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1.
为研究太子参参须多糖(RPFRP)对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用及作用机制，本研究利用MTT法检测不同浓度RPFRP作用下的RAW264.7细胞的增殖情况，筛选出RPFRP的适宜浓度为25μg/mL～400μg/m L。将25μg/mL～400μg/m L RPFRP作用于RAW264.7细胞并于不同时间后收获细胞培养物或上清液进行后续试验。采用中性红法检测不同浓度RPFRP作用下的RAW264.7细胞的吞噬活性，结果显示：RPFRP可极显著提高RAW264.7细胞吞噬活性(P<0.01)，且该吞噬活性在PRFRP浓度为25μg/mL～200μg/mL时呈剂量依赖式升高；Griess法检测RAW264.7细胞的NO产生量，结果显示：RAW264.7细胞上清液中NO含量显著升高(P<0.05)，且呈RPFRP剂量依赖式升高；ELISA法检测RAW264.7细胞的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量，结果显示：与空白对照组相比，RPFRP处理的RAW264.7细... 相似文献
2.
《中兽医医药杂志》2020,(4)
研究菊花水提物对猫肾细胞(F81)的影响。制备杭白菊水提物,采用MTT法检测菊花水提物对F81的形态和增值的影响,用不同浓度的菊花水提物(分别为0 mg/mL,3.910×10~(-3)mg/mL,7.810×10~(-3)mg/mL,1.563×10~(-2)mg/mL,3.125×10~(-2)mg/mL,6.250×10~(-2)mg/mL)于6孔板中处理对数生长期F81细胞,后使用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率。结果发现,菊花水提液组和对照组相比,细胞外观无明显改变,两者的细胞相对增值率基本一致,并且二者细胞周期、凋亡率的测试结果在统计学上无差异。说明菊花水提物对F81细胞的增殖无抑制作用,对细胞的形态无影响,并且对细胞的周期、凋亡率也无影响,菊花水提物在合理的剂量范围对F81细胞无影响,是安全的。 相似文献
3.
将猪细小病毒(PPV)接种于F81和PK15细胞,研究不同的培养基、pH值、血清含量、细胞密度对病毒在细胞里增殖的影响,细胞毒液冻融3次后测半数组织细胞感染量(TCID50)。试验结果表明,接毒24 h后F81和PK15细胞都有病变产生,在细胞病变达到75%以上时收获细胞毒液,发现PPV在F81细胞和PK15细胞中均能增殖且病毒滴度比较高。测得F81细胞接种PPV最高滴度为108.71TCID50/mL;PK15细胞接种PPV最高滴度为108.73TCID50/mL。 相似文献
4.
《黑龙江畜牧兽医》2017,(15)
为了探究不同浓度的银杏叶复方在脂多糖(LPS)或植物血凝集素(PHA)刺激下对脾虚小鼠小肠淋巴细胞体外增殖的影响,试验用不同浓度的银杏叶复方(200μg/mL、100μg/mL、10μg/mL、1μg/mL、0.1μg/mL)同LPS或PHA刺激小肠淋巴细胞分裂增殖的方法研究对小鼠淋巴细胞体外增殖的影响。结果表明:对于脾虚小鼠小肠B淋巴细胞,以200μg/mL、100μg/mL的浓度刺激效果最佳(P0.05);相比于1μg/mL、0.1μg/mL浓度,浓度为200μg/mL时更有利于正常小鼠小肠B淋巴细胞增殖(P0.05);对于脾虚小鼠小肠T淋巴细胞,以100μg/mL浓度最佳(P0.05),浓度为200μg/mL和100μg/mL时对正常小鼠小肠T淋巴细胞的刺激增殖效果显著(P0.05)。说明银杏叶复方浓度为200μg/mL、100μg/mL时能有效刺激正常和脾虚小鼠的小肠淋巴细胞分裂增殖。 相似文献
5.
为了探究磷酸化乌兹别克甘草多糖(pGPS)的免疫增强作用，以鸡外周血T淋巴细胞和小鼠骨髓源树突状细胞为靶细胞，用MTT法和形态观察法测定了pGPS对鸡外周血T淋巴细胞增殖、对小鼠树突状细胞分化和增殖以及对淋巴细胞和树突状细胞细胞因子分泌的影响。结果显示：对于鸡外周血T淋巴细胞，在39.062～625μg/mL浓度的pGPS单独刺激时，淋巴细胞增殖率显著高于细胞对照组(P<0.05);在78.125～156.25μg/mL的pGPS与植物血凝素(PHA)共同刺激时，淋巴细胞增殖率显著高于PHA对照组(P<0.05);pGPS在39.062～312.5μg/mL时显著增加淋巴细胞分泌的干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)(P<0.05)。对于小鼠树突状细胞，pGPS组树突状细胞的刺突明显多于空白组；pGPS在0.977～15.625μg/mL时，未成熟树突细胞的增殖率显著高于脂多糖(LPS)对照组，并且显著促进树突状细胞IFN-γ和TNF-α的分泌(P<0.05)。结果表明：pGPS在合适的浓度能单独或协同PHA显著促进外周血T... 相似文献
6.
