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1.
利用细菌分离纯化、生化鉴定、分子生物学及WHO推荐的K-B纸片法等研究方法,对从西藏不同地区采集的103份牦牛鼻拭子样品进行肺炎克雷伯菌的分离鉴定,对分离鉴定的疑似菌株进一步进行16S rDNA测序及系统发育分析,荚膜血清学分型、毒力基因和耐药表型及耐药基因检测。结果显示,从西藏林芝市、那曲市分离鉴定出8株牦牛源克雷伯菌,分离率为7.76%;挑取其中2株进行测序,结果显示与重庆牛源KM096433和北京土壤源JQ003560聚为一簇,亲缘关系最近;8株西藏牦牛源克雷伯菌荚膜血清型均为K20型;此外,8株菌株均检测到3种毒力基因mrkD、fimH和wabG,检出率为100%;blaTEM、sul3、tetA和tetA耐药基因检出率分别为100%,100%,75%和75%,其余耐药基因均未检出;药敏试验结果显示,8株菌株对青霉素和氨苄西林耐药率达100%,其次是克拉霉素、四环素和多西环素耐药率达75%,而对喹诺酮类药物,如:环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星强敏感;致病性试验中对照组全部存活,处理组小鼠病死率为80%(4/5),病变主要表现为脾脏肿大。本试验对西藏地区牦牛源肺炎克雷伯菌的流行情况、毒力基因和耐药性进行分析,对牦牛源肺炎克雷伯菌的防制具有重要的指导意义。 相似文献
2.
《中国预防兽医学报》2019,(3)
为确定河北省某牛场牛细菌病的病原,本研究从采集的发病牛鼻腔拭子样品中分离到1株细菌,并对其进行常规形态学观察、生化鉴定、16S rDNA基因序列测定、动物致病性试验及药物敏感试验。结果显示,该分离菌株与腔隙莫拉菌的同源性为97.6%,系统发育进化分析显示其与腔隙莫拉菌位于同一进化分支;该菌株对小白鼠具有一定的致病性,将其命名为Mor QHD-1。西药药敏试验结果显示,分离菌株Mor QHD-1对氨苄西林、环丙沙星、阿米卡星等敏感;对磺胺间甲氧嘧啶、复方新诺明、磺胺二甲氧嘧啶耐药;中药药敏试验结果显示,分离菌株Mor QHD-1对苏木、诃子、乌梅、黄柏、五味子、黄连、五倍子极敏感;苏木、诃子、乌梅、黄柏、五味子、黄连、五倍子对该菌的最小抑菌浓度在1.95 mg/mL～31.25 mg/mL之间,最小杀菌浓度在3.91 mg/m L～62.5 mg/mL之间;本研究在国内首次分离到牛源腔隙莫拉菌,为进一步研究腔隙莫拉菌的致病机制、耐药机制及其跨物种传播奠定了基础。 相似文献
3.
《中国畜牧兽医》2019,(11)
为研究宠物犬源bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的携带情况,同时了解宠物犬携带bla_(CTX-M)基因肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征,本研究从355只宠物犬的鼻拭子和肛拭子中分离头孢噻肟耐药细菌,通过16S rDNA和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定细菌种属。对鉴定为肺炎克雷伯菌的菌株,运用PCR检测bla_(CTX-M)基因,药物敏感性试验测定bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型,PFGE分型和全基因组测序技术分析bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的分子特征。PCR结果显示,共分离到7株bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌,3株来自宠物肛拭子,4株来自宠物鼻拭子;药敏试验结果显示,7株菌均对头孢噻呋、头孢噻肟和阿莫西林-克拉维酸耐药,但对多黏菌素E、美罗培南和替加环素敏感。PFGE结果显示,其中3株细菌相似度为100%,而另外4株细菌相似度差异较大(30%)。全基因组结果显示,7株菌共有5个ST分型,bla_(CTX-M)基因分离的亚型为CTX-M-14型(n=5)和CTX-M-3型(n=2),同时这些菌株中还携带了其他β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药基因。从本研究结果可以看出,目前宠物犬源bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的检出率较低,但其多重耐药性较严重,本研究分离的耐药基因bla_(CTX-M)、bla_(SHV)亚型与国内外流行有差异。目前宠物在抗生素的使用和监控上仍有不足,需进一步关注宠物细菌耐药性,为后续防控提供依据。 相似文献
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为了解猪群中猪源肺炎克雷伯氏菌耐药情况和毒力基因携带状况,2019年采集存栏生猪肛拭子样品125份、宰后生猪肉类样品50份,通过细菌分离培养、药敏试验以及PCR扩增16S rRNA、khe基因、耐药基因和毒力基因等方法对肺炎克雷伯氏菌特性进行分析。结果显示,从125份肛棉拭子样品、50份宰后生猪肉类样品中各分离得到32、4株肺炎克雷伯氏菌;药敏试验结果显示,分离的肺炎克雷伯氏菌对四环素耐药性最高(83.3%),其次是氯霉素(63.9%)。对36株分离菌进行耐药基因和毒力基因检测,发现携带耐药基因tet(A)的达30株、携带floR、mcr-1的分别为23、10株,且有23株菌同时携带tet(A)和floR基因,少部份菌株携带aadA1、blaTEM、blaCTX-M-1、blaOXA、qnrB、aac(6')-Ib-cr;携带毒力基因wabG的达26株、携带uge和fimH的25株、携带kfu的23株、携带aereobactin的7株,且有20株菌同时携带wabG、uge、fimH和kfu基因。结果表明,我国猪群中肺炎克雷伯氏菌检出率可能较高,菌株携带耐药基因及毒力基因较为集中,对部分抗生素耐药性较强。本研究为肺炎克雷伯氏菌的检测、诊断以及合理使用抗生素治疗提供了试验依据,同时也为猪源肺炎克雷伯氏菌防控提供了数据支撑。 相似文献
5.
