国内病猪中猪链球菌2型分离株溶血素基因的PCR检测及序列分析     

倪艳秀  何孔旺  俞正玉  温立斌  吕立新  张雪寒  郭容利  周俊明  茅爱华  陆承平 《江苏农业学报》2009,25(5)

以探明猪链球菌2型(SS2)国内病猪分离株的溶血素基因(sly)的分布情况及其序列为目的.通过聚合酶链反应(PCR)方法检测29株不同年代、不同地区SS2国内分离株的sly,并将其中的5株(SS2-1、HA9801、HA0507、JR0507和ZY05719)sly 进行克隆及序列分析.结果显示:29株菌都有sly,其中5株菌的sly的ORF的碱基数目都为1 494 bp、编码497个氨基酸,核苷酸序列的同源性为99.7%～100.O%,所推导的蛋白质序列的同源性为99.8%～100.O%,其中SS2-1、HA9801、HA0507、JR0507与国外参考株P1/7的序列完全一致.表明中国猪链球菌2型病猪分离株普遍具有sly,且基因序列极为保守.  相似文献   

2013～2014年猪嵴病毒分子检测和3D基因遗传变异分析     

倪艳秀  何孔旺  茅爱华  俞正玉  李彬  郭容利  吕立新  祝昊丹  周俊明  温立斌  张雪寒  王小敏  汪伟 《农业科学与技术》2015,(3)

[目的]为调查猪嵴病毒（ PKV）在我国哺乳仔猪中的流行和变异情况。[方法]采集2013～2014年我国5个省份27个猪场224份哺乳仔猪腹泻粪样,采用 RT-PCR方法对 PKV的3D基因进行检测,并对其中的29个 PKV 3D基因进行序列测定和遗传变异分析。[结果]腹泻粪样中PKV总阳性率为65.18％（146/224）,猪场PKV总阳性率为85.2％（23/27);29个 PKV 3D基因与国内外6株其他 PKV株相关序列的核苷酸同源性为87.0％～100％,所推导的氨基酸序列同源性为92.7％～100％。[结论]我国哺乳仔猪中普遍存在 PKV感染,PKV 3D基因呈现多样性。  相似文献   

H7-HCP-Tir-Intimin高效降低小鼠粪便中大肠杆菌O157:H7排菌     

张雪寒  何孔旺  叶青 《中国兽医学报》2014,(3):465-470

构建BL21(PcoldⅠ-fliC-hcpA-tir-eae),并评价对小鼠的免疫原性,以期研制更加有效的候选免疫原,最大限度降低E.coli O157:H7对食物、环境和人类的危害。将946、423、309、811bp的fliC,hcpA,tir和eae基因被依次克隆,中间添加8个氨基酸的间隔序列,构建重组菌BL21(PcoldⅠ-fliC-hcpA-tir-eae)。进口白油和ISA50V作为佐剂与重组蛋白乳化,制备2种油乳剂疫苗,分别接种4周龄BALB/c雄鼠,二免21d,口服攻击E.coli O157:H7109 CFU/只,每天采集粪便,检测排菌。结果显示,2种重组疫苗均能够诱导高滴度血清IgG。ISA50V佐剂组抗体产生早于进口白油佐剂组,但进口白油佐剂组抗体滴度一致性更好。所有免疫组小鼠排菌极度降低,第1天排菌低于104 CFU/g,第5天检测不到排菌,整个检测期无反弹,而对照组在整个检测期排菌持续很高(>104 CFU/g)。结果表明,四价重组蛋白H7-HCP-Tir-Intimin能够高效降低口服大肠杆菌O157:H7后的排菌,极显著降低细菌的定植,很大程度减少病原传播,对环境和人类的威胁。  相似文献   

猪源马链球菌兽疫亚种类M蛋白原核表达及其小鼠免疫保护力分析     

周俊明  何孔旺  倪艳秀  祝昊丹  俞正玉  茅爱华  吕立新  温立斌  张雪寒  王小敏  汪伟  李彬  郭容利 《江苏农业学报》2015,(3)

为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重组类M蛋白质后,3次免疫小鼠,用同源菌株CY攻击。诱导获得分子量约5.8×104的重组蛋白质,免疫印迹结果表明该重组类M蛋白质能够被马链球菌兽疫亚种猪多抗识别。类M蛋白质免疫小鼠的存活率为60%,弗氏佐剂乳化灭活CY免疫小鼠的存活率为70%,PBS对照组小鼠攻毒后6 d内全部死亡。表达的类M蛋白质可以给予ICR小鼠部分的免疫保护力,保护效果略低于CY全菌灭活苗,提示可以对马链球菌兽疫亚种多种免疫保护性抗原进行联合,从而进一步提高对动物的免疫保护力。  相似文献   

