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1.
肾病变为主要特征的病雏中，采集典型病科，通过鸡胚接种、传代，分离到四株肾传支病毒（ＨＮ—Ｍ，ＨＮ—Ｚ，ＨＮ—Ｇ，ＨＮ—Ｃ）。该四株病毒均能适应鸡胚生长，并致鸡胚呈明显的卷曲胚和侏儒胚；其鸡胚适应毒能感用鸡胚肾细胞（ＣＥＫ），并致细胞病变（ＣＰＥ）；应用鸡脓毒或细胞毒回归雏鸡，可复制出与自然发病雏同样的特征性病变；每株无血凝性，以胰酶处理后可出现凝集价；经与７４国际标准毒单抗作细胞交叉中和试验及用克隆和标记的ＩＢＶ非编码区、非Ｓ１片段１０ｋｂ核酸探针作斑点杂交鉴定，确认ＨＮ－Ｍ株为澳大利亚Ｔ抹，另三株为Ｎ—１１５株。应用该四株分离毒制备的油乳剂灭活苗对河南近几年流行的肾型支气管炎起到了十分理想的防制效果． 相似文献
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乌骨鸡体内鸡肾传染性支气管炎病毒的分离鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
从具有鸡肾型传染性支气管炎临床病变特征的乌骨鸡体内分离到一株病毒。该病毒经鸡胚盲传代后，可引起４０％上鸡胚死亡，并出现典型的侏儒胚；人工感染雏鸡表现为肾肿大和尿酸盐沉积；能干扰新城疫ＬａＳｏｔａ株在鸡胚中的繁殖；病毒对氯仿和乙醚敏感，５６℃水浴３０分钟被灭活，而ＰＨ３和ＰＨ１１；不能直接凝集红细胞，但经１．５％胰酶处理后能凝集鸡红细胞（１；５２），这种血凝性可被传染性支气管炎病毒澳大利亚Ｔ株阳性血 相似文献
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应用鸡胚培养、电镜观察、血清学试验及病理组织学检查，分离与鉴定了来自河南省鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）免疫鸡群Ｈｅ１、Ｈｅ２、和Ｈｅ３三株ＩＢＤＶ毒株。鸡胚传代试验表明，Ｈｅ１和Ｈｅ２株连续传代到第４代出现规律性死亡和ＩＢＤ病变，而Ｈｅ３株在第１代时鸡胚即全部死亡，且出现ＩＢＤ典型鸡胚病变。Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株对易感鸡致病力有一定的差异。病死率分别为２０％、１０％和４０％，多数为弱毒株。免疫保护试验证明，用常规的ＩＢＤＶ血清Ｉ型病毒株Ｂ２疫苗对Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株的免疫保护试验，与对照组相比保护率分别为０％、０％和１０％。未死亡扑杀的免疫试验鸡法氏囊有不同程度的病理组织学病变，表明Ｉ型毒株疫苗对ＩＢＤ基本上无免疫保护作用。所分离的毒株可能是ＩＢＤＶ的变异株。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒肾型毒株血凝特性的研究 总被引：10，自引：0，他引：10
本文对鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）澳大利亚Ｔ株和分离的四株肾型毒株（ＢＪ＿（９３０１）、ＢＪ＿（９３０２）、ＴＪ＿（９３０１）、ＨＮ＿（９３０１）株）的血凝特性进行了系统研究。结果表明ＩＢＶ供试毒株经１～２％胰蛋白酶处理后，能凝集鸡和小鼠红细胞，同一毒株对两种红细胞的凝集价相近，且均能被ＩＢＶ澳大利亚Ｔ株血清所抑制。处理后的ＩＢＶ对鸡红细胞的血凝以缓冲液浓度０．０１～０．０５ＭｐＨ６．０～８．４为宜，对反应温度及稀释液种类无严格要求。ＩＢＶ的血凝活性能耐受３７℃２３天、５６℃１２小时、８０℃１．５小时，但在－３０℃、４℃和室温下保存２个月后，绝大部分丧失血凝活性。ＩＢＶ经０．２％甲醛、０．２％脱氧胆酸钠、２％硼氢化钠、０．０１Ｍ高碘酸钠３７℃灭活２４小时，仍能保持其血凝活性。从ＩＢＶ的血凝活性可被过量胰蛋白酶破坏和氯仿灭活，推断该血凝素可能是由脂质和蛋白质组成。 相似文献
5.