支气管败血波氏菌是引起猫呼吸道疾病的主要病原之一,而对猫源支气管败血波氏菌的分离鉴定目前国内鲜有报道。本研究对上海市1例有咳嗽症状的德文猫鼻拭子样品进行呼吸系统相关病原PCR检测,并对鼻拭子样品进行细菌分离培养,对分离菌株采用K-B纸片法进行药敏试验,同时检测分离菌株对小鼠的致病性。结果显示：猫杯状病毒、猫疱疹病毒、猫衣原体、猫支原体均为阴性,支气管败血波氏菌为阳性,并分离到1株支气管败血波氏菌;分离菌株对头孢拉定、氨苄西林、强力霉素等9种抗生素耐药,对阿莫西林、卡那霉素、氟哌酸、复方新诺明、美罗培南等15种抗生素敏感;用分离菌株接种ICR小鼠,发现小鼠出现精神沉郁症状,但未出现死亡。结果表明：上海市猫群中存在支气管败血波氏菌感染,需关注免疫力低下人群被感染的风险;分离株对小鼠致病力不强,但对首选治疗支气管败血波氏菌病的强力霉素耐药,建议选用敏感药物进行防治。本研究为猫源支气管败血波氏菌病的诊断与防治提供了参考。 相似文献
6.
为确定湖北省恩施自治州某鹿场致患病鹿蹄腐烂的病原菌,本研究于患病梅花鹿的前蹄病健结合处采集病料并对其进行细菌分离培养,最终分离到一株厌氧菌。对该细菌进行了形态观察、生化试验、16S rRNA基因序列测定、细菌生化鉴定仪鉴定、药物敏感性试验以及小鼠致病力试验等。结果显示该细菌在显微镜下呈革兰氏阴性、丝状、长短不一的杆菌。16S rRNA基因序列测定结果显示该分离菌株与多株坏死梭杆菌参考株的同源性均为99%,将其命名为HNFnf;经Vitek细菌鉴定仪鉴定该细菌为坏死梭杆菌;药敏试验结果显示,该菌对青霉素、头孢类等中度敏感,对阿米卡星、链霉素、庆大霉素耐药。本研究为临床治疗由坏死梭杆菌引起的反刍动物"腐蹄病"与"肝脓肿"提供参考依据。 相似文献
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为了研究牦牛源蜡样芽胞杆菌致病性和耐药性,本实验对其进行了细菌形态学观察、16S rDNA PCR和序列比对、动物回归试验及药敏分析。结果显示：56份牦牛奶样,分离出135株细菌,对分离菌进行16S rDNA PCR并测序,其中有42株为蜡样芽孢杆菌,蜡样芽胞杆菌检出率为75%(42/56),占总检出细菌的31.11%(42/135);其中分离菌株B2019 16S rDNA PCR测序结果与Gen Bank中蜡样芽胞杆菌的同源性为88.6%～99.3%,运用Mega7.0将分离菌株B2019与6株参考菌株的16S rDNA序列进行同源性比对分析,并构建系统进化树;在动物回归试验中小鼠腹泻,剖检小鼠发现肝脏肿大,肺脏边缘有出血;药敏试验结果显示,分离菌株对麦迪霉素、克林霉素、红霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、万古霉素、氧氟沙星、环丙沙星、呋喃唑酮和米诺环素等13种抗生素表现出高度敏感,对多粘菌素B表现为中介,对其他16种抗生素均表现为耐药。试验结果表明该分离菌株是一株具有较强致病性的蜡样芽胞杆菌。 相似文献
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为研究宠物犬源blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的携带情况，同时了解宠物犬携带blaCTX-M基因肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征，本研究从355只宠物犬的鼻拭子和肛拭子中分离头孢噻肟耐药细菌，通过16S rDNA和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定细菌种属。对鉴定为肺炎克雷伯菌的菌株，运用PCR检测blaCTX-M基因，药物敏感性试验测定blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型，PFGE分型和全基因组测序技术分析blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的分子特征。PCR结果显示，共分离到7株blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌，3株来自宠物肛拭子，4株来自宠物鼻拭子；药敏试验结果显示，7株菌均对头孢噻呋、头孢噻肟和阿莫西林-克拉维酸耐药，但对多黏菌素E、美罗培南和替加环素敏感。