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1.
《中兽医医药杂志》2019,(5)
采用柠檬酸钠还原法制备胶体颗粒,胶体金用抗鸽Ⅰ型副黏病毒(PPMV-1)F蛋白单克隆抗体标记并纯化,包被于玻璃纤维膜。再将纯化的抗PPMV-1 F蛋白单克隆抗体和羊抗鼠的二抗包被在NC膜作为检测线和质控线,组装成PPMV-1快速检测试纸条,建立一种快速、简便的检测PPMV-1的胶体金免疫层析方法。结果表明,所研制PPMV-1胶体金免疫层析快速检测试纸条,准确性高,且不与鸡传染性支气管炎病毒、鸡减蛋综合征病毒、鸡马立克病毒等发生交叉反应;批间和批内的重复性较好;灵敏度高,试纸条可以检测血凝效价≥23的病毒液;试纸条置4℃避光密封干燥保存1年,37℃放置10 d,对其性能没有任何影响。试纸条与HA、HI试验检测方法相比,检测棉拭子的符合率为97.5%,检测病料的符合率为100%。所研制的PPMV-1试纸条在鸽Ⅰ型副黏病毒检测诊断方面具有快速、灵敏、特异、简便等特点,具有良好的开发应用前景。 相似文献
2.
胶体金试纸条检测H9亚型禽流感病毒的研究 总被引：11，自引：0，他引：11
对禽流感病毒H9亚型血凝素单克隆抗体4C4进行胶体金标记,喷涂于玻璃纤维上制成金标垫,鸡抗AIVIgG和羊抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素（NC）膜上作为检测线和质控线,制作禽流感H9亚型免疫层析检测试纸条。验证结果表明,试纸条操作简单,肉眼于10min内可判定结果,对H9亚型禽流感病毒及其标准血凝抗原具有高度特异性,与其它亚型禽流感病毒标准抗原及其它禽类病毒没有交叉反应,检测灵敏度比HA试验高4倍以上。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对实验室送检及临床采集的共311份喉头拭子进行检测,结果与本室研制的禽流感ELISA试剂盒总符合率为92％,随机选取10份阳性样品经病毒分离证实无一误检。结果证明,本研究建立的H9亚型禽流感病毒免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于H9亚型禽流感病毒的现场检测及鉴别诊断。 相似文献
3.
赤羽病胶体金免疫层析试纸条的研制 总被引：3，自引：1，他引：2
采用双抗体夹心免疫层析技术,研制了适合田间快速试验的赤羽病胶体金免疫层析试纸条。纯化赤羽病毒单克隆抗体3A和2C,用柠檬酸钠还原法制备胶体金标记纯化后的单抗作为标记抗体。分别将羊抗鼠IgG和纯化后的单抗包被于NC膜上作为质控带和检测带,以检测被检样品中的赤羽病毒（akabane virus,AKAV）。试验结果表明,所研制的试纸条敏感性较高（为10 TCID50）,特异性较强,还具有快速、稳定、简便等特点,适合基层动物防疫检疫部门尤其是进出境动物检疫机构进行赤羽病大批量、田间快速初筛,对赤羽病快速诊断具有重要的意义。 相似文献
4.
新城疫病毒胶体金免疫层析试纸条的制备 总被引：1，自引：1，他引：0
为了建立一种简便、快速检测新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）的方法,本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记NDV单克隆抗体6C4制备免疫检测探针。在硝酸纤维素膜上,用微定量喷头喷好1条病毒检测线（T线）和1条羊抗鼠抗体质控线（C线）,制备免疫层析检测试纸条,使用该制备好的检测试纸条可在10 min内检测出新城疫病毒。试纸条检测NDV的灵敏度比HA试验结果提高8倍,与禽流感病毒未出现交叉反应,用缓冲液对照测试,结果为阴性,在密封、干燥、低温的条件下,试纸条的灵敏性与特异性没有明显变化。本研究建立的NDV免疫层析检测法具有特异、灵敏、稳定、操作简单等特点,符合现场快速检测的要求。 相似文献
5.
利用基因工程技术制备的猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）N基因原核表达产物重组N蛋白作为抗原诊断试剂,抗重组N蛋白的单克隆抗体作为抗体诊断试剂建立了间接竞争性ELISA检测细胞培养物中的TGEV病原的方法,并确定了间接竞争性ELISA操作流程中的最佳反应条件。在间接竞争性ELISA中,最佳抗原包被量为0．25卢g／孔;竞争抗原与单克隆抗体作用的最适时间为1h,反应温度为37℃;选择1h作为酶标抗体作用的最佳时间;底物液最佳作用时间为10min;选择样品的抑制率50％为其临界值;所用封闭液0．5％的聚乙烯醇PBS溶液在4℃冰箱中可密封保存6个月,封闭时间为120min;特异性试验表明与猪轮状病毒、猪流行性腹泻病毒等肠道腹泻性病毒均无交叉反应。本试验建立的间接竞争性ELIsA诊断方法具有良好的敏感性和特异性,为TGEV的疫情监测、及时而准确的诊断奠定了基础。 相似文献
6.
