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猪的胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 总被引：9，自引：0，他引：9
在已经建立猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、猪多杀性巴氏杆菌(PM)、副猪嗜血杆菌(HPS)的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的优化,成功地建立了APP、PM、HPS的复合PCR实验室诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增出APP的342bp、PM的457bp和HPS的821bp的特异性片段。该复合PCR能同时检测到100个每种细菌或50pg的APP或HPS的DNA和500pg的PM的DNA。该三重复合PCR的敏感性同已报道的单PCR一致。该方法的建立对临床上进行这3种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。 相似文献
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副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌多重PCR检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
在已建立的副猪嗜血杆菌(HPS)、多杀性巴氏杆菌(Pm)、胸膜肺炎放线杆菌(APP)的单重PCR检测方法的基础上,通过对扩增条件的优化,利用一次PCR反应可同时扩增出APP的256 bp、Pm的457 bp、HPS的822 bp的特异性片段,建立了HPS、Pm、APP的多重PCR实验室诊断方法。该复合PCR可检测60 pg的HPS、120 pg的Pm、50 pg的APP。利用该方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性猪体内分离到的39株细菌,结果显示HPS、Pm、APP分别为12、16、2株,对39份病料的检测与常规细菌分离鉴定结果一致,可见该方法适用于HPS、APP、Pm的临床快速检测。 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌快速PCR检测方法的建立 总被引：11，自引：0，他引：11
根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的 apx A基因序列设计了 1对可扩增 1个4 2 2 bp片段的特异性引物 ,成功地建立了一种检测 APP的快速 PCR方法 ,并确定了其特异性和灵敏性。对血清 1～ 13型等 13个 APP标准株均能扩增出预期 4 2 2 bp的特异性条带 ;对猪副嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌的扩增结果为阴性。对 APP菌液最低检出浓度为 6 8CFU/ m L(D6 0 0 为 0 .0 0 3)。 12株临床分离菌的 PCR扩增结果与生化鉴定结果是一致的。该方法能从病料中分离培养 8h的混合菌群中快速检测APP,可用于 APP的快速诊断和流行病学的调查。 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌的分离及PCR诊断方法的建立 总被引：14，自引：3，他引：14
APXⅣA基因是新发现的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的RTX毒素基因,本文通过PCR方法从APP标准血清1型及临床分离到的3株野毒株中扩增出长为442 bp的部分APXⅣA基因,而从其它引起猪呼吸道疾病的细菌中无法扩增出此片段.通过玻板凝集试验鉴定这三株野毒株为血清1型APP.所建立的PCR方法能检测的DNA量最高敏感度为28pg.表明本文所建立的对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的PCR诊断方法具有较高的特异性和敏感性. 相似文献
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猪肺炎支原体、多杀性巴氏杆菌和猪胸膜肺炎放线杆菌三重PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立简便、快速及灵敏度高的同时对猪肺炎支原体(Mh)、多杀性巴氏杆菌(PM)和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(App)三重PCR的检测方法,本研究针对这3种病原的基因分别设计3对特异性引物,通过PCR方法分别扩增出116bp(Mh)、253bp(PM)和473bp(App)的目的片段,其最低检出量为4个拷贝;而对肺炎双球菌、支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌和链球菌的PCR扩增则结果均呈阴性。表明该方法具有很好的敏感性和特异性。利用该检测方法对某屠宰场472头猪肺组织病料进行检测,其结果显示:Mh、PM和App的阳性检出率分别为19.27%、5.5%和2.75%;而ELISA检测的阳性检出率分别为18%、5.08%和1.9%。这两种方法对阳性的样品检测的平均符合率为90%;此外,多重PCR与病原分离培养方法的符合率为100%。 相似文献
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猪链球菌2型(SS-2)、猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、多杀性巴氏杆菌(PM)是引起"猪无名高热症"的部分病原菌,为建立可以同时检测SS-2、APP和PM的多重PCR快速诊断方法,根据GenBank中公布的有关基因序列,设计了3对引物分别用于扩增CPS2J(SS-2),ApxIVA(APP),KMT1(PM)基因的片段。敏感性和特异性结果表明,本方法对3种病原菌的最低DNA检测量分别为48.3pg(SS-2),581pg(APP),5pg(PM),而对大肠杆菌、沙门菌、猪附红细胞体、刚地弓形虫的扩增结果均为阴性。35份临床样品的多重PCR检测结果表明,有7例SS-2,5例APP,7例PM,与生化试验的鉴定结果一致。表明所建立的多重PCR方法能够对SS-2、APP和PM单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。 相似文献
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以HPS的16SrRNA中的基因序列设计合成引物，进行PCR扩增，标准菌株NR4、SW124、SW114、SW140和分离株XX、FS在预计的821bp位置上扩增出特异性条带，NJING株、胸膜肺炎（APP）等没有特异性条带产生。这证明PCR检测副猪嗜血杆菌具有较高的特异性和敏感性。 相似文献
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为了解副猪嗜血杆菌病在贵州对猪群的危害和流行规律、进一步开展副猪嗜血杆菌病的防治研究提供参考依据,特进行副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与初步应用研究。根据副猪嗜血杆菌（HPS）16S rRNA基因序列设计1对引物,通过优化组合试验,对贵州省分离的HPS进行PCR扩增,扩增出长为650bp的目的基因片段,而大肠埃希氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、葡萄球菌等扩增结果为阴性。采用该方法对贵州发病猪群中350头疑似病例进行PCR检测,检出率为8％～49％。该方法检测副猪嗜血杆菌敏感性高、特异性好,可用于副猪嗜血杆菌的快速诊断。 相似文献
11.