建立了新生小鼠原代背根节(Dorsal root ganglion,DRG)神经元细胞原代培养的方法,作为评价硫酸黏菌素毒性的体外研究模型.在此模型基础上,使用不同浓度的硫酸黏菌素作用细胞24h后,应用MTT方法观察细胞毒性效应并测定细胞半数抑制浓度(IC50).结果表明,不同浓度硫酸黏菌素处理细胞后,高剂量组DRG神经元细胞出现明显病变,硫酸黏菌素浓度低于10μg/mL时,对DRG神经元细胞存活率无明显影响,硫酸黏菌素浓度达到10μg/mL以上时,细胞存活率降低,出现细胞毒性,且毒性作用强度随药物浓度增加而增强;试验测得硫酸黏菌素对DRG神经元的半数抑制浓度(IC50)为222.7μg/mL. 相似文献
7.
为研究两面针水提物的抗朊病毒作用,借助酵母朊病毒[PSI+]表型系统分析两面针水提物对[PSI+]表型的治疗作用,引入半变性琼脂糖凝胶电泳技术在蛋白水平分析两面针水提物对酵母朊病毒的治疗效果.结果显示,两面针水提物浓度为125 mg/mL时,作用酵母朊病毒[PSI+]细胞5d的治愈率为90.2％；并且两面针水提物浓度在25 mg/mL～125 mg/mL范围内,药物剂量与酵母朊病毒[PSI+]表型治疗效果呈现较好正相关性.蛋白水平试验表明两面针水提物作用酵母朊病毒[PSI+]细胞5d后红色菌落的朊病毒聚集体大小与[psi-]相似. 相似文献
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为了探究新疆一枝蒿不同部位水提物的体外抗炎效果,本试验在体外用脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬白血病细胞(RAW264.7)构建炎症模型,采用水提法对新疆一枝蒿不同部位(叶、茎、花)进行提取,运用噻唑蓝(MTT)法检测新疆一枝蒿不同部位水提物对细胞活力度的影响,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其对炎症相关基因TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达的影响,Western blot检测其对TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白表达的影响。结果显示,新疆一枝蒿叶、茎、花水提物分别在0.078～1.250、0.078～5.000和0.078～1.250 mg/mL的浓度范围内对RAW264.7细胞活力度无显著抑制作用。与LPS模型组相比,新疆一枝蒿叶、茎、花水提物浓度范围在0.313～1.250、0.625～2.500和0.625～1.250 mg/mL时,细胞活力度分别提高了23.12%～28.14%(P<0.01)、10.88%～18.62%(P<0.01)和16.13%～16.76%(P<0.05)。浓度为1.250 mg/mL的叶水提物可以极显著降低TN... 相似文献
11.