为建立一种快速、简便的检测鸽Ⅰ型副粘病毒(PPMV-1)的胶体金免疫层析方法,采用柠檬酸钠还原法制备胶体颗粒,胶体金用抗PPMV-1 F蛋白单克隆抗体标记并纯化,包被在玻璃纤维膜上,另外将纯化抗PPMV-1 F蛋白单克隆抗体和羊抗鼠的二抗包被在NC膜上作为检测线和质控线,组装成PPMV-1快速检测条。通过对鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡减蛋综合征、鸡马立克、猪瘟、猪传染性胃肠炎、羊痘、大肠杆菌、沙门氏菌等几种样品用试纸条进行灵敏性和特异性检测,结果表明,试剂条只能与新城疫发生交叉反应,而与上述其他样品不发生交叉反应,该试纸条的特异性强,灵敏性高。 相似文献
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8.
TGEV-PL株在PK15细胞上增殖,经浓缩纯化获得TGEV抗原,建立了间接ELISA检测方法.应用杂交瘤技术获得3株分泌抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞.经检测其分泌的抗体亚类为IgG3;杂交瘤细胞染色体数为88;间接ELISA检测细胞培养上清液效价为1∶256,腹水抗体效价达1∶6×104,与6株毒(菌)株的抗原之间无交叉反应.经阻断试验证实,其分泌的McAb能识别抗原是TGEV所特有的抗原决定基. 相似文献
9.
为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒（DTMUV）的方法,以2株（B9D7B8G10和B9D10C7株）抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进行纯化并鉴定;以纯化的B9D7B8G10株单克隆抗体作为标记抗体,通过调节单克隆抗体浓度与pH确定胶体金探针最佳结合条件;同时,在硝酸纤维素膜（NC膜）检测带包被纯化的B9D10C7株单克隆抗体,质控带包被山羊抗小鼠IgG抗体,建立检测DTMUV胶体金免疫层析试纸条;成功建立试纸条后,对试纸条敏感性、特异性、重复性和稳定性进行检测,并与RT-PCR检测方法进行比较,对200份临床疑似感染样品进行检测。结果显示：制备的胶体金试纸条在15 min内即可完成检测,最低检测稀释度为1:50,且不与鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅星状病毒、禽白血病病毒发生交叉反应;应用试纸条和RT-PCR方法分别对200份临床疑似样品进行检测,两者符合率达98%。结果表明,制备的胶体金试纸条敏感性高、特异性强、稳定性好、重复性好,为DTMUV的快速检测提供了... 相似文献
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犬细小病毒病免疫胶体金诊断技术的研究 总被引：21，自引：0，他引：21
建立一种简便、快速、准确检测犬细小病毒(CPV)的胶体金免疫层析法(GICA).采用柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记纯化的CPV单克隆抗体,在玻璃纤维素膜上喷加纯化的CPV多克隆抗体,制成诊断CPV抗原的快速诊断试纸条.用本试验研制的CPV试纸条检测收集到的120份犬粪便样品,其结果与HA结果相比对,HA效价在1:40以上,试纸条均能检测到为阳性.CPV试纸条与犬瘟热病毒及犬传染性肝炎病毒无交叉反应.且试纸条保存6个月后,其检测结果重复性为100%.试验证明,本研究建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可在临床上广泛应用,也可用于CPV的流行病学调查. 相似文献
11.
为快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-3D10株和4H11株分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗原检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与PCR方法对比总符合率为93．3％。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,可为临床诊断提供参考。 相似文献
12.
为建立一种方便、快捷、实用的检测猪δ 冠状病毒(PDCoV)方法,本研究利用原核表达猪δ 冠状病毒N 蛋白,以纯化的N 蛋白免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤细胞技术研制2株分泌PDCoV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为E8、A10。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性及特异性良好,E8亚类为IgG2a,A10亚类为IgG1。以E8作为金标抗体,A10作为检测抗体,兔抗鼠作为质控线抗体,制备猪δ 冠状病毒胶体金检测试纸条,检测猪δ 冠状病毒敏感性为100TCID50,检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪δ 冠状病毒阴性对照均为阴性。本研究建立的胶体金试纸条检测方法敏感性及特异性良好。该检测方法的建立,为猪δ 冠状病毒(PDCoV)流行病学调查提供一种方法,同时为规模化养殖集团及基层兽医组织提供一种检测猪δ 冠状病毒产品。 相似文献
13.
