猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株的分离鉴定及耐药性研究     

王丹丹  陈国强  张常印  俞正玉  祝昊丹  周俊明  吕立新  何孔旺  李彬  倪艳秀 《中国畜牧兽医》2019,(10)

为了确定引起2018年5月江苏泰州某规模化养猪场育肥猪发病死亡的病原,本试验无菌采取病死猪肺脏组织,通过病原分离培养、染色观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,随后对分离菌株进行致病性和耐药性试验。结果显示,该分离菌株在病原分离培养过程中,需在含有NAD的培养基中才能生长;该分离菌通过革兰氏染色,显微镜观察细菌呈红色,可判定新分离的菌株为革兰氏阴性菌;根据生化试验和PCR结果可判定该分离菌株为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌;PCR血清型分型结果显示,分离菌株为猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株;小鼠毒力试验结果显示,当分离株菌液浓度达到3×10~8 CFU/mL时便可引起BALB/c小鼠死亡,浓度为2×10~9 CFU/mL时对BALB/c小鼠的致死率达到100%,表明该分离菌株对BALB/c小鼠有较强的致病力及致死性;药敏试验结果表明,该分离菌株对头孢噻吩、头孢噻肟、氨曲南、头孢吡肟、头孢曲松、氧氟沙星等14种抗菌药物高度敏感,对氨苄西林中度敏感,对链霉素耐药。综合以上试验结果表明该猪场存在猪胸膜肺炎放线杆菌血清8型菌株感染情况。  相似文献   

猪链球菌病疫苗研究进展     

何孔旺  周俊明 《动物保健》2009,(8):22-23

猪链球菌病是由多种猪源链球菌所引起的猪的多种病症的总称。其病原包括C群马链球菌兽疫亚种（简称C群菌）、猪链球菌（主要有致病性较强的猪链球菌2型（简称SS2）、猪链球菌9型（简称SS9））以及D群和E群链球菌等。临床表现为急性死亡、急性败血症、脑膜炎、关节炎、心内膜炎、多发性浆膜炎、肺炎、母猪流产以及化脓性淋巴结炎、颊部或颈部脓肿等。近年来,猪链球菌病在我国呈现不断上升的趋势,不仅可以直接致病,而且是猪病混合感染和（或）继发感染的常见病原,  相似文献   

猪传染性胃肠炎与流行性腹泻     

何孔旺 《农家参谋》2004,(12):30

猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎是猪腹泻中最为重要的两种病毒性腹泻症。在我国流行十分广泛,全国各地均有发生与流行,每年冬春季节在猪群中流行。流行特点病猪及带毒猪是主要的传染源,病毒随粪便、乳汁、呕吐物、鼻分泌物、呼出的气体排出,污染饲料、饮水、空气、土壤、用具等,  相似文献   

猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的流行病学调查     

王小敏  何孔旺  张文文  周忠涛  茅爱华  俞正玉  温立斌  倪艳秀  张雪寒  郭容利  吕立新  李彬  周俊明 《华北农学报》2012,(Z1):390-394

研究2009-2010年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)混合感染的情况。采用PCR和RT-PCR方法对采集自我国安徽、江苏、山东、浙江等7省的227份组织和血清样品进行PCV2和PRRSV检测。PCV2a感染率为15.9%,PCV2b感染率为44.5%,PRRSV感染率为45.8%,其中17份样品表现为PCV2a和PRRSV的混合感染,50份样品表现为PCV2b和PRRSV的混合感染,10份样品表现为PCV2a,PCV2b和PRRSV的混合感染,分别占样品总数的7.5%,22.0%和4.4%。猪群中PCV2和PRRSV的感染比较普遍,混合感染率也较高,加重了疫病防控的难度。  相似文献   

