为F18^＋,检出率为48．15％;而通过双重PCIL方法,共检测出63株大肠杆菌为F18^＋,检出率为58．33％,其中53株（49．07％）为F18ab^＋10株（92．6％）为F18ac^＋。另外还发现：在VTEC、VTEC／ETEC以及ETEC的菌株之间,这2种F18菌毛亚型的分子流行病学是不同的。在VTEC中,F18ab^＋,菌株37株（61．67％）,未发现F18ac^＋菌株;在VTEC／ETEC中,F18ab^＋菌株15株（62．50%）,F18ac^＋菌株8株（33．33％）;而在ETEC中F18ab^＋菌株只有1株（4．17％）,F18ac^＋菌株只有2株（8.33％）。以上数据表明：④PCR法检测F18菌毛优于单抗法;②F18菌毛是VTEC／ETEC、VTEC的重要致病因子,而在ETEC中则明显低于VTEC／ETEC和VTEC;⑧F18ab^＋菌株一般为SLT-IIe^＋,而F8ac^＋菌株一般为STI^＋。 相似文献