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1.
《中国兽医学报》2020,(7)
为研究鸭疫里默杆菌(R.anatipestifer)表型相关基因在四川、重庆地区分离株中的分布及遗传多样性,探讨其致病力发生差异的分子基础及可能机制,以分离自鸭、鹅的22株鸭疫里默杆菌为对象,采用PCR方法检测细胞壁相关水解酶(CWAH)、转录调节子(TR)、类脂A生物合成酰基转移酶(Lipid A)、插入元素蛋白IS1转座(IS1)、双组份转录调控因子(TCTR)、转录调控因子(LuxR1、LuxR2)、酰基-CoA还原酶(LuxC)、嗜好模块毒素(AMT)、协同溶血素(CAMP)、血凝素(Hema)、三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、外膜蛋白A(OmpA)、热休克蛋白类似物(GroEL)、Ton依赖识别受体(TbdR1、TbdR2)、滑动性运动蛋白J(GldJ)、铁限制性依赖受体(DtxR)共计18个蛋白编码基因在分离菌株中的分布,并对阳性扩增基因进行测序和遗传多样性分析。使用CLC Genomics Workbench 6.5进行二代数据的基因组测序和拼接,将获得的血清Ⅰ型菌株RS、RC和血清Ⅱ型菌株RA的全基因组序列与GenBank登录序列进行比对分析。PCR检测结果显示,22个菌株均检测到OmpA、Lipid A、Hema、CAMP、TbdR1、TbdR2、DtxR的编码基因,鹅源分离株中未能检测到CWAH、AMT基因,而非致病性菌株DX1、YC1、YC2未能检测到LuxR1、LuxR2、GroEL、AMT、GAPDH基因。全基因组测序结果显示,RA、RC、RS菌株的基因组大小分别为2 129 862,2 172 619,2 067 830 bp,G+C含量分别为35.03%,35.09%,34.96%,蛋白编码基因数量分别为2 022,2 057,1 923。遗传多样性分析结果显示,阳性扩增基因序列与标准菌株ATCC1848相对应的序列的同源性均在93%以上,其中TCTR、GroEL、LuxR1、IS1、DtxR、TR、TbdR1、TbdR2基因在阳性菌株中的同源性均在96%以上,而CAMP、Hema基因则存在较强的遗传多样性;3株非致病菌株DX1、YC1、YC2的OmpA、LipidA、Hema、CAMP、TbdR1、TbdR2、DtxR基因与其他菌株的同源性均在95%以上。全基因组序列比对分析显示,血清Ⅰ型菌株RC与CH3、RA-CH-1处于同一分支,血清Ⅱ型菌株RA、RS与RA-GD、RA-SG、RA-YM、ATCC11845菌株属于同一分支,同为血清Ⅱ型的RA、RS RA-CH-2菌株处于不同的遗传节点上。以上研究结果表明,鸭疫里默杆菌基因组存在遗传学多样性,OmpA、CAMP为鸭疫里默杆菌的非必需毒力因子,且某些优势血清型表型基因在鸭疫里默杆菌群体中发生了缺失,推测鸭疫里默杆菌的毒力因子间可能存在协同作用和网络调控。 相似文献
2.
为探索鸭疫里默杆菌不同血清型菌株的共同保护性抗原,克隆表达mazp基因,并采用动物试验测定表达蛋白的免疫原性。根据RA-GD株mazp基因核苷酸序列设计特异性引物进行PCR扩增,克隆测序获得RA-AF株细菌1 326bp的核苷酸片段,比较分析发现其保守性高。以克隆的mazp基因构建重组表达质粒pET-32a-mazp并转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导获得重组蛋白。重组蛋白为免疫抗原免疫小鸭15d后,RA-BSY(血清1型)和RA-AF(血清2型)攻毒的保护指数分别为77.8和62.4;抗血清能延迟发病和死亡时间。结果表明,鸭疫里默杆菌mazp蛋白具有免疫原性,免疫鸭对血清1型和2型RA感染具有抵抗力。 相似文献
3.
以鸭疫里默氏杆菌血清1型（RA1）基因组文库中筛选获得的一种“保守假定蛋白P25”基因的重组表达产物为包被抗原，建立了检测RA血清抗体的间接ELISA。诱导表达的重组P25蛋白纯化后进行包被，十字交叉滴定试验确定，此ELISA的最适抗原包被浓度为0．6μg／mL，血清最佳稀释度为1：64，与大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌感染鸭血清无交叉反应。以RA1的P25为包被抗原对RA2、5、8、10血清型的标准分型血清和经临床剖检诊断的病鸭血清进行检测，其结果均为阳性。以RA1型的P25基因设计的特异性引物分别扩增出了RA2、5、8、10的P25基因。所扩增的P25基因的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列和抗原表位在这些不同血清型间高度保守，提示此P25蛋白是各种血清型RA间的共同抗原，所建立的ELISA可以用于检测不同血清型RA的感染。 相似文献
4.
