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猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊治 总被引：1，自引：0，他引：1
通过对某猪场出现的疫情进行流行病学调查、临床症状、病理剖检、细菌分离培养鉴定及荧光定量PCR诊断,确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与副猪嗜血杆菌(HPS)混合感染。现场采集疑似副猪嗜血杆菌病的典型病料,用TSA培养基分离细菌,经菌落形态观察、镜检、卫星现象及PCR检测,确定分离菌为副猪嗜血杆菌。药敏试验结果表明该分离株对先锋Ⅵ、阿莫西林、壮观霉素、庆大霉素均敏感。采用PRRSV核酸检测试剂盒对病料进行检测结果为阳性。综合判定该场为PRRSV和HPS混合感染。 相似文献
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副猪嗜血杆菌PCR快速诊断方法的建立 总被引：7，自引：0，他引：7
副猪嗜血杆菌营养要求比较苛刻,常规生化试验检测方法比较烦琐,本研究针对副猪嗜血杆菌16SrRNA基因特异性PCR引物序列,合成一对PCR引物,建立相应的PCR检测方法,同时对该方法的灵敏性、特异性等实验。结果显示可检测出浓度为2．8×10^3CFU／mL的副猪嗜血杆菌表明该方法灵敏度高;对大肠杆菌、链球菌、巴氏杆菌、沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌进行PCR扩增均不获得任何条带,表明该方法特异性较强。所以该方法对于临床快速检测副猪嗜血杆菌具有重要意义。 相似文献
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副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌多重PCR检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
在已建立的副猪嗜血杆菌(HPS)、多杀性巴氏杆菌(Pm)、胸膜肺炎放线杆菌(APP)的单重PCR检测方法的基础上,通过对扩增条件的优化,利用一次PCR反应可同时扩增出APP的256 bp、Pm的457 bp、HPS的822 bp的特异性片段,建立了HPS、Pm、APP的多重PCR实验室诊断方法。该复合PCR可检测60 pg的HPS、120 pg的Pm、50 pg的APP。利用该方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性猪体内分离到的39株细菌,结果显示HPS、Pm、APP分别为12、16、2株,对39份病料的检测与常规细菌分离鉴定结果一致,可见该方法适用于HPS、APP、Pm的临床快速检测。 相似文献
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为了建立基于SYBR Green Ⅰ的快速检测副猪嗜血杆菌(HPS)的实时荧光定量PCR方法,参照GenBank公布的HPS的infB基因序列(DQ:781933.1),设计特异性引物;提取HPS基因组,进行PCR扩增,回收目的片段;构建阳性标准模板,建立标准曲线;验证其敏感性、重复性和特异性。结果显示,本试验得到了阳性标准质粒,并建立了标准曲线,线性关系在102copies/μL～108copies/μL检测范围内良好;该方法敏感性达到10copies/μL,比常规PCR高100倍,重复性试验变异系数均小于2.5%,同时对HPS具有良好的特异性。结果表明,本试验建立的副猪嗜血杆菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法可用于临床对HPS的快速诊断和定量检测。 相似文献
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猪的胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 总被引：9，自引：0，他引：9
在已经建立猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、猪多杀性巴氏杆菌(PM)、副猪嗜血杆菌(HPS)的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的优化,成功地建立了APP、PM、HPS的复合PCR实验室诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增出APP的342bp、PM的457bp和HPS的821bp的特异性片段。该复合PCR能同时检测到100个每种细菌或50pg的APP或HPS的DNA和500pg的PM的DNA。该三重复合PCR的敏感性同已报道的单PCR一致。该方法的建立对临床上进行这3种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。 相似文献
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副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与初步应用 总被引：3，自引：0，他引：3
根据副猪嗜血杆菌16 S rRNA基因设计了一对引物,通过最佳条件摸索扩增出大小为821 bp的特异目的基因片段,建立了快速检测副猪嗜血杆茵的PCR方法,该方法最低检出量达10-3 ng,且对大肠埃希茵、金黄色葡萄球菌、传染性胸膜肺炎放线杆菌和巴氏杆茵等均无交叉反应.用该PCR方法从门诊送检的病料中检测出4株副猪嗜血杆菌,并对分离株SH0854P的PCR扩增产物进行测序与对比分析,其与已发表的GenBank中的相关菌株的同源性为97.3%～100%. 相似文献
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猪群中7种高发传染病多重PCR诊断方法的建立 总被引：4，自引：0，他引：4
[目的]建立猪瘟、蓝耳病(又称猪繁殖与呼吸综合征)、圆环病毒2型感染、猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌感染和猪支原体感染7种猪病的多重PCR诊断方法.[方法]根据GenBank发表的核苷酸序列设计了分别针对猪瘟、蓝耳病、圆环病毒2型感染、猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病、猪多杀性巴氏杆菌感染和猪支原体感染的2套多重PCR特异性引物,优化多重PCR反应条件后进行敏感性与特异性评价.[结果]建立的2套多重PCR诊断方法对其他常见猪病痛原的基因组无特异性扩增,检测病原基因组最低浓度可达到pg级.[结论]该研究建立的2套多重PCR诊断方法可以用于猪群中上述7种猪病痛原的单一感染或混合感染的鉴别诊断. 相似文献
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副猪嗜血杆菌的分离鉴定 总被引：10，自引：0，他引：10