试验旨在研究牛支原体P48蛋白对胎牛肺（embryonic bovine lung,EBL）细胞增殖和凋亡的影响。收集不同时间段、不同浓度P48蛋白与EBL细胞共孵育的样品,通过MTT法检测细胞增殖率;DAPI染核法观察EBL细胞核形态变化;流式细胞技术检测该蛋白诱导EBL细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测凋亡标志物的mRNA相对表达变化;Western blotting方法检测Bax和Beclin-1蛋白表达水平。结果显示：当作用时间为72 h,P48蛋白浓度在10 μg/mL时,对EBL细胞增殖有极显著的抑制作用（P<0.01）,在0.1和0.5 μg/mL时对EBL细胞的增殖的抑制作用不显著（P>0.05）;经蛋白诱导12 h细胞核形态未有明显变化,24 h细胞核形态发生皱缩和凝聚,48和72 h细胞核发生碎裂;凋亡标志基因mRNA表达在2和12 h没有明显提高,在24、48、72 h有显著提高,与作用时间呈正相关,同时凋亡相关蛋白Bax和Beclin-1的表达随之显著提高。流式细胞技术结果显示P48蛋白诱导EBL细胞凋亡率为48.44%。综上表明,牛支原体P48重组蛋白能够抑制EBL细胞的增殖,促进细胞凋亡,为进一步揭示牛支原体的致病机制提供参考依据。 相似文献
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ZHANG Shengying WU Xiaochun XING Xiaoyong LIU Jia YUE Yahui ZHANG Yangyang HE Jian WEN Fengqin BAO Shijun 《中国畜牧兽医》2007,47(10):3149-3157
The aim of this study was to investigate the effect of P48 protein on proliferation and apoptosis of embryonic bovine lung (EBL) cells.In this study,samples which co-incubated with P48 protein and EBL cells in different concentrations at different time points were collected,the proliferation rate of the cells was detected by MTT method,and the changes in the nuclear morphology of EBL cells were observed by DAPI staining method.Meanwhile,flow cytometry was used to detect the apoptosis rate of EBL cells induced by P48 protein.Real-time quantitative PCR was used to detect the changes in mRNA level of apoptotic marker genes,and Western blotting tested the Bax and Beclin-1 protein expressions.The results showed that under the condition of 72 h and 10 μg/mL of protein concentration treatment,P48 extremely significantly inhibited EBL cells proliferation (P<0.01),while 0.1 and 0.5 μg/mL protein concentration had no inhibitory effect (P>0.05).The nuclear morphology showed no significant change after protein induction for 12 h,but wrinkled and condensed at 24 h.The nucleus was fragmented,and a sprouted apoptotic body was appeared at 48 and 72 h.Apoptosis related genes expression showed no obvious increase at 2 and 12 h at mRNA level,but gradually increased at 24,48 and 72 h,and it showed a time-dependent manner.Accordingly,the expression of apoptosis marker proteins Bax and Beclin-1 significantly increased.Flow cytometry analysis showed that the apoptosis rate of EBL cells induced by P48 protein was 48.44%.In conclusion,P48 recombinant protein of Mycoplasmas bovis inhibited the proliferation of EBL cells and promoted their apoptosis,which provided reference for revealing the pathogenic mechanism of Mycoplasmas bovis. 相似文献
13.
本试验通过传代培养奶牛子宫内膜上皮细胞,以0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL 7个LPS浓度梯度刺激细胞,分别于刺激后12h、24h、36h 3个时间段做MTT细胞毒检测,同时进行细胞形态学观察,研究LPS对子宫内膜上皮细胞的毒性作用。结果发现：0.1μg/mL、1μg/mLLPS组细胞形态学无明显改变;10μg/mL、50μg/mL、100g/mL LPS组细胞形态学与对照组相比有明显改变,500μg/mL、1000μg/mL LPS组细胞发生裂解、死亡。MTT试验结果表明LPS对细胞的抑制作用呈浓度与时间依赖关系,随着LPS浓度的增加和刺激时间的延长,细胞抑制率明显增加,细胞活力明显降低。 相似文献