Fablet C Marois C Dorenlor V Eono F Eveno E Jolly JP Le Devendec L Kobisch M Madec F Rose N 《Research in veterinary science》2012,93(2):627-630
Relationships between macroscopic lesions and Polymerase Chain Reaction (PCR) detection of Mycoplasma hyopneumoniae (Mhp), Pasteurella multocida (Pm), Actinobacillus pleuropneumoniae (App), Haemophilus parasuis (Hps) and Streptococcus suis (Ssuis) of the lungs of 3731 slaughter pigs from 125 herds were assessed in France. Pneumonia and pleuritis were the most frequent lesions (69.3% and 15% of the lungs, respectively). Mhp, Pm, App, Ssuis and Hps were detected in 69.3%, 36.9%, 20.7%, 6.4% and 0.99% of the lungs, respectively. Mhp and Pm were associated with pneumonia at both the pig and herd levels. Pleuritis was not associated with any pathogen at the pig level, but was associated with a high percentage of pigs PCR-positive for App at the herd level. Measures focused on control of Mhp, Pm and App should significantly reduce the occurrence of both pneumonia and pleuritis. 相似文献
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Markowska-Daniel I Urbaniak K Stepniewska K Pejsak Z 《Polish journal of veterinary sciences》2010,13(1):29-36
Antibiotic susceptibility of bacteria isolated from nasal swabs and lungs of pigs, to 16 commonly used antibiotics, was determined by disc diffusion test. beta-lactams showed the best activity against Streptococcus suis (S. suis) (> 99% of susceptible strains). The lowest sensitivity of S. suis was evidenced to: tylosin, tetracycline and neomycin (50%, 40% and 25%, respectively). Isolates of Escherichia coli (E. coli) demonstrated the highest susceptibility to cephalosporin (85% strains), gentamicin and norfloxacin (over 74%). The lowest susceptibility of E. coli was demonstrated to tiamulin and penicillin (11.3% and 1.9%, respectively). Over 80% of Actinobacillus pleuropneumoniae (App) strains were susceptible to all antibiotics tested. The highest resistance of App, but demonstrated by below 20% of tested isolates only, was evidenced to neomycin and LxS. Isolates of Pasteurella multocida (Pm), Haemophilus parasuis (Hps) and Arcanobacterium pyogenes (A. pyogenes) were highly susceptible to the most antibiotics included in the analysis. The comparison of the in vitro susceptibility of pathogens to the chemotherapeutics used on Polish farms for the therapy of bacterial infection of pigs within the last five years and the last 10 years, showed an increasing percent of E. coli and S. suis strains resistant to commonly used antibiotics. It is also shown that Pm, Hps, App and A. pyogenes isolates were continuously susceptible to the most chemotherapeutics applied. 相似文献