肠出血性大肠杆菌O157:H7紧密素单克隆抗体的制备及鉴定     

李盟  张雪寒  何孔旺  黄克和 《畜牧与兽医》2014,(3):37-40

以基因重组技术构建工程菌株表达肠出血性大肠杆菌O157:H7紧密素的融合蛋白。用纯化的紧密素蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经4次有限稀释法克隆,成功获得2株能稳定传代并分泌抗紧密素单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。2株单抗分别制备腹水,ELISA检测效价分别为5.2×104,2.5×104。Western blot检测表明,2株单抗与融合蛋白发生特异性反应;ELISA检测表明,2株单抗可特异性检出大肠杆菌O157:H7。本研究为建立大肠杆菌O157检测方法提供了物质基础。  相似文献   

猪博卡病毒NP1基因的克隆与原核表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

李彬  毛立  何孔旺  温立斌  茅爱华  张雪寒  倪艳秀  郭容利  马俊杰  周俊明  吕立新  俞正玉 《华北农学报》2011,26(3):28-31

猪博卡病毒是近年来新发现的一种细小病毒.本研究根据其部分基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了一对引物,采用PCR方法扩增出了猪博卡病毒的NP1基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a-NP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,...  相似文献   

河北省鸡传染性法氏囊病母源抗体的调查     

王红梅  沈海娥  侯绍华  李呈军  张雪寒  康孟佼 《畜牧兽医杂志》2001,20(3):14-16

用AGP试验抽样检测了我省不同地区的6个鸡场，共91只1日龄雏鸡的传染性法氏囊病（IBD）的抗体阳性率。结果表明：6个鸡场中1日龄传染性法氏囊病母源抗体阳性率均偏低，鸡场最高的阳性率也只有62.3%，有的甚至接近于零。并根据具体情况提出了适当调整鸡免疫程序的措施。  相似文献   

仔猪水肿病的诊断     

张雪寒  沈海娥  王红梅  李呈军  候绍华  康孟佼 《今日畜牧兽医》2000,(10)

仔猪水肿病是由肠道溶血性大肠杆菌产生的毒素所引起的全身或局部麻痹、共济失调以及胃壁、结肠系膜、面部及全身水肿为特征的疾病，具有急性、散发性特点，主要发生于断奶后仔猪。 １．发病情况　肃宁县某个体经营的养猪场，每年出栏育肥猪２００头。仔猪均由集市分４批购进，每批５０头，均有发病，发病率达６０％，死亡率几乎１００％。发病猪均是身体强壮，采食快而多者，表现颜面水肿，有神经症状，后躯瘫痪后即死亡。经调查，该仔猪日粮中，玉米含量达８０％以上，且经常大量饲喂豆腐渣。发病后，使用青霉素、沙星类药物进行治疗，效…  相似文献   

“777”猪用超级料精效果的认定     

张雪寒  朗仲武 《农业与技术》1995,(1):48-50

本文根据对４５０头体重１８ｋｇ的三元杂交商品瘦肉型猪，应用旺龙牌７７７猪用超级料精，进行为期１２０天的育肥效果观察。结果表明：在商品瘦肉型猪的直线育肥期使用旺龙牌７７７猪用超级料精，能够获得良好的经济效益，每头猪可获纯利润达２２３．５５元；可使猪的平均日增重达８３４ｇ／头、日；料肉比为３．０３：１。  相似文献   

出血性大肠杆菌O157: H7 Stx2B-Tir-Stx1B多价融合蛋白表达及免疫原性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

张雪寒  何孔旺  卢维彩  赵攀登  温立斌  李彬  郭容利  王小敏  倪艳秀  周俊明  俞正玉  茅爱华  吕立新 《华北农学报》2010,25(4)

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157∶ H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势.构建表达tir和stx1b的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stx1b亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-tir-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右.重组蛋白纯化后皮下途径免疫小鼠,能够诱导高滴度(105)的IgG,鼻腔内途径免疫小鼠不仅能够诱导高滴度(104)的IgG,还能诱导高达102的IgA.二免后攻击50LD50的EHEC O157∶ H7,相对于对照组,免疫组粪便中排菌量明显降低、排菌时间明显缩短.结果表明:该融合蛋白免疫原性良好,并且由Tir、Stx2b和Stx1b三部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和志贺毒素(Stx)的抗体,在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值.  相似文献