8株鸭疫里默氏杆菌安徽分离株的生物学特性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
鸭疫里默氏杆菌病是由鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染引起的主要发生于鸭的一种慢性或急性、高度接触性传染病。本研究开展了2017年分离自安徽的8株RA菌株的生物学特性研究。血清型检测结果表明,8株RA中6株为血清10型,2株为血清15型;对24种抗菌药物敏感性检测结果表明,RA对阿莫西林、头孢他啶和头孢吡啶敏感,对洛美沙星和阿奇霉素耐药;生物被膜检测结果表明,8株菌株中有7株为强生物被膜形成株,1株为弱生物被膜形成株;运用real-time PCR对强生物被膜形成菌株AH-1和弱生物被膜形成菌株AH-35中的生物被膜形成相关的5个基因进行检测,结果表明,与AH-35菌株相比,AH-1中的Riean_0023、Riean_1039和Riean_1564基因的转录水平均显著上调(p0.01)。本研究为安徽省RA的防控提供参考。 相似文献
5.
为分析猪链球菌4型(Streptococcus suis type 4,SS4)分离株的病原生物学特性,试验对来自中国不同地区的10株猪链球菌4型进行了多位点序列分型,通过PCR方法对猪链球菌7个保守管家基因aroA、gki、dpr、mutS、recA、thrA、cpn60进行扩增,测序后将结果上传至MLST数据库查找序列型,然后制作聚类分析图来阐明菌株之间的亲缘关系;采用PCR方法对7种主要的毒力基因gdh、mrp、epf、sly、fbps、gapdh与orf2进行鉴定,通过毒力因子谱来分析猪链球菌4型毒力因子的分布;以纯化的10株细菌对BALB/c小鼠进行动物致病性试验,根据小鼠致死数量筛选出最强毒株,并进行新西兰兔致病性试验。结果显示,10株猪链球菌4型经多位点序列分型,6株为ST850型,3株为ST1006型,1株为ST94型;结合菌株分离地区分析发现,广东和江苏地区菌株有较高的同源性,江沪地区菌株出现分化现象,表现为遗传多样性;10株菌株均检测到了gdh、gapdh和orf2毒力基因,7株检测到sly基因,4株检测到fbps基因,根据毒力因子谱发现共有3个毒力基因型,gdh+sly+gapdh+orf2+型有6株,gdh+fbps+gapdh+orf2+型有3株,gdh+sly+fbps+gapdh+orf2+型仅有1株。动物致病性试验表明,10株细菌均能使BALB/c小鼠死亡,其中SH1510的半数致死量低至1×108 CFU,对小鼠的致病性最强,将纯化的SH1510菌液接种新西兰兔,可使新西兰兔出现典型的神经症状并死亡。以上结果为猪链球菌的遗传进化、毒力研究提供了新的数据,丰富了猪链球菌病的研究。 相似文献
6.
为分析猪链球菌4型(Streptococcus suis type 4,SS4)分离株的病原生物学特性,试验对来自中国不同地区的10株猪链球菌4型进行了多位点序列分型,通过PCR方法对猪链球菌7个保守管家基因aroA、gki、dpr、mutS、recA、thrA、cpn60进行扩增,测序后将结果上传至MLST数据库查找序列型,然后制作聚类分析图来阐明菌株之间的亲缘关系;采用PCR方法对7种主要的毒力基因gdh、mrp、epf、sly、fbps、gapdh与orf2进行鉴定,通过毒力因子谱来分析猪链球菌4型毒力因子的分布;以纯化的10株细菌对BALB/c小鼠进行动物致病性试验,根据小鼠致死数量筛选出最强毒株,并进行新西兰兔致病性试验。结果显示,10株猪链球菌4型经多位点序列分型,6株为ST850型,3株为ST1006型,1株为ST94型;结合菌株分离地区分析发现,广东和江苏地区菌株有较高的同源性,江沪地区菌株出现分化现象,表现为遗传多样性;10株菌株均检测到了gdh、gapdh和orf2毒力基因,7株检测到sly基因,4株检测到fbps基因,根据毒力因子谱发现共有3个毒力基因型,gdh+sly+gapdh+orf2+型有6株,gdh+fbps+gapdh+orf2+型有3株,gdh+sly+fbps+gapdh+orf2+型仅有1株。动物致病性试验表明,10株细菌均能使BALB/c小鼠死亡,其中SH1510的半数致死量低至1×108 CFU,对小鼠的致病性最强,将纯化的SH1510菌液接种新西兰兔,可使新西兰兔出现典型的神经症状并死亡。以上结果为猪链球菌的遗传进化、毒力研究提供了新的数据,丰富了猪链球菌病的研究。 相似文献
7.