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【目的】 阐明引起河南漯河某规模化猪场仔猪呼吸道症状的主要细菌性病原体及其生物学特性。【方法】 无菌采集发病仔猪的口鼻拭子及病死猪的胸腔积液及肺脏、肝脏、脾脏等组织器官,进行病原的PCR检测,并通过细菌分离培养、形态学观察、卫星试验、16S rDNA基因PCR扩增、系统进化树构建、多重PCR鉴定分离菌的血清型、致病性试验和药敏试验等对分离菌株进行生物学特性分析。【结果】 在含有V因子的BHI固体平板上生长出圆形、表面光滑湿润、无色透明的微小菌落,在不含V因子的培养基上不生长;分离菌株经革兰染色,镜下可见革兰阴性菌,多呈单个存在的球杆、长杆状;在金黄色葡萄球菌的培养物周围形成典型的"卫星菌落";16S rDNA基因序列分析表明,分离菌株与副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,Hps）处于同一分支,相似性>97%,亚型鉴定结果判定分离菌为Hps血清4型;将分离的Hps腹腔注射感染小鼠,可导致感染小鼠多个器官不同程度出血,以肺脏最为明显;高剂量感染可导致小鼠死亡。药敏试验发现,该菌株对四环素、环丙沙星、复方新诺明具有较强抗性,合理用药后,取得了良好的治疗效果。【结论】 试验成功分离出1株血清4型Hps,可致感染小鼠多个器官不同程度出血,对四环素、环丙沙星、复方新诺明耐药,研究结果为副猪嗜血杆菌病的临床诊断和治疗提供了理论依据。 相似文献
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DENG Tongwei XUE Yanan LU Jianzhou XIA Yanxun CHEN Lulu GUO Yiwen PENG Liming JIANG Zenghai QIAO Hongxing XU Yaohui ZHANG Xiaozhan 《中国畜牧兽医》2007,47(10):3401-3409
To identify the causative agent of porcine respiratory disease complex (PRDC) occurred at a pig farm in Kaifeng city,Henan province,we identified the potential causative bacteria of the morbid nursing piglets by bacterial test and drug sensitivity test of the clinical samples (lung,liver and spleen),and detected the common potential pathogens causing PRDC diseases by PCR and RT-PCR assays,including porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV),porcine circovirus type 2 (PCV2),swine influenza virus (SIV),pseudorabies virus (PRV),classical swine fever virus (CSFV) and Mycoplasma hyopneumoniae (Mhp),and then sequcing and phylogenetic analysis of the structural gene of positive causative pathogens were carried out.The results showed that a Haemophilus parasuis (Hps) strain were isolated and identified by the observation of bacterial morphology and satellite phenomenon,and the sequence analysis of 16S rRNA gene.The drug sensitivity test showed that the Hps strain was sensitive to ampicillin,amoxicillin-clavulanic acid,ceftiofur and tetracycline.Meanwhile,PCR and RT-PCR assays indicated that all the samples were positive for PRRSV and PCV2,and named the involved strain as PRRSV/HN-2019 and PCV2/HN11-2019,respectively.Sequencing and phylogenetic analysis of the ORF5 gene of the newly identified PRRSV revealed that the PRRSV/HN-2019 strain was closely related to the NADC30-like strains and grouped into NADC30-like genotype clade.And cap gene of the newly identified PCV2 strain the PCV2/HN11-2019 strain was closely related to the PCV-2d strains and grouped into PCV-2d genotype clade.In conclusion,this study demonstrated that the morbid piglets were co-infected with PRRSV,PCV2 and Hps,which provided a basis for the development of effective control strategies in the pig farm. 相似文献