PFGE结果显示，其中3株细菌相似度为100%，而另外4株细菌相似度差异较大（<30%）。全基因组结果显示，7株菌共有5个ST分型，blaCTX-M基因分离的亚型为CTX-M-14型（n=5）和CTX-M-3型（n=2），同时这些菌株中还携带了其他β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药基因。从本研究结果可以看出，目前宠物犬源blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的检出率较低，但其多重耐药性较严重，本研究分离的耐药基因blaCTX-M、blaSHV亚型与国内外流行有差异。目前宠物在抗生素的使用和监控上仍有不足，需进一步关注宠物细菌耐药性，为后续防控提供依据。 相似文献
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为确定黑龙江省某养殖场因呼吸道症状急性死亡病猪的致病菌,并探究其主要生物学特性,本研究采集病死猪内脏组织,通过细菌分离、革兰氏染色、生化鉴定、16S r RNA基因的PCR扩增、测序、系统进化树的构建对分离菌进行种属鉴定;通过微量肉汤稀释法分析该菌对8类10种抗生素的敏感性;通过Illumina PE150对细菌全基因组测序,采用ResFinder软件分析分离菌的耐药基因,并分析耐药基因与耐药表型的相关性。利用VFanalyzer软件、BLASTN比对分离菌的毒力基因。结果显示,该菌株在10%脱纤维羊血平板培养基上培养24 h后形成表面光滑具有β-溶血环的单菌落;革兰氏染色结果显示呈蓝紫色短棒状杆菌;生化鉴定结果显示该分离菌的生化特性与化脓隐秘杆菌符合。16S r RNA基因的PCR结果显示,扩增到1 397 bp的目的基因序列,与GenBank中序列比对结果显示该菌株与已报道的化脓隐秘杆菌同源性高达99%。16S r RNA基因系统进化树分析结果显示分离菌与辽宁沈阳的牛源化脓隐秘杆株TZQ 01株处于同一分支,与日本的猪源分离株NIAH13531处于较近分支,以上结果可确定该分离菌为... 相似文献
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为了了解辽宁地区规模化养殖场(户)中猪呼吸道病原菌的流行分布情况及耐药性情况。对2022—2023年采集规模化养殖场(户)中不同阶段的猪患呼吸道症状的咽拭子、鼻拭子、肺脏、肝脏及肾脏等病料组织349份，采用常规细菌分离鉴定方法对采集的349份猪患呼吸道症状的咽拭子、鼻拭子、肺脏、肝脏及肾脏等病料组织进行鉴定，采用K-B药敏纸片法分别测定分离呼吸道细菌性病原菌对临床中常用的药物耐药情况。结果显示：从349份病料样品中多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌支气管败血波氏杆菌菌株的检出率分别为7.8%(26株)、 12.2%(40株)、11.5%(39株)、21株(6.0%);分离的4种呼吸道病原菌均对头孢噻呋、头孢噻肟、氟苯尼考等7种药物敏感，对阿莫西林、氨苄西林、新霉素等7种药物耐药。本研究为该地区规模化养殖场及散养户中不同阶段的猪呼吸道病防控及合理指导临床用药提供参考。 相似文献
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为了阐明引起石河子地区某规模化奶牛场犊牛呼吸道症状的主要细菌性病原体及其生物学特性，本研究采集2~6月龄犊牛鼻拭子与肛拭子各39份，通过细菌分离培养、形态学观察、生化分析、PCR扩增16S rRNA基因和溶血酵素（khe）基因、药敏试验和小鼠致病性试验等方法对分离菌株的生物学特性进行分析。结果显示，分离菌株中有3株在MIAC平板上形成紫红色带有沉淀环的菌落（鼻拭子1株，肛拭子2株），且镜检为革兰氏阴性短杆菌，疑为肺炎克雷伯菌。全自动微生物分析系统显示，分离株与肺炎克雷伯菌相似性均为96%；PCR扩增16S rRNA基因测序结果显示，分离株与GenBank数据库中肺炎克雷伯菌核苷酸相似性在96.5%~99.8%之间，肺炎克雷伯菌特异性基因khe阳性且相似性达99%以上；药敏结果显示，分离菌株对青霉素类、头孢菌素类、一代和二代氨基糖苷类、四环素类、一代大环内酯类、磺胺类、多烯类、林可酰胺类抗菌药呈现出不同程度的耐药；对三代氨基糖苷类、二代大环内酯类、氯霉素类、多肽类、喹诺酮类抗菌药敏感，且呈现不同程度的多重耐药性；致病性试验结果表明，分离菌株均可不同程度导致小鼠死亡且以鼻拭子分离株致病性较强。本研究成功分离鉴定石河子地区规模化奶牛场引起犊牛呼吸道症状的肺炎克雷伯菌3株，并阐明分离菌的部分生物学特性，为新疆地区牛源肺炎克雷伯菌病的检测、诊断及临床治疗提供技术支撑。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2020,(3)