苦参碱、水苏碱和防己诺林碱抗细菌内毒素的作用研究     

胡屹屹  何孔旺  倪艳秀 《江西农业大学学报》2012,(1):129-133

拟探讨3种中药生物碱苦参碱、水苏碱和防己诺林碱对细菌内毒素(LPS)的治疗作用。ICR小鼠腹腔注射6 mg/kg的内毒素3 h后,根据分组情况分别腹腔注射高(10 mg/kg)、中(5 mg/kg)、低(1 mg/kg)3个剂量的苦参碱、水苏碱和防己诺林碱。同时设立LPS对照组、空白对照组和药物对照组。记录LPS攻毒后48 h内各组小鼠临床表现,测定体温、体重及器官指数,检测血清中LPS和炎症因子的含量。结果显示,苦参碱、水苏碱和防己诺林碱能显著改善体温升高、体重减轻、血清中LPS和炎症因子含量升高、内脏肿大等病变。表明以上3种中药生物碱具有明显的抗细菌内毒素作用,为其在兽医临床治疗细菌内毒素疾病提供理论依据。  相似文献   

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建     

张雪寒  何孔旺  赵攀登  栾晓婷  叶青  温立斌  倪艳秀  李彬  郭容利  王小敏  周俊明  俞正玉  茅爱华  吕立新 《江苏农业学报》2012,(2):337-343

为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-Kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。  相似文献   

猪病毒性腹泻症及其防治对策     

何孔旺 《河南畜牧兽医(综合版)》2004,25(10):23-25

猪传染性腹泻是一类与卫生状况及饲养管理密切相关的传染病。在养猪发达国家此类疫病已不再是主要问题,但在我国仍然是危害严重的一类传染病。此类传染病的病原主要包括病毒、细菌以及寄生虫。其中,猪病毒性腹泻的发生与流行在近年呈现持续上升的趋势,已成为造成猪场损失的最为重要的原因之一。而在猪病毒性腹泻中危害最大的是猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻以及猪轮状病毒感染。1猪传染性胃肠炎(TGE)与猪流行性腹泻(PED)1.1病原特性TGE与PED的病原分别是猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV),两病毒均属冠状病毒属,从…  相似文献   