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为了筛选对H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）有独特防治效果的中药复方,本试验基于禽流感发病临床症状、结合中药复方用药基本原则,组方芩根提取液（Qingen extract,QG）,以奥司他韦（达菲,DF）为阳性对照药,通过研究药液对神经氨酸酶（neuraminidase,NA）的抑制作用,采用CCK-8法测定药液对犬肾上皮细胞（MDCK）毒性作用,并从病毒吸附、增殖和灭活3个方面做了药效评价。结果表明,QG对NA的抑制作用在一定浓度范围内呈浓度依赖性增高,半数抑制浓度（IC50）约为1 130 μg/mL;QG和DF的最大安全浓度分别为2 500和500 μg/mL,H9N2 AIV的TCID50为10-4.36/100 μL;QG浓度为156.25~2 500 μg/mL范围内,对H9N2 AIV的病毒毒力有一定抑制作用,并在MDCK细胞上呈现出一定的抗吸附、抑制病毒复制作用。表明QG在对抗H9N2 AIV的NA活性、抑制H9N2 AIV吸附靶细胞和在细胞内复制有一定的作用。 相似文献
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为探讨不同浓度的绿萝花制剂对线粒体的抗氧化作用及毒理作用,以小鼠胚胎成纤维细胞及其线粒体为研究对象,在最大无毒作用浓度(TC_0)的基础上设计3个浓度药物组,在TC_0下设计6个浓度药物组,以成纤维细胞线粒体膜电位(MMP)和线粒体总活性氧含量(ROS)为检测指标,在4个不同作用时间点,研究绿萝花对成纤维细胞线粒体的影响。结果表明,绿萝花制剂对鼠胚成纤维细胞(MEF)的TC_0为0.25g/mL,但ROS已急剧上升,MMP下降;绿萝花浓度为0.03g/mL时,抗氧化能力最强,随着浓度的上升(0.03g/mL~0.25g/mL),线粒体抗氧化能力减弱或消失;随着给药浓度的升高,细胞凋亡现象出现趋势明显,浓度高于TC_0时,表现出毒性作用,浓度升高,毒性增大。绿萝花干膏制剂0.03g/mL(以生药含量计算)具有抵抗由H_2O_2引起的MEF线粒体MMP下降和ROS的升高的功能,表现出一定的抗氧化能力和阻滞细胞凋亡发生的作用;TC_0及之上浓度具有细胞毒性作用。 相似文献
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为研究不同浓度的芒硝对体外培养的驴皮成纤维细胞增殖、凋亡的影响,本试验采用组织块法体外培养驴皮成纤维细胞,并用HE、Masson染色鉴定;再添加高（2 000、1 500 μg/mL）、中（1 000、500、250 μg/mL）和低浓度（100、50、10 μg/mL）芒硝体外培养驴皮成纤维细胞,用MTT和Caspase-3法分别检测成纤维细胞增殖率和凋亡率;最后用实时荧光定量PCR、ELISA法检测不同浓度（1 500、250、10 μg/mL）芒硝培养液中影响驴皮成纤维细胞胶原蛋白合成的相关基因表达量及蛋白浓度。结果显示,培养5 d时,驴皮成纤维细胞开始从组织块边缘爬出,25 d后长满培养皿;HE染色呈典型的梭形,驴皮成纤维细胞中胶原纤维经Masson染色呈蓝色。中浓度芒硝培养液组成纤维细胞的增殖率显著高于高、低浓度组（P<0.05）,相应地,中浓度组的凋亡因子Caspase-3活性显著低于其他两组（P<0.05）。相比于24 h,芒硝作用于成纤维细胞48 h能显著提高胶原蛋白合成相关基因的表达量（P<0.05）,250 μg/mL浓度的效果最佳。综合上述结果,组织块培养法易于分离培养驴皮成纤维细胞,250 μg/mL浓度的芒硝在48 h能显著提高驴皮成纤维细胞的增殖率及其胶原蛋白合成相关基因的表达量,此结果可为芒硝促进驴皮成纤维细胞的增殖作用以及驴皮伤口愈合机制的研究提供理论依据。 相似文献
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本试验旨在研究不同浓度苜蓿黄酮对体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖与抗氧化的影响。试验利用含不同浓度0 μg/mL(对照组)、25 μg/mL(试验Ⅰ)、50 μg/mL(试验Ⅱ)、75 μg/mL(试验Ⅲ)、100 μg/mL(试验Ⅳ)苜蓿黄酮的培养基进行细胞培养。结果表明,1)细胞培养第3天,各组细胞增殖无显著差异,但第5天试验Ⅱ~Ⅳ组细胞增殖能力极显著高于对照组和试验I组(P<0.01)。2)试验Ⅱ~Ⅳ组一氧化氮(NO)水平明显高于对照组与试验Ⅰ组,且差异极显著(P<0.01)。试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅳ组的乳酸脱氢酶(LDH)活性显著低于对照组与试验Ⅲ组,且差异极显著(P<0.01),但对照组与试验Ⅲ组差异不显著。3)试验Ⅳ组细胞内过氧化氢酶(CAT)含量极显著高于其他各组(P<0.01),而试验Ⅲ组丙二醛(MDA)含量极显著低于其他各组(P<0.01);试验Ⅱ和Ⅲ组的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性极显著高于其他各组(P<0.01),而各处理组细胞的超氧化物歧化酶(SOD)含量差异不显著。4)试验Ⅱ和Ⅲ组细胞p53、Caspase-3、SOCS3和STAT1基因的相对表达量极显著低于对照组(P<0.01)。因此,苜蓿黄酮能够促进体外培养奶牛乳腺上皮细胞的增殖,提高细胞抗氧化的能力,抑制细胞凋亡,其中添加浓度为75 μg/mL组效果最好。 相似文献
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以正常人肝细胞（L-02细胞）为研究对象,根据细胞增殖率、活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量等指标的变化研究黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）的毒性作用及氧化应激损伤,选用VC作为AFB1损伤肝细胞的保护剂,通过比色法测定细胞的相对存活率,从细胞周期的变化和细胞凋亡率研究AFB1引起L-02细胞凋亡的程度及机制。结果表明：根据AFB1的半数细胞抑制率（inhibition of cell,IC）（IC 相似文献