为了了解牦牛屠宰过程中大肠杆菌污染状况、菌株所携带的毒力基因及其耐药情况。2018年11月份以随机采样方式从成都市某屠宰场采集样品150份,其中牦牛胴体拭子30份,鼻腔拭子60份,土壤拭子31份,皮毛拭子29份,应用伊红美蓝琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基对大肠杆菌进行初步分离和鉴定,PCR法扩增分离菌株携带的主要毒力因子基因est、elt、stx、eaeA、ipaH、aggR、ehxA、hlyA、astA等,采用K-B纸片扩散法检测细菌的耐药性。结果表明:从150份牦牛屠宰样品中共分离到20株大肠杆菌,分离率为13.33%(20/150)。不同样品中大肠杆菌检出率由高到低依次为牦牛胴体拭子(16.67%,5/30)、鼻腔拭子(15.00%,9/60)、土壤拭子(12.90%,4/31)和皮毛拭子(6.90%,2/29)。从20株大肠杆菌中均检出astA基因,15株菌株检出eaeA基因,9株菌株检出aggR基因,5株菌株检出ipaH基因,3株菌株检出stx2基因,分别从1株菌株检出stx1、ehxA和hlyA基因。大肠杆菌对氨苄西林的耐药率为50%,其次为氯霉素(45%)、链霉素(5%)、四环素(5%)。说明在牦牛屠宰过程中会污染致病性大肠杆菌,对食品安全带来潜在风险。 相似文献
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为探讨西藏那曲市申扎县牦牛腹泻的原因，本试验无菌采集11份腹泻牦牛粪便样品进行细菌分离培养、染色镜检，对检测菌株的16Sr RNA基因进行扩增、测序，序列上传至Gen Bank进行比对，并使用DNAStar进行同源性分析，构建遗传进化树。分离结果表明，11份样品中共分离出5株菌株，在MAC培养基上菌落呈粉红色，革兰氏染色镜检后发现所有菌株均为阴性且两端钝圆的直杆菌；16Sr RNA基因同源性分析结果显示，5株分离株16Sr RNA序列同源性在90%以上，与大肠杆菌参考序列的同源性达到95.2%以上；遗传进化树显示，XZ-1、XZ-5分离株与大肠杆菌AT125株、PAK/SA4株亲缘关系较近，XZ-2、XZ-3和XZ-4分离株与大肠杆菌RM13322株亲缘关系较近，经以上鉴定可知分离菌为大肠杆菌。 相似文献
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仁增旺姆 《国外畜牧学(猪与禽)》2023,(3):53-55
为了了解海南藏族自治州共和县规模化猪场中仔猪副猪嗜血杆菌分离株的流行情况及对常用抗菌药的耐药情况。本试验于2022—2023年采集海南藏族自治州共和县规模化猪场中患疑似副猪嗜血杆菌病的仔猪鼻拭子、关节液、胸腔积液、肺脏等病料,共计283份。采用细菌分离鉴定、PCR方法对采集的病料进行副猪嗜血杆菌分离鉴定,采用人工感染小鼠试验验证分离株的致病性,采用纸片扩散法(Kirby-Bauer,简称K-B法)检测致病性副猪嗜血杆菌分离株对临床中常用抗菌药的耐药性。结果显示：从采集的283份病料中分离到128株副猪嗜血杆菌,通过致病试验显示,91株副猪嗜血杆菌能引起小鼠不同程度发病与死亡,为致病性菌株;分离的91株致病性副猪嗜血杆菌对磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林、氨苄西林等6种药物的耐药率为85.7%以上,对其他药物的耐药率为3.3%～25.3%,本研究为该地区仔猪副猪嗜血杆菌合理用药及防控提供参考。 相似文献
