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为提高普氏原羚粪便DNA提取效果,在总结传统提取粪便DNA方法的基础上,设计了新的提取方法.该方法以NaCl替代TE溶解粪便样品.增加溶茵酶用量以减少蛋白酶K用量.经琼脂糖凝肢电泳和PCR扩增12SrRNA片段对改进方法与传统提取粪便DNA方法进行比较,发现用改进方法提取的DNA质和量均比传统方法好,且可满足一般分子生物学实验的需要.扩增的普氏原羚12SrRNA片段已经测序.并递交GenBank,登录号为EU247756.新方法不仅克服了传统提取法中DNA降解严重的问题.而且有效地解除了粪便DNA对Taq酶的抑制作用.为普氏原羚遗传多样性保护提供技术支持. 相似文献
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本试验采集蒙古马新鲜粪便样品,采用酚－氯仿抽提法和2种细菌基因组DNA提取试剂盒法进行样品中细菌基因组DNA的提取。通过DNA浓度和纯度的测定,并将其作为模板扩增细菌16S rDNA V3区特异性片段对提取效果进行比较,从而找出更适合蒙古马粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果显示,3种提取方法得到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板,其中B试剂盒法提取的DNA数量较多,且纯度高,更适合用于提取蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。 相似文献
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应用PCR检测隐孢子虫卵囊的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊，从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中，直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作PCR模板，用1对人工合成寡核苷酸作为PCR引物，扩增片段大小为452bp。优化了Mg^2 浓度、引物浓度和dNTP浓度，并进行了特异性检验。建立的PCR具有隐孢子虫属特异性，不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段，而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后，最低检测值100个卵囊／ml；从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA，尔后经过DNA纯化试剂盒纯化，PCR最低检测值为10^5个卵囊/g粪便。 相似文献
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对血液中提取基因组DNA的方法加以改进,获得了一种提取猪肾组织中DNA的有效方法.试验表明,利用SDS裂解,氯仿、异戊醇抽提母猪肝脏中基因组DNA,得到的DNA纯度较高,可用来进一步进行RAPD分析和PCR扩增,用于各种分子生物学实验. 相似文献
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为建立一种适用于临床检测胞内劳森氏茵(Lawsonia intracellularis,LI)的检测方法,本研究通过比较提取粪便样品基因组DNA的不同方法,结合PCR方法特异性扩增aspA基因检测临床样品中的LI.敏感性试验表明,阳性样本最低检出量为1.7×102 copie/μL;特异性试验表明,该方法对大肠杆菌、沙... 相似文献
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《中国动物传染病学报》2018,(5)
弓形虫病是一种分布广泛、危害严重的人兽共患寄生虫病。为了比较不同试剂盒提取猪肉中弓形虫DNA的效率和质量及对弓形虫PCR检测的影响,本试验采用6种商品化基因组DNA提取试剂盒,对添加了不同数量弓形虫速殖子的猪膈肌样品进行DNA提取,作为模板,进行PCR检测,观察不同试剂盒提取DNA的扩增效果。结果显示,EZNA Tissue DNA Kit、TIANamp Genomic DNA Kit和FastDNA Spin Kit for Soil三种方法对含有1×101个以上数量速殖子的猪膈肌样品提取的DNA,均能被检测为阳性;TIANamp Genomic DNA Kit提取的DNA作为模板进行PCR检测,其扩增特异性良好。利用TIANamp Genomic DNA Kit对126份上海屠宰场采集的猪膈肌样品进行DNA提取,作为模板进行PCR检测,结果阳性率为3.97%(5/126),表明TIANamp Genomic DNA Kit提取猪肉中携带的弓形虫DNA具有高效、稳定、价廉的优点,适合田间猪肉中携带弓形虫的调查研究应用。 相似文献
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巢式PCR检测隐孢子虫卵囊的研究 总被引：13，自引：0，他引：13
隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作起始PCR(Primary PCR)模板,以起始PCR的产物为模板进行巢式PCR(Nested PCR),用2对人工合成寡核苷酸分别作为两个PCR的引物,扩增片段大小分别为1325bp和820bp。优化了Mg2+浓度、引物浓度和dNTP浓度,并进行了特异性检验。建立的巢式PCR具有隐孢子虫属特异性,不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段,而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后,起始PCR和巢式PCR最低检测值卵囊分别为2 86×103个/ml和≤2 86个/ml;从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA,尔后经过DNA纯化试剂盒纯化,其起始PCR和巢式PCR粪便中卵囊最低检测值分别为2 86×107个/g和≤2 86个/g。有望发展为试剂盒。 相似文献
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野生动物粪便在濒危物种遗传结构研究中的应用 总被引：3，自引：0，他引：3
粪便DNA提取的质量与动物的取食、样品采集地的环境温度、粪便的保存方法有着密切的关系。对于含纤维素较高的食物通过动物的肠道时会有较多的肠道细胞脱落，因此可以提高样品中DNA的含量；当样品采集地的环境温度较高时容易使粪样中的DNA降解，将会降低样品中DNA的含量；然而生活在不同生境类型内的动物，应采取不同的粪便保存方法，这样可以提高样品的质量。在粪便DNA提取方法中，常规法是一种简单、省时、经济的方法。随着粪便DNA分析技术的发展，这项技术在将来的濒危物种遗传结构的研究中会得到广泛的应用。 相似文献
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《中国畜牧兽医文摘》2015,(2)
提取DNA是利用PCR技术检测纤维的关键技术难点。对牦牛绒DNA的提取方法进行了试验,通过PCR扩增的方法进行验证。结果表明:使用Ta Ka Ra Mini BEST Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.5.0试剂盒,将纤维样品尽量处理成粉末状,并在样品经裂解液处理后先离心除去其中尚未完全溶解的纤维,然后进行PCR扩增是比较有利的,完全能够得到满足PCR扩增要求的DNA样品。 相似文献
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目的:建立检测家犬粪便中细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫DNA的PCR方法,为开展流行病学监测提供检测手段.方法:收集玛曲县牧区家犬111只,收集粪便标本,提取犬粪便DNA,进行PCR技术扩增,扩增产物鉴定.建立犬粪细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫PCR诊断方法,对此诊断方法敏感性和特异性进行鉴定. 相似文献
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采用反复冻融法、玻璃珠法和超声波+反复珠磨的方法提取犊牛盲肠的微生物总DNA,并对以上三种方法进行比较,从中确定最佳的方法,以实现普通实验条件下成功提取符合PCR扩增要求的DNA.经紫外分光光度分析表明,超声波+反复珠磨的方法所得的DNA的A<,260>/A<,280>的比值为1.81,0.8%琼脂糖凝胶电泳结果显示,所提DNA片段分子量大于20 kb,适于酶解和PCR扩增要求.以提取的DNA样品为模板,利用细菌通用引物,对其16S rDNA进行PCR扩增,获得了1.7 kb大小特异性很好的预期条带.这是研究犊牛盲肠微生物的关键一步. 相似文献
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《四川草原》2021,(1)
为从野外采集的禾本科牧草样品中获得优质DNA,在有限的试验条件下找到最合适的样品保存方法。本研究在野外试验站采集了8种禾本科牧草,分别采用变色硅胶、-20℃、4℃、自然风干和45℃烘干等5种方法进行保存,保存一个月后进行DNA的提取。通过琼脂糖凝胶电泳、ISSR-PCR以及DNA的浓度和纯度对比,对几种保存方法下保存的牧草样品中所提取DNA的效果和质量进行鉴别。此外,为了解样品中多糖和多酚含量对DNA提取效果的影响,本研究还对采集样品多糖和多酚含量与DNA浓度和纯度进行了相关性分析。结果显示变色硅胶的保存效果最佳,烘干的保存效果最差,其他3种保存方法对不同植物的保存效果不能确定。多糖和多酚含量与DNA的提取效果、提取质量无明显关系,与DNA的浓度和纯度也无显著相关性,二者不是影响本研究DNA提取效果的主要因素,本研究中DNA提取效果的差异性是由于保存方法的不同造成的。在野外试验采集禾本科牧草样品时,如需要获得优质的DNA进行深入的试验,用变色硅胶保存样品,是一种便捷、效果优越的保存方法。 相似文献