鸽新城疫病毒的分离及其生物学特性测定 总被引：18，自引：0，他引：18
用ＳＰＦ鸡胚从疑似鸽新城疫（鸽ＮＤ）病鸽群中分离到一株病毒ＱＬ株,该病毒株能凝集鸡红细胞（ＲＢＣ）,这种凝集作用能被抗新城疫病毒（ＮＤＶ）阳性血清抑制;用抗ＮＤＶ单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ测定分离株为阳性。分离株经肌肉注射能使鸽发病和死亡,出现与自然发病鸽一致的症状和病变,但肌注ＳＰＦ鸡只感染,不见临床症状。对该分离株作进一步生物学特性鉴定,按照国际上规定的ＮＤＶ毒力判定标准,测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）,结果ＭＤＴ为１０５小时、ＩＣＰＩ为１．３３、ＩＶＰＩ为１．０。试验结果表明本分离株为鸽新城疫病毒。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病野毒株的分离鉴定及河北弱毒株培育的研究 总被引：4，自引：3，他引：1
从河北省６个地区鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的鸡群中，分离到６株强毒，均能使易感鸡３６小时发病并死亡，发病率达６０～１００％，死亡率１０～７０％。人工感染鸡能见到与野外病例相同的病变。经血清学试验、鸡胚接种、电镜观察均证明，分离物为传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），其中有的毒株，毒力非常强。利用其中毒力最强的１株病毒，经鸡胚多次传代培养育成１株免疫原性好，免疫期长，免疫效果容易监测的弱毒株，经野外试验证明，该毒株是防治ＩＢＤ的一个很理想的毒株。 相似文献
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麻雀体内传染性法氏囊病病毒的分离鉴定及理化特性研究 总被引：5，自引：1，他引：4
从传染性法氏囊病（ＩＢＤ）阳性麻雀体内分离到了一株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体心ＥＬＩＳＡ试验和ＤＩＧ－标记ＩＢＤＶｃＤＮＡ探针班点杂交试验证明该病毒为ＩＢＤＶ。病毒可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞，产生细胞病变效应（ＣＰＥ）。病毒血清型为Ｉ型，病毒代谢抑制试验证明其基因组为ＲＮＡ，病毒核酸的电泳图谱呈两条特征带。病毒对乙醚不敏感ＰＨ２．０不能灭活可使病毒失感染性，５６℃作用３小时 相似文献
8.
对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）中等毒力毒株ＣＳ２株、ＮＤⅠ系、Ｒｏｋｉｎ、Ｋｏｍｅｒｏｖ和低毒力ＬａＳｏｔａ株病毒的脑内致病指数（ＩＣＰＩ）、鸡胚的半数感染量（ＥＩＤ５０）等指标进行了测定,结果是ＩＣＰＩ分别为１．２７～１．５２、１．６６～１．７０、１．４６、１．４３和０．２９～０．５;ＥＩＤ５０分别为１０＾７．５、１０＾７．５≥１０＾８．５、１０＾＾７．９和≥１０＾８．５／０．１ｍｌ。用１０倍剂量的ＣＳ２株病毒注射１月龄和１．５月龄ＳＰＥ雏鸡,均安全无不良反应,测定ＣＳ２株病毒保存期,结果在－２０℃保存６年的鸡胚２代（Ｅ２）、鸡胚６代（Ｅ６）、鸡胚１０代（Ｅ１０）毒的ＥＩＤ５０均≥１０＾７．５／０．１ｍｌ。ＮＤＣＳ２株病毒的各项指标均在中等毒力范围内,对鸡胚的半数感染量仍保持原毒（Ⅰ系）的特性,ＩＣＰＩ比原毒有所下 相似文献
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产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究 总被引：2，自引：0，他引：2
用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。 相似文献
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新城疫病毒山东强毒株的分离鉴定 总被引：14，自引：1，他引：14
从山东流行烈性传染病的鸡群中分离出7株具有血凝活性的病毒，该7株病毒的血凝活性均能被新城疫La Sota株标准阳性血清所抑制，但病毒不能被中和，仍能致死鸡胚。经分离鉴定，分离毒均为新成疫病毒株。通过鸡胚半致死量（ELD50）、最小致死量致鸡胚的平均时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内致死指数（ICPI）、6周龄雏鸡静脉致死指数（IVPI）、血凝解脱及血凝素稳定性等试验表明：7株分离病毒均为新城疫病毒强毒性，其毒力与标准强毒株F48E9株相似。 相似文献
11.