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为确定河南开封某猪场发生猪呼吸系统疾病综合征（PRDC）的病原,本研究无菌采集病死保育猪肺脏、心脏和脾脏等组织样品,进行细菌学检验和药敏试验,通过PCR/RT-PCR检测样品中猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪流感病毒（SIV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪肺炎支原体（Mhp）等病原,并对核酸阳性病毒性病原的抗原结构基因进行测序和遗传演化分析。结果表明,通过细菌分离培养、形态观察、卫星现象观察和16S rRNA基因鉴定,从病死保育猪体内分离鉴定出1株副猪嗜血杆菌（Hps）,药敏实验表明该菌株对对氨苄西林、阿莫西林克拉维酸、头孢噻呋和四环素几种药物敏感。核酸检测PRRSV和PCV2核酸阳性,分别命名为PRRSV/HN-2019和PCV2/HN11-2019;进一步对PRRSV/HN-2019和PCV2/HN11-2019的结构基因分析发现,PRRSV/HN-2019与与NADC30分支的毒株亲缘关系较近,属于NADC30-like毒株;PCV2/HN11-2019与PCV-2d分支的毒株亲缘关系较近,属于PCV-2d分支。综上所述,本研究确定该猪场存在PRRSV、PCV2和Hps的混合感染,为该猪场下一步的PRDC有效防控提供了参考依据。 相似文献
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为调查屠宰生猪副猪嗜血杆菌（Hps）的隐性感染情况,本研究从陕西省某规模化生猪屠宰场采集80份病变肺脏,应用PCR方法进行Hps核酸检测,无菌取阳性肺脏,通过平板划线分离获得疑似Hps,进一步对分离菌进行形态观察、培养特性分析、卫星现象观察、生化试验和分离菌核酸片段序列分析,纯化获得Hps分离菌;用药敏纸片法分析Hps分离菌株对常用药物的敏感性。结果显示,从80份病变肺脏中检出39份Hps阳性,阳性率48.75%（39/80）;从39份Hps阳性肺脏中分离获得3株疑似Hps,分离菌在显微镜下呈革兰氏阴性、短杆状;在添加有胎牛血清和NAD的TSA平板上生长良好;在金黄色葡萄球菌周围呈现出典型的"卫星现象"生长;能发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、麦芽糖和阿拉伯糖,不发酵甘露醇;PCR扩增序列与Hps同源性在98%以上。药物敏感性试验结果显示,3株分离菌对环丙沙星、恩诺沙星和氟苯尼考等抗菌药物高度敏感,对青霉素、林可霉素和甲氧苄啶等抗菌药物耐药。本研究获得的Hps分离株为疫苗研制提供了基础材料,为生猪养殖场选择敏感药物防控Hps感染提供了参考依据。 相似文献
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为了给天津地区各区县养猪场提供副猪嗜血杆菌病的科学防控及合理的治疗用药方案,本试验对天津地区各区县养猪场疑似感染副猪嗜血杆菌的病猪进行了解剖及病理变化观察,无菌采集36份各猪场病猪组织脏器并进行细菌分离,对分离菌进行染色镜检、卫星试验、接触酶反应试验、微量生化反应和PCR鉴定。结果显示,剖检结果以纤维素性胸膜炎及腹膜炎常见,关节腔切面内有大量黄亮黏稠液体;分离出了9株疑似副猪嗜血杆菌菌株,染色镜检均可见革兰氏阴性多形态菌;分离菌有明显的卫星现象;接触酶反应试验均为阳性;微量生化反应D-核糖、山梨醇、果糖、阿拉伯糖和硫化氢均为阴性,麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇和脲酶均为阳性,山梨糖和木糖各有1株为阳性,5株菌β-半乳糖为阳性;PCR鉴定结果显示9株疑似副猪嗜血杆菌菌株在822 bp处均与阳性对照处于同一条带上,均判定为副猪嗜血杆菌,分离率达25%。用16种抗菌药物对9株副猪嗜血杆菌进行敏感药物筛选,药敏结果显示头孢曲松钠和氧氟沙星对分离株有良好的抑菌效果。本试验结果可为天津地区副猪嗜血杆菌病的科学防制提供依据。 相似文献
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通过研究副猪嗜血杆菌（Haemophiius parasuis,Hps）寡肽结合蛋白（Oligopeptide Binding Protein A,OppA）的生物学特性,为副猪嗜血杆菌亚单位疫苗的研制奠定基础。本试验设计了1对特异性引物,应用PCR方法来扩增副猪嗜血杆菌肽聚糖相关脂蛋白的全基因序列,并进行克隆和测序。并且采用生物信息学方法,对Hps的oppA基因核苷酸及其对应氨基酸序列进行比对,选取其中的血清学5型分离株,对其OppA蛋白的分子结构、理化性质及结构功能域、蛋白质二级结构等重要参数进行了预测和分析,并对0ppA蛋白的三级结构进行了同源建模。PCR扩增出1638bp的目的片段;测序结果显示出不同血清型Hps之间oppA基因核苷酸序列相似性有一定的差异,而所对应的氨基酸序列却差异更小;OPPA蛋白的理论等电点为6．45,偏弱酸性;OppA蛋白的二级结构以α螺旋、不规则卷曲和8片层为主要构件;Hps的0ppA蛋白的氨基酸序列与鼠疫耶尔森氏菌2223蛋白的同源性为57．20％,以2223蛋白结构为模板成功构建了Hps的OppA蛋白三维结构分子模型,该OppA蛋白三维结构中与2223蛋白相似,也有3个结构域,在疏水口袋中有1条5肽结构。Hps的OppA蛋白的成功模建为OppA蛋白功能的深入研究提供了参考依据。 相似文献
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为深入研究副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)肽聚糖相关脂蛋白(Peptidoglycan-associated lipoprotein,palA)的生物学特性,设计了一对特异性引物,应用PCR方法来扩增Hps palA的全基因序列,进行克隆和测序.采用生物信息学方法,对Hps的palA基因核苷酸及其编码氨基酸序列进行比对,选取其中的血清学5型分离株,对其PalA蛋白的分子结构、理化性质及结构功能域、蛋白质二级结构等重要参数进行了预测和分析,并对PalA蛋白的三级结构进行了同源建模.结果显示,PCR扩增出462 bp的目的片段;测序结果显示出不同血清型Hps之间palA基因核苷酸序列相似性有一定的差异,而所对应的氨基酸序列却差异很小;密码子偏爱性分析表明palA基因主要偏好GCA和AAA; PalA蛋白的理论等电点为6.28,偏弱酸性;PalA蛋白的二级结构以α螺旋、不规则卷曲和延伸链为主要构件;Hps的PalA蛋白的氨基酸序列与流感嗜血杆菌Pal蛋白的相似性为71.97％,以Pal蛋白结构为模板成功构建了Hps的PalA蛋白三维结构分子模型,该PalA蛋白三维结构与Pal蛋白相似,也含有肽聚糖结合口袋区,主要由第80位的酪氨酸( Tyr)、第39位的苯丙氨酸(Phe)和第84位的亮氨酸(Leu)组成.Hps的PalA蛋白的成功建模为PalA蛋白功能的深入研究提供了参考依据. 相似文献