鸭疫里氏杆菌不同血清型广西株的分离鉴定 总被引：9，自引：0，他引：9
从广西部分地区9个发病鸭场的病料中分离出9株疑似鸭疫里氏杆菌，经培养特性、形态、染色性及生化反应特性等鉴定为鸭疫里氏杆菌（RA）。RA血清型分型试验结果表明，9株分离菌中有7株（GX1、GX2、GX3、GX4、GX5、GX6、GX8）属血清型Ⅰ型；另2株（GX7、GX9）与GX1株的阳性血清无交叉凝集反应，GX7、GX9株制备的阳性血清也无交叉凝集反应，表明这2株菌既非Ⅰ型又不属同型的RA。经致病性试验，GX1株具很强的致病力，能使北京鸭和本地麻鸭发病死亡，GX7和GX9株仅能使北京鸭发病死亡，而不致本地麻鸭发病。结果表明，广西存在着不同血清型的RA，而且有的菌株致病性很强。 相似文献
8.
血清2型鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)分离株经雏鸭体内复壮、回收、鉴定后,选取其中2株细菌NJ3和Yb2进行毒力测定,结果表明其半数致死量分别为5.62×107CFU和1.07×105CFU。选取5株细菌制备灭活油乳剂疫苗后免疫鸭,并进行攻毒保护试验。结果表明不同菌株制备的疫苗均可使免疫鸭产生高水平的RA特异性ELISA抗体和攻毒保护力,但是攻毒保护性差异较大,NJ3免疫后的攻毒保护性最好。抗体检测及攻毒保护实验表明NJ-3是较理想的制苗用菌株。 相似文献
9.
鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染是主要危害2~8周龄雏鸭的高致病性细菌性传染病。为研制血清10型RA灭活油乳剂疫苗,选取10株血清10型RA分离株进行动物体复壮、分离和鉴定后,分别对部分毒株进行了毒力测定和灭活油乳剂疫苗的研制。结果表明,所有试验用分离株对7日龄雏鸭均具有较强的致病力。分离株YXL1和HXb2的半数致死量分别为2.8×108 cfu和82 cfu,不同菌株之间的毒力差异很大。用研制的灭活油乳剂疫苗对雏鸭进行2次免疫后,免疫鸭可获得高水平的特异性抗体,并可抵抗强毒RA的攻击,以HXb2免疫后的攻毒保护性最好。抗体水平检测和攻毒保护试验结果表明,用血清10型RA分离株HXb2制备的油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫保护作用。 相似文献
10.
用预先设计好的hhdA和hhdB基因的PCR扩增引物,扩增不同血清型的副猪嗜血杆菌分离株中的hhdA和hhdB基因,将扩增产物与克隆载体pMD ^TM18-T连接,转化入感受态细胞DH5α,通过PCR、双酶切及序列测定,测序结果表明：扩增的16株HPS菌中有11株能扩增出hhdA基因,其中10株有测序结果,该10株菌的hhdA基因全基因序列有7种长度,分别为1754、1755、1758、1759、1760、1761和1762bp。另外,16株HPS菌中有9株能扩增出hhdB基因,该9株菌的hhdB基因全基因序列有7种长度,分别为1628、1637、1639、1640、1641、1646和1647bp。对于相同血清型的不同菌株来说,它们的2段目的基因序列长度两两不一致。强毒株中,71％的菌株均能扩增出hhdA和hhdB基因;中毒型菌株也基本可以扩增出hhdA和hhdB基因;而无毒型菌株均没有扩增出目的基因。同源性比对可知：所分离菌株的hhdA之间和hhdB基因之间,以及它们分别与GenBank中副猪嗜血杆菌SH0165的hhdA和hhdB基因之间序列同源性都在98％以上,说明所分离的菌株中均含有hhdA和hhdB基因序列。同源系统进化树分析可知,hhdA和hhdB基因在分离菌菌株间具有良好的保守性,可作为研制HPS新型疫苗的候选基因。 相似文献
11.
在鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白保守区设计了一对特异性引物,建立PCR方法,对5株已知血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌和6株临床分离未定型的里默氏杆菌菌株以及病死鸭病料组织进行检测,结果表明不同样品都可扩增出592bp的特异目的条带,而对鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌的扩增结果均为阴性,说明该PCR法具有较好的特异性,可用于快速鉴定鸭疫里默氏杆菌,也适用于病料的直接检测. 相似文献
12.