NDV长春株生物学特性及与国外毒株HN蛋白基因的同源性比较 总被引：4，自引：2，他引：2
以新城疫病毒（NDV）长春株接种9日龄SPF鸡胚增殖后,进行了蚀斑纯化（三代）鉴定,差数、蔗糖密度梯度离心提纯和生物学特性鉴定。结果表明,该病毒的鸡胚平均致死时间（MDT）大于168h,雏鸡脑内致死性（ICPI）为0.25,雏鸡静脉致死性（IVPI）为0,血凝解脱时间超过120h,血凝素热稳定性56℃ 5min 仍具有血凝活性。系统发育进化树分析表明,NDV长春株与La Sota株亲缘关系最近,为弱毒株。参考多株NDV HN基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR一次性扩增出NDV长春株的全长HN基因。将该HN基因插入pKS（-）后,进行了序列测定。序列分析表明,该HN基因苷酸长度为1731bp,编码577个氨基酸,序列中有5个糖基化位点,12个半胱氨酸残基,与国外发表的NDV毒株序列相符,核苷酸同源性为88.1%～98.8%,推导的氨基酸同源性为91.1%～98.8%。 相似文献
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鹅副粘病毒NA-1分离株HN蛋白基因的克隆与序列分析 总被引：9，自引：0，他引：9
鹅副粘病毒分离株NA-1经11日龄鸡胚增殖后纯化.提取病毒的基因组RNA,采用RT-PCR扩增出与预期设计的1.7kb大小相符合的特异条带.将扩增产物提纯后克隆入pMD 18-T载体,经纯化、筛选及酶切鉴定后,初步获得了含鹅副粘病毒HN基因的阳性克隆,并对阳性克隆进行测序.测序后拼接得出HN基因的全序列长度为1 740bp,该基因的ORF总长为1 716 bp,编码571个氨基酸.与GenBank下载的15株参考毒株比较HN基因编码区全核苷酸序列,发现所测NA-1毒株与参考毒株YG97核苷酸序列同源性为97.3%,与F48E9同源性为84.5%,与La Sota为82.2%.同源性分析表明NA-1相对于NDV在HN基因上发生了较大的变异. 相似文献
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新城疫病毒(NDV)的HN蛋白是一个多功能蛋白,具有血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)两种活性,在病毒感染过程中扮演重要角色。本研究利用反向遗传操作技术,将NDV强毒株F48E9的HN基因替换弱毒株rLaSota的HN基因,获得嵌合病毒rL-F48E9HN。收获病毒尿囊液,提取基因组RNA,进行序列分析,结果显示嵌合病毒基因组的HN基因获得了正确替换。嵌合病毒在鸡胚内的生长特性与亲本株LaSota一致,与F48E9的生长特性相差甚远。嵌合病毒红细胞吸附性明显增强,较rLaSota株增加51%,而细胞融合作用无明显变化。rL-F48E9HN的鸡胚平均致死时间(MDT)为148 h,脑内致病指数(ICPI)为0.43,静脉接种致病指数(IVPI)为0,说明rL-F48E9HN的毒力仍然属于弱毒力范围,而没有达到中等毒力或者强毒力。 相似文献
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【目的】 试验旨在构建一种基因Ⅶ型新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）嵌合疫苗,并对其免疫效力进行评估。【方法】 利用反向遗传学技术,以含有禽偏禽腮腺炎病毒2型（Avian metaavulavirus-2,AMAV-2） Y2株基因组的重组质粒pT7-Y2为模板,将Y2株的F和HN蛋白的胞外区替换为基因Ⅶ型NDV HB0901株的F和HN蛋白的胞外区,将HB0901株的F蛋白裂解位点突变为LaSota弱毒株的F蛋白裂解位点,构建嵌合重组病毒rY2-FHNR株。对rY2-FHNR株的增殖特性、致病力及遗传稳定性等生物学特性进行检测,并通过接种2周龄SPF鸡评估rY2-FHNR株的免疫原性及其免疫血清与Y2株的交叉反应性,利用NDV NP蛋白的间接ELISA方法对免疫血清进行检测,验证其鉴别诊断效果。【结果】 试验成功获得了嵌合重组病毒rY2-FHNR株,生物学特性检测结果显示,rY2-FHNR株在鸡胚中的增殖滴度和致病性符合弱毒特征,其鸡胚传代的遗传稳定性良好。rY2-FHNR株可诱导机体产生针对NDV的抗体,且免疫血清不与rY2株抗原发生交叉反应。通过NDV NP ELISA抗体检测方法可以实现区分疫苗免疫与野毒感染。【结论】 本试验研发了一种基因Ⅶ型NDV嵌合候选疫苗,为基因Ⅶ型NDV的监测、防控和净化提供了技术支撑。 相似文献