本研究利用原核表达、纯化的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)N 蛋白免疫BALB/C小鼠,成功筛选到两株分泌CDV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为D3、D6。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性、特异性良好,能识别不同来源的犬瘟热病毒株,单抗亚类均为IgG1。以D3作为金标抗体,D6作为检测抗体,兔抗鼠IgG作为质控线抗体,制备犬瘟热病毒胶体金检测试纸条,检测犬瘟热病毒敏感性为1000TCID50,能有效检测区分犬瘟热病毒、犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒2型(Canine adenovirus type 2,CAV2)、狂犬病病毒(Rabies virus,RV)。综上,本研究建立的胶体金试纸条检测方法,灵敏度高、特异性强,适用于犬瘟热病毒临床快速诊断。 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征胶体金抗体检测技术的建立和初步应用 总被引：11，自引：0，他引：11
用胶体金标记纯化后的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程表达抗原,建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV抗体的胶体金免疫层析法(GICA).特异性交叉试验证明GICA检测PRRSV抗体有较高的特异性.与其他方法对比检测证实了其敏感性.生产了一批免疫胶体金试纸条,检测36份临床样本,其中30份经免疫胶体金试纸条及ELISA、免疫荧光检测均为阳性.猪繁殖与呼吸综合征免疫胶体金抗体检测技术的建立为检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体提供了一种快速简便的方法. 相似文献
15.
利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫快速检测试纸条。该试纸条检测O、A、Asia 1型3种血清型灭活口蹄疫病毒均为阳性,检测水疱性口炎病毒、猪水疱病病毒、蓝舌病病毒、猪蓝耳病病毒4种灭活抗原及小反刍兽疫病毒疫苗株均为阴性,试验结果与口蹄疫实时荧光定量RT-PCR方法的完全一致,表明其具有良好的特异性。敏感性试验结果是,试纸条的检测极限为1∶160稀释的样品,其敏感性相当于实时荧光定量RT-PCR方法的1/64。由于试纸条具有操作方便、检测快速等优点,因此该试纸条可以用于大量临床样品的快速检测和现场检测。 相似文献
16.
快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金免疫层析方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
为建立一种快速、简便、灵敏的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒,标记抗PRRSVN蛋白的单克隆抗体(MAb) 2D7制备免疫检测探针,将抗PRRSVN蛋白的MAb 1G7和羊抗鼠IgG抗体印迹在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,经条件优化,组装成胶体金免疫层析试纸条.本研究制备的PRRSV胶体金试纸条的最低检测限度为103.0 TCID50/mL;在特异性试验中,试纸条检测PRRSV呈阳性,其它主要猪病病原均为阴性;不同批次试纸条重复检测,结果无差异;对现地猪场送检的150份病料进行PRRSV病原检测,与RT-PCR相比较,试纸条的特异性和敏感性分别为98.13％和88.37％.两种方法的一致性Kappa值为0.882.建立的PRRSV抗原胶体金免疫层析检测方法具有良好的的敏感性、特异性、重复性及现地应用性.该试纸条的研制为PRRS的快速诊断及免疫预防提供了技术手段. 相似文献
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莱克多巴胺胶体金免疫层析法快速检测试纸条的研制 总被引：1，自引：0，他引：1
为研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,快速检测猪尿中莱克多巴胺（ractopamine,RAC药物残留）,采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上制备胶金垫,RAC-BSA偶联抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装并切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明该快速检测试纸条的检测限为5 ng/mL,可在8~10 min内完成测试,肉眼即可判断,无需其他检测设备。该试纸条灵敏度、特异性、稳定性和重复性均达到临床使用要求,适用于现场快速检测和筛选工作。 相似文献
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应用胶体金免疫层析技术,结合胶体金定量读数仪研制出一种快速定量检测猪血清中猪瘟抗体水平的检测卡。该检测卡以胶体金标记高灵敏的猪瘟重组E2蛋白,同时在NC膜上包被同一蛋白,经正交实验确定最适条件,同时通过与对照线的颜色对比,应用胶体金定量读数仪,可对样本中猪瘟抗体水平进行定量。该检测卡检测方法简便、快速、稳定性好。与猪圆环病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征等常见猪疫病抗体均无交叉反应。检测71份猪血清样本结果与ELISA结果的符合率达90.1%。结果表明,实验研制的猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡可用于基层兽医站和养殖企业的检测。 相似文献
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用E.coliO157∶H7菌体免疫BALB/c鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了16株分泌单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。其中,1D3、2E7和2H7三株为O157∶H7特异单克隆抗体,Ig亚类分别为IgMκ、IgG2bκ和IgG2bκ,腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用纯化的单克隆抗体2E7标记胶体金,制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜（NC）上;组装成双抗夹心法O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测O157∶H7,敏感度为106CFU/mL,与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的O157∶H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当,试纸条简便快速,在1~5 min内可得出检测结果,便于O157∶H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。 相似文献