我国鸭疫里氏杆菌血清型的鉴定 总被引：44，自引：2，他引：42
１９９７年１月－１９９８年３月,从北京市２０个商品鸭场自然病死的北京白鸭和河南省与上海市部分鸭场的樱桃谷鸭分离到２７６株鸭疫里氏杆菌,采用凝集试验和琼脂扩散沉淀试验,对其进行了血清型的研究。其中７０株细菌为１型,６４株为２型,其余１４２株怀１,２,型参考菌株的抗血清发生反应。 相似文献
13.
B Huang S Subramaniam K L Chua J Kwang H Loh J Frey H M Tan 《Veterinary microbiology》1999,67(3):213-219
Riemerella anatipestifer is a gram-negative rod-shaped bacterium associated with epizootic infections in poultry. A total of 35 R. anatipestifer isolates including the type strain ATCC11845T, reference and field strains for 18 different serotypes were characterized by repetitive sequence based-PCR (rep-PCR) with outwardly-directed primers based on the repetitive extragenic palindromic (REP) consensus sequence. This technique was applied by using either extracted genomic DNA or preparation of whole bacterial cells harvested directly from plate cultures. Rep-PCR discriminated the R. anatipestifer isolates into 19 electrophoretic types. DNA fingerprints obtained from rep-PCR of extracted genomic DNA or from preparations of whole cells yielded comparable patterns. Substantial variation was seen among the rep-PCR fingerprints of different serotypes. Moreover, different polymorphisms of the rep-PCR fingerprints were evident among epidemiologically unrelated isolates of the same serotype. These results suggest the presence of repetitive extragenic palindromic-like elements within the genome of R. anatipestifer that can be used in some isolates to discriminate between different strains belonging to the same serotype. Rep-PCR may serve as a useful molecular tool for subtyping R. anatipestifer isolates for epidemiologic investigations. The whole cell procedure offers the advantage of ease of performance requiring only small quantities of cells. 相似文献
14.
鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病多重PCR诊断方法的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
参考GenBank中鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,应用PrimerPremier5.0软件在二者高度保守区设计了2对引物,建立了适合鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的快速检测的多重PCR检测方法。以该方法对已分离并保存的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌进行PCR扩增,分别扩增出与试验设计相符的670、408bp的特异性DNA片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果表明分别为鸭疫里默氏菌和大肠杆菌OmpA基因序列。该方法对鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的检测下限分别为4×104CFU/mL和3×104CFU/mL。表明所建立的PCR方法具有特异、快速和敏感的特点,可用于诊断鸭疫里默氏菌、大肠杆菌以及两者的混合感染。 相似文献
15.
我国鸭疫里默氏杆菌血清型调查及新血清型的发现和病原特性 总被引：75，自引：5，他引：70
从全国29个省(市、自治区)不同代次(原种、祖代、父母代和商品代)的5～90日龄患有典型鸭传染性浆膜炎的病死鸭分离到l842株鸭疫里默氏杆菌,血清型分布为l(638株)、2(367株)、3(102株)、4(146株)、5(89株)、6(49株)、7(87株)、8(68株)、10(43株)、ll(35株)、13(56株)、14(61株),另有101株不属于1～2l血清型,而分属于4个相同的抗原型,被命名为22(2l株)、23(18株)、24(34株)和25(28株)血清型。各血清型对雏鸭均具有较强致病性和免疫原性。 相似文献
16.
鸭疫里默氏菌基因分型 总被引：4，自引：0，他引：4
在鸭疫里默氏菌 (RA)血清分型的基础上 ,以提取的 RA基因组 DNA为模板 ,进行 Rep- PCR扩增。根据扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图谱 ,将分属于 8个血清型的 4 0株 RA区分为 12个不同的基因型 ,不同血清型 RA的图谱有明显差异 ,相同血清型 RA的图谱也存在差异。这些结果显示 ,RA基因组中重复的基因外的回文结构可用于区别相同血清型的不同分离株 ;Rep- PCR作为一种实用的分子生物学方法 ,在分子流行病学研究中可对 RA分离株进行基因定型 相似文献
17.