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在鸡胚上接种鸡传染性支气管病毒（M41、H120、HN99株）后6 d内,每天称量胚体和各自种蛋的重量,计算胚体/种蛋重量的比值（EE值）。EE值与未接种病毒的对照组鸡胚相比,计算出最小感染量,EE指数通过接种过IBV的鸡胚EE值和对照组EE值相比计算出来。结果表明,在接种M41株和HN99株后第4天EE值与对照组差异显著,在接种H120株后第5天EE值与对照组差异显著,可初步判定是被传染性支气管炎病毒感染,这种方法可更快更有效的观察胚体损伤程度,尤其适用于需经传代才能看到矮小化现象的野毒株。 相似文献
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鹅副粘病毒分离株NA-1株经11日龄鸡胚增殖后纯化。提取病毒的基因组RNA，采用RT-PCR扩增出与预期设计的1．7kb大小相符合的特异条带。将扩增产物提纯后克隆入pMD18-T载体，经纯化、筛选及酶切鉴定后，初步获得了含鹅副粘病毒HN基因的阳性克隆，并对阳性克隆进行了测序。测序后拼接得出HN基因的全序列长度为1740bp，该基因的ORF总长为1716bp，编码571个氨基酸。与GenBank下载的15株参考毒株比较HN基因编码区全核苷酸序列，发现所测NA-1株与国内标准强毒株F48E9核苷酸的同源性为84．5％，氨基酸的同源性为89．5％；与传统的疫苗株La Sota核苷酸的同源性为82．2％，氨基酸的同源性为88．5％；与鹅源禽副粘病毒SF02株核苷酸的同源性为97．1％，氨基酸的同源性为97．4％；与鹅源禽副粘病毒YG97株核苷酸的同源性为97．3％，氨基酸的同源性97．4％。说明NA-1株和SF02株、YG97株亲缘关系较近，它们三者可能有着共同的来源。根据基因树分析，NA-1株应属于基因VII型新城疫病毒。由此更进一步证实新城疫可以感染水禽，且对鹅具有高度的致死性。 相似文献
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用SPF鸡胚从病死鸽的内脏组织中分离到一株新城疫病毒(命名为GD-09株),该病毒能使鸡红细胞发生凝集,且这种凝集能被鸡新城疫标准阳性血清所抑制。经测定,其鸡胚平均死亡时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内接种的致病指数（ICPI）分别为57.6 h、1.74,表明该新城疫病毒为强毒。通过分析其融合蛋白（F）发现,F蛋白多肽裂解位点为112RRQRRF117,符合NDV强毒株裂解位点氨基酸序列。F基因分型及氨基酸同源性比较发现,GD-09株属于基因Ⅵ型,与La sota、F48E9、B1、V4等传统毒株同源性较低,与鸽源NDV同源性较高。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒HN99株S1基因的克隆与序列测定 总被引：1，自引：0，他引：1
根据基因库中收录的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)S1基因的序列 ,设计了一对引物并采用RT -PCR扩增了鸡传染性支气管炎病毒HN99株的S1基因 ,扩增产物进行了克隆、测序 ,获得了IBVHN99株S1基因片段 ,其大小为1 739bp(含前导序列 ) ,其核苷酸序列与H1 2 0、H52、M41、Gray、Holte的S1基因核苷酸序列同源性较低 ,分别为 79.1 %,79.2 %,77.3%,77.8%,79 .4%,有大量的点突变并伴有基因插入和缺失 ;IBVHN99株的S1基因推导的氨基酸与H1 2 0、H52、M41、Gray、Holte株氨基酸的同源性分别为80 .1 %,79.9%,79.5%,78.5%,78.5%,经S1基因系统进化分析 ,提示IBVHN99株与其它各毒株的亲缘关系较远 ,初步证实IBVHN99株为一新的IBV毒株 相似文献
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肾型鸡传染性支气管炎病毒新疆株的生物学特性研究 总被引：1，自引：1，他引：0
通过致病力试验和免疫原性检测对肾型鸡传染性支气管炎病毒新疆株(IBVXJ-2株)进行生物学特性的研究。致病力检测结果证实,IBVXJ-2株可以致SPF鸡胚卷缩、僵化,EID50达10-8.3/0.1 mL;鸡胚肾细胞在接毒后96 h出现皱缩、脱落等明显的细胞病变;对20日龄非免疫鸡攻毒后第2天,试验鸡出现甩鼻、伸颈张口呼吸等症状。将IBVXJ-2株抗原经乳化后接种1月龄非免疫鸡,在接种后22 d和44 d用ELISA和HI检测到了IBV特异性抗体。 相似文献