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一只牦牛屠宰后肝有干酪样结节,为了探究其形成原因,本研究对该牦牛肝进行细菌的分离培养,对所分离可疑致病菌的16SrRNA以及rpoB基因序列进行扩增和序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验。结果显示,经细菌分离培养得到一株革兰阳性、棒状、可疑致病菌;其16S rRNA扩增片段大小1 483bp,GenBank序列编号为MH000696,该菌的16SrRNA与干燥棒状杆菌GD34株(KF928790.1)等的相似性最高,序列一致性为99%,系统进化树显示,本菌与干燥棒状杆菌在同一进化分支上;rpoB基因扩增片段大小434bp,GenBank序列编号为MH006608;Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为变异库克菌,可信度为93%。该菌对妥布霉素、氨曲南、头孢哌酮、米诺环素等多种药物高度敏感。综上所述,分离的细菌为干燥棒状杆菌,但基因序列,如rpoB等以及生化表型均存在一定程度的变异,本研究为兽医临床上该菌的分离和鉴定提供了依据,且为该菌的致病性研究奠定了基础。 相似文献
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根据产毒素多杀性巴氏杆菌的toxA基因序列,设计了2对特异性引物,扩增的片段大小分别为864和447 bp,从而建立了一种能直接从猪鼻拭子中快速检测产毒素多杀性巴氏杆菌的巢氏PCR方法。该方法能检出26CFU菌量以上的模板DNA,且不能从猪的其它7种常见病原菌扩增到特异性条带。通过对5个不同地区阳性猪群中采集的146份临床鼻拭子样品进行巢氏PCR检测和细菌分离鉴定,结果2种方法同时为阳性的样品有44份,同时为阴性的样品有97份,另有5份样品只有巢氏PCR检测为阳性,巢氏PCR检测与细菌分离鉴定的符合率为96.58%。试验表明:巢氏PCR方法能快速、灵敏地从猪鼻拭子样品中检出产毒素多杀性巴氏杆菌,适合临床进行大规模病原学检测,具有良好的应用前景。 相似文献
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肉牛溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为探究四川省某肉牛养殖场从外地引种的西门塔尔牛出现体温升高、咳嗽和呼吸困难等症状的病原,本实验采集24份病牛鼻腔棉拭子,随机挑取10份进行细菌的培养、分离鉴定以及分离菌株的耐药性分析;同时采用特异性检测溶血性曼氏杆菌的PCR方法对全部病牛鼻腔棉拭子进行检测。结果显示,从10份病牛鼻腔棉拭子中分离鉴定出10株溶血性曼氏杆菌,分型PCR方法结果显示其中8株为荚膜血清6型,其余2株未定型;药敏试验结果显示,溶血性曼氏杆菌分离株对大多数氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类药物敏感,对部分β-内酰胺类和酰胺醇类药物耐药;特异性检测溶血性曼氏杆菌的PCR方法从24份鼻腔棉拭子中检测出23份阳性样品,表明该群病牛溶血性曼氏杆菌的感染率很高。本研究为该牛场的呼吸道病的防控提供了参考。 相似文献
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本试验旨在通过监测沙门菌在生猪屠宰各环节和猪肉产品中的污染分布和耐药状况，揭示沙门菌在猪肉生产过程中的传播及耐药情况。选取山东省5个代表性生猪屠宰场为风险观测点，采集肛拭子、屠宰环境拭子、水样品和胴体拭子共552份，参照食品安全国家标准和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对其中沙门菌进行分离培养和鉴定；参照微量肉汤稀释法检测其药物敏感性；利用多位点序列分型(MLST)鉴定沙门菌的基因型。结果显示，共分离获得58株沙门菌，总阳性检出率为10.5%(58/552);中小型屠宰场(15.6%,33/212)较大型屠宰场(7.4%,25/340)沙门菌污染严重；屠宰环节预冷前样品检出率最高，为26.7%(8/30);不同类型样品中肛拭子样品的检出率最高，为15.1%(16/106)。耐药性检测结果显示，58株沙门菌对氨苄西林的耐药率最高(96.6%,56/58),多重耐药率为96.6%(56/58);中小型屠宰场分离株较大型屠宰场的整体耐药严重，胴体拭子(46.4%,26/56)和肛拭子(28.6%,16/56)分离株的多重耐药率高于环境拭子(25.0%,14/56)... 相似文献