本研究根据鸭疫里默氏菌铁依赖抑制子(RaDtxR)基因序列特征设计特异性引物,利用PCR方法从已鉴定为2型鸭疫里默氏菌RA-FJ株的基因组DNA中扩增目的基因片段,胶回收PCR扩增片段,克隆到pMD18-T载体后进行序列测定.采用生物信息学软件对测序结果进行分析,结果表明所获得的RaDtxR基因编码完整的开放阅读框,全基因长度为654 bp,编码217个氨基酸.所编码的蛋白大小为24.82 ku,理论等电点为5.69,不稳定系数为38.45,属于稳定蛋白质类.将其与GenBank中已发表的RaDtxR基因序列进行核苷酸同源性比对分析,结果显示其与鸭疫里默氏菌疫苗株RA-CH-1株(GenBank登录号:CP003787)的核苷酸同源性为100.0%,与其他4株核苷酸同源性均为99.8%,仅在186位处存在无义突变.利用该基因对福建省农业科学院畜牧兽医研究所分离鉴定的鸭大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌和沙门氏菌进行扩增,结果显示均未扩增到条带,对福建省农业科学院畜牧兽医研究所分离鉴定的1型、2型、3型、11型和13型鸭疫里默氏菌均可扩增出特异性目的条带,表明RaDtxR基因可作为鸭疫里默氏菌鉴别诊断的靶基因.试验结果表明,本研究成功克隆到鸭疫里默氏菌RaDtxR基因,为研究其功能奠定基础. 相似文献
18.
猪链球菌是猪的一种重要病原菌,并且也会引起人的链球菌病。有35个荚膜血清型(1/21、~34),通常自发病或死亡猪体分离获得1,2,7,9型和14型菌株,其中2型是毒力最强的血清型。根据已知猪链球菌16 SrRNA及溶血素(sly)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、荚膜多糖(cps)、胞壁蛋白或溶菌酶释放相关蛋白(mrp)、胞外因子(epf)编码基因序列设计特异性引物,建立猪链球菌群和1(14),2(1/2),7型和9型特异性PCR或多重PCR,建立2型致病性菌株和1型高致病性菌株毒力鉴定PCR或多重PCR,用于检测和鉴别临床病料和细菌分离物中的猪链球菌,具有高敏感性和高特异性,与其他致病菌及其他血清的猪链球菌型无交叉反应,为疫病诊断及流行病学的研究提供了快速、简便和有用的工具。 相似文献
19.
北京地区鸭传染性浆膜炎的流行病学调查 总被引：35，自引：1，他引：34
１９９７ 年１０ 月～１９９８ 年１２ 月, 从北京地区３０ 个商品鸭场随机收集自然死亡鸭５６１ 只, 经过病理剖检和细菌分离鉴定, 确定２９ 个鸭场存在鸭传染性浆膜炎, ６１ ％ 的病例患有本病, 其日龄范围为７ ～４２ 日。结果说明,一年四季中, 鸭传染性浆膜炎均是引起北京地区肉鸭死亡的主要疾病, 广泛分布于该地区各养鸭场; 肉鸭日龄越小, 对本病越易感, 随着肉鸭日龄的增加, 尤其在５ ～６ 周龄后, 肉鸭对本病的抵抗力增加。从死亡鸭的脑、心血、肝脏、脾脏和胆囊均易分离到鸭疫里氏杆菌, 但从脑组织最易分离到该菌; 共分离到鸭疫里氏杆菌４２１ 株, 分别属于１ 、２ 、６ 、１０ 、１３ 、１４ 型, 其中１ 、２ 、６ 、１０ 型占总分离株的９６ ％ , 是目前主要流行的血清型。给健康鸭注射各血清型分离株的液体培养物均可复制出鸭传染性浆膜炎的临床症状和病理变化, 并引起鸭死亡。１０９ 株受试菌对红霉素、青霉素 Ｇ、新生霉素、痢特灵、氯霉素高度敏感。 相似文献
20.
Twelve Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes were differentiated by restriction fragment length polymorphism (RFLP) of polymerase chain reaction (PCR)‐amplified fragments from the outer membrane lipoprotein (omlA) gene. All 12 reference serotypes and 80 field isolates produced the expected 950‐base pair (bp) fragment of the omlA gene by PCR. Combining the RFLP patterns obtained with SfaNI, Bst71I, AluI, NciI, nine distinct patterns were observed in the 12 serotype reference strains. The PCR‐based RFLP analysis of omlA genes allows differentiation among the 12 serotypes, with the exception of group 1 (serotypes 1, 9 and 11), and group 2 (serotypes 2 and 8). When the PCR products from the 70 field isolates were subjected to RFLP analysis, 68 showed the same RFLP patterns as their respective serotype reference strain. Two isolates that could not be typed had the same RFLP patterns as those of serotype 5. These results suggest that PCR‐based RFLP analysis of the omlA genes may be of value in differentiating among 12 A. pleuropneumoniae serotypes. 相似文献