猪链球菌4型转录调控因子GalR的生物学特性     

孙珂  祝昊丹  何孔旺  王丹丹  周俊明  俞正玉  吕立新  倪艳秀 《中国农业科学》2019,52(19):3485-3494

【目的】 研究分析猪链球菌4型（Streptococcus suis serotype 4,SS4）强毒株SH1510 转录调控因子GalR基因的缺失对细菌生物学特性的影响,为进一步研究GalR对半乳糖代谢途径的调控及其致病机理提供理论依据。【方法】 利用同源重组双交换的方法构建了SS4强毒株SH1510 转录调控因子GalR基因缺失株SH1510ΔGalR,通过GalR基因内部扩增引物I1/I2进行缺失株初步筛选,进一步通过PCR和Western blotting鉴定缺失株SH1510ΔGalR。对亲本株SH1510和缺失株SH1510ΔGalR进行革兰氏染色以比较形态差异;配置基础培养基,分别加入葡萄糖、蔗糖、D-半乳糖后培养细菌,绘制细菌生长曲线,比较细菌对不同糖的利用率;将亲本株和缺失株的菌液浓度分别调整为2.5×10 ⁹、5×10 ⁸、1×10 ⁸、2×10 ⁷ CFU/mL,对BALB/c小鼠进行腹腔注射以观察小鼠致死率并使用Reed-Muench法计算菌株LD₅₀。将浓度为2×10 ⁷CFU/mL的亲本株和缺失株1﹕1等体积混合后腹腔注射BALB/c小鼠,24 h后取脑、脾、血在氯霉素抗性和无抗性THB平板上进行细菌计数,比较细菌在小鼠体内的定植能力;并以健康猪的全血模仿体内环境,将亲本株和缺失株分别加入含有SS4抗血清的健康猪全血中,37℃孵育2 h进行平板计数,比较细菌在全血中的存活能力。【结果】 使用内部检测引物I1/I2做PCR,缺失株SH1510ΔGalR检测为阴性,进一步使用引物C1/C2、O1/C2、O2/C1、O1/O2鉴定缺失株SH1510ΔGalR,分别扩增出1 056、2 121、2 094、3 147 bp的片段,结果和预期相符。Western blotting 鉴定结果表明亲本株SH1510可与粗制GalR多抗兔血清发生特异性结合,在37 kD处出现单一条带,但缺失株SH1510ΔGalR没有条带出现。PCR和Western blotting鉴定结果均表明缺失株SH1510ΔGalR已构建成功。亲本株和缺失株经革兰氏染色,光学显微镜下观察可见亲本株和缺失株均呈链状排列,长度相似,形态无显著差异。在葡萄糖和蔗糖作为唯一糖原的生长条件下,亲本株和缺失株的生长情况相仿,而当糖原为D-半乳糖时,缺失株的生长速率和OD₆₀₀值明显低于亲本株。另外,从最高OD₆₀₀值可以看出,猪链球菌SH1510对糖的利用率为葡萄糖>蔗糖>D-半乳糖。 小鼠致病性试验中,亲本株和缺失株的LD₅₀分别为1×10 ⁸CFU和1.62×10 ⁸CFU,缺失株对小鼠的致病性下降了1.62倍。体内竞争感染试验结果显示,缺失株在小鼠的脑、脾、血液中的细菌分离数均远低于亲本株,差异极显著（P＜0.01）。全血存活试验表示,亲本株的存活率为35.2%,缺失株的存活率为27.3%,缺失株SH1510ΔGalR比亲本株SH1510在全血中的存活率显著下降（P＜0.05）。【结论】 GalR 基因可促进猪链球菌4型对半乳糖的利用,同时对SH1510的毒力有直接或间接的调控作用。  相似文献   

猪圆环病毒2型ORF1部分位点突变对病毒复制能力的影响     

李荷然  肖琦  温立斌  朱雪蛟  芮荣  何孔旺 《畜牧与兽医》2024,(1):71-76

猪圆环病毒2型(PCV2)可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征,导致仔猪逐渐消瘦。PCV2 ORF1表达的Rep蛋白及其剪切体Rep′是PCV2复制所需的重要蛋白。为了研究PCV2 ORF1部分位点对PCV2复制能力的影响,本试验通过构建PCV2 ORF1区域点突变双拷贝感染性克隆质粒,在无PCV2污染的PK-15细胞中进行病毒拯救,使用荧光定量PCR检测不同位点突变病毒培养不同代次上清液的Ct值。结果：将PCV2 Rep的17 aa、19 aa、20 aa和21 aa突变为丙氨酸后病毒无法成功拯救,2 aa突变后严重影响病毒的复制能力,3 aa、5 aa和18 aa突变后病毒的复制能力增强且细胞病毒载量高于PCV2原毒株,推测17 aa、19 aa、20 aa和21 aa是影响PCV2复制的关键作用位点。本研究结果为未来PCV2复制相关研究提供了试验依据。  相似文献   

正常屠宰猪致病性猪链球菌7型的鉴定和特性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

茅爱华  倪艳秀  吕立新  俞正玉  周俊明  胡东波  温立斌  张雪寒  郭容利  李彬  王小敏  何孔旺 《江苏农业科学》2011,39(5)

从江苏某地正常屠宰猪扁桃体分离到1株细菌,命名为HA100111.该细菌呈链球菌的特征形态,药敏试验表明该菌株对多种抗生素有耐药性.经PCR及序列分析,确定该分离菌株为猪链球菌7型,其毒力因子基因型为gdh +/mrp -/epf-/sly -/orf2 +/fbps+.动物致病性试验表明,该菌对ICR小鼠和新西兰兔有较强的致病性,对ICR小鼠半数致死量为2.67 ×107 CFU,但是对仔猪无明显致病作用.得出结论,在正常猪扁桃体中可携带致病性的猪链球菌7型.  相似文献