副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（HPS）引起猪的以纤维素性浆膜炎、多发性关节炎和脑膜炎为特征的传染病。随着养殖规模的不断扩大和引进国外种猪，副猪嗜血杆菌病在我国猪场的病发率逐年上升。HPS血清型复杂，目前已知15个血清型，但各国各地流行的血清型不尽相同，且各型之问缺乏交叉保护，因此分离HPS地方菌株，了解其流行血清型，对地区预防和控制HPS有着重大的临床意义。由于HPS对培养条件较为苛刻，临床病料分离培养HPS有一定的难度，目前国内分离HPS报道不多，本文对广东地区疑似副猪嗜血杆菌病病料分离并鉴定了3株副猪嗜血杆菌，报道如下。 相似文献
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为了进一步研究副猪嗜血杆菌(HPS)ompP2基因的功能,根据已发表的副猪嗜血杆菌核苷酸序列,设计并合成1对引物,PCR扩增HPS LZ株外膜蛋白ompP2基因,获得大小为1 158bp的核苷酸片段,该片段纯化后克隆至pEASY-Blunt载体,转化后鉴定,再与真核表达质粒pCI-neo经过酶切和连接反应,转化感受态大肠杆菌Trans-T1,双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒并测序。通过脂质体法将pCI-neoompP2转染猪肺泡巨噬细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测重组质粒是否表达。结果显示,成功构建了含ompP2基因的副猪嗜血杆菌真核表达载体pCI-neo-ompP2,提取转染该质粒的猪肺泡巨噬细胞的mRNA,进行RT-PCR扩增,在1 000bp~2 000bp之间可见1条明显的条带。Western blot发现在42ku处出现目的条带。试验结果为后期研究副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞的机理奠定了基础。 相似文献
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本文系统总结了我国副猪嗜血杆菌(HPS)病的流行特点:一是近年来我国副猪嗜血杆菌(HPS)病流行广泛危害严重。主要体现,第1是病原学调查在全国多个省区均能成功分离副猪嗜血杆菌(HPS),且分离率多为28.3%-42.63%;第2是血清学调查在全国多个省区的未免疫猪群中其抗体检出阳性率较高,第3是分子流行病学调查其核酸检出阳性率较高。 相似文献
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《畜牧与兽医》2016,(9):100-103
为了同时检测引起猪关节病的猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)、副猪嗜血杆菌(Haempohlius parasuis,HPS)和猪丹毒丝菌(Erysipelothrix rosenbach),分别设计针对SS2的cps2J基因、HPS和猪丹毒丝菌的16S rRNA基因的3对特异性引物,建立了同时检测以上3种病原的多重PCR方法,并对反应条件进行优化,测试多重PCR方法的特异性和灵敏度。对采自8个规模猪场的猪关节病病料进行检测,从72份猪关节液样品中检出2株猪链球菌2型、1株副猪嗜血杆菌和2株猪丹毒丝菌,结果显示与常规PCR检测结果一致,表明建立的多重PCR方法敏感、特异、快速,可用于猪关节病重要病原体的检测。 相似文献
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副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立一种快速鉴别诊断副猪嗜血杆菌的方法,本试验针对副猪嗜血杆菌infB基因序列,利用Premier5.0软件设计并合成了1对特异性引物,建立了针对副猪嗜血杆菌的PCR鉴别诊断方法,优化了退火温度,检测了该方法的敏感性和特异性,结果表明,本试验建立的PCR检测方法的最佳退火温度为49℃。敏感性试验表明,该PCR检测方法最低能检测到的DNA浓度为18.1×10-6μg/mL。通过特异性试验表明,本方法仅可由副猪嗜血杆菌中扩增出特异性条带,在金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等病原菌中扩增不出相应的条带,表明该方法具有较高的特异性。同时,通过对本方法检测出的阳性样品infB序列分析发现,与GenBenk中公布的副猪嗜血杆菌infB序列同源性均在98.2%~99%。表明建立的方法灵敏度高、特异性强,可以应用于副猪嗜血杆菌的实验室诊断。 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分别为342bp,485bp和1258bp。复合PCR对1～12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株,6株多杀性巴氏杆菌标准株,1～15型副猪嗜血杆菌以及25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分离株的基因组DNA作为模板进行检测,均获得预期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等14种常见细菌作为阴性对照进行PCR检测,结果仅有支气管败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物。复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为14pg、34pg和37pg。结论本研究建立的复合PCR特异性好,敏感性高,可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测。 相似文献
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近年来,在CSFV、PRRSV、PCV2等免疫抑制性"底色病"的作用下,副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)感染引起的副猪嗜血杆菌病(也称革拉瑟氏病)的流行和致病不断加重,呈全球性分布.目前,HPS是哺乳和保育仔猪感染死亡的主要病原之一,感染后常引起以多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征的全身感染性疾病.HPS对抗生素已耐药,免疫疫苗接种和加强饲养管理成为了预防控制HPS感染的主要途径.由于HPS地方性流行特征明显,且血清型复杂,感染HPS后的猪群很难治愈.本文主要从HPS的病原学、流行病学、生物学特性、检测方法及耐药现状等方面进行概况,以期为更好地了解HPS及其相关疾病提供参考. 相似文献
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副猪嗜血杆菌病以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为主要特征,严重危害仔猪和青年猪的健康。本文对副猪嗜血杆菌病的临床症状、病理学变化、酶联免疫吸附试验、PCR方法及环介导等温扩增等技术的研究进展进行综述,以期为副猪嗜血杆菌病的早期诊断和及时防治提供一定的指导。 相似文献