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以猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）北美株感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR获得在病毒基因组5′非编码区（5′UTR）和ORF1起始密码子之间插入NdeⅠ的全长克隆pTLNd4,并以此为基础将5′UTR替换为欧洲株的5′UTR,获得全长克隆pTLV8。以体外转录的RNA转染MARC-145细胞。结果显示,pTLNd4产生了细胞病变（CPE）,而pTLV8未产生。通过RT-PCR和Northern blot试验,分别对这2株突变病毒的基因组RNA复制和亚基因组mRNA转录水平进行了分析,同时还对pTLNd4进行了病毒学试验。证实,它们与亲本病毒无论从分子生物学水平或病毒学水平都无明显差异;pTLV8虽未产生CPE,但在病毒传代细胞中检测到了基因组RNA,说明替换不同基因型5′UTR的突变病毒虽然丧失了复制能力和感染性,但仍然能够提供病毒RNA合成所需要的顺式调控因子。 相似文献
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为调查回肠炎在华东地区三省一市规模化猪场的感染状态,本研究利用商品化的胞内劳森氏菌快速检测试剂盒Lawsonia FirsttestTM对来自21个规模化猪场采集的321份粪便样品进行胞内劳森氏菌检测.经检测21个规模化猪场100％存在回肠炎感染,而且感染率随着猪只日龄增长而逐渐升高.4周龄仔猪即存在感染,感染率为9.1％,8周龄(41.5％)～10周龄(67.9％)为主要感染开始期,12周龄(94.3％)～14周龄(87.9％)为感染高峰期,所检测样品的总体阳性率为59.81％,强阳性率为31.2％,结果表明,华东地区规模化猪场普遍存在亚临床型回肠炎感染. 相似文献
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传染性牛鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)是牛的重要传染病病原,除能引起呼吸道疾病外,还可引起结膜炎、流产、脑炎和全身性感染。本试验从广东某牛场疑似IBRV感染牛中采取鼻拭子样品,用PCR和荧光PCR方法,初步诊断病牛感染IBRV。用MDBK细胞对初诊阳性病料进行病毒分离和鉴定,分离出1株传染性牛鼻气管炎病毒,命名为GD0109。细胞感染试验表明,该株病毒可以使MDBK细胞产生典型的圆缩、呈葡萄样聚集以及空洞等细胞病变。将GD0109与强毒的ATCCVR-2112TM株感染细胞裂解液分别接种MDBK细胞并盲传5代,对5代、10代、15代的病毒分别进行TCID50测定及中和试验,结果表明分离株和参考株VR-2112TM相似,提示该分离株为强毒株,并且具有良好的传代稳定性,为进一步疫苗生产打下良好的基础。 相似文献
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检测猪链球菌２型的溶菌酶释放蛋白（ＭＲＰ）的ＰＣＲ方法的建立 总被引：15，自引：1，他引：14
根据猪链球菌２型的mrp基因自设计和合成了一对可扩增长度为８８５bp目的片段的引物，成功地建立了检测溶菌酶释放蛋白（ＭＰＲ）的ＰＣＲ方法，用ＸbaⅠ内切酶进行酶切，获得了与预期一致的５７8bp和３０７bp２的２个片段，并进行了ＰＣＲ的特异性试验和敏感性试验。对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和猪肺炎支原体的ＰＣＲ检测结果均呈阴性；检测的敏感度可达１００个细菌。另外，对９株从病猪体内分离的猪链球菌２型菌株进行检测了８个呈阳性；对１５份正常屠宰猪扁桃体分离物的检测结果是１份为阳性。结果表明此法特异性敏感性均很高，可作为ＭＲＰ快速诊和流行病学调查的手段。 相似文献
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为了解2017年冬季上海临床接诊犬的流感病毒感染情况和病毒变异趋势,收集上海某动物医院疑似犬流感样品进行RT-PCR检测,构建HA、NA的重组载体并测序,对获得的序列进行进化分析、氨基酸变异分析,综合我国同亚型犬流感病毒HA序列进行进化率分析。结果显示:23份疑似样品中检出5份阳性样品,获得5个H3亚型的HA序列、2个N2亚型的NA序列,上述序列在进化树中已经形成独立的进化分支,与韩国、广东毒株亲缘关系最近;氨基酸比对表明,HA和NA在重要位点发生许多一致的突变,如抗原位点区域、糖基化位点等,NA茎部未见氨基酸插入;对2007年至2017年中国南方地区分离的H3N2犬流感病毒HA片段进行进化率、变异率分析显示,年平均进化率呈逐年增高趋势,变异不断积累。研究表明,开展犬流感病毒变异监测,掌握病毒变异和进化方向,对防控该病、防止病毒向人群传播有重要意义。 相似文献
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四、反刍动物疾病的预测与防控1.口蹄疫口蹄疫是几年来新起的一种人畜共患传染病,由口蹄疫病毒引起,感染偶蹄类动物的急性、热性、接触性传染病,是世界上危害最严重的家畜传染病之一。近几年江 相似文献
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【目的】确定类猪圆环病毒P1 存在开放阅读框ORF2 和ORF3;【方法】采用Trizol 法,提取类猪圆环病毒 P1分子克隆转染PK-15细胞的总RNA,纯化之后,分别用P1 ORF2 和 ORF3 特异性引物进行RT-PCR,应用AxyPrepTM DNA 凝胶回收试剂盒回收PCR 产物,转化Trans5α 感受态细胞,挑取单菌落,经PCR检测为阳性后测序。同时,利用rapid-amplification of cDNA ends (RACE) 技术分别扩增P1 病毒 ORF2 和 ORF3 的5′-与3′-末端。另外,根据P1 ORF2 和ORF3 的序列预测其B细胞抗原表位,采用标准的逐步固相合成法合成表位肽,与载体蛋白KLH偶联后,免疫新西兰大白兔制备抗 P1 ORF2 和ORF3 的多克隆抗体。采用常规间接ELISA法检测分离血清效价,包被抗原用合成肽,450 nm 波长下测定,血清抗体效价为S/N ≥2.1的血清最高稀释度。 然后,用P1 双拷贝分子克隆转染PK-15细胞,通过免疫组化方法对该多抗与P1 的反应性进行检测,同时利用实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中P1 的拷贝数。【结果】利用ORF2和ORF3特异性引物对P1 RNA 进行的RT-PCR,均能扩增出目的片段,回收测序大小分别为111 bp和128 bp,分别与P1 ORF2 和ORF3 进行同源性比较,序列同源性均为100%;RACE技术分析,得到P1 ORF2 的5′-和3′-RACE 末端分别为第11位（G) 和第168位（T),P1 ORF3 的5′-和3′-RACE 末端分别为第285位（T) 和第 579位（A）。根据预测结果,合成肽的氨基酸序列分别为ORF2：CLSRLPQSERPPGRW和ORF3：CVYPKVRERRVLKMP;用ORF2 和ORF3 表位肽与载体蛋白KLH 的偶联物免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体效价均达到1﹕512 000以上,并且能够与P1 病毒发生特异性显色反应,应用蓝色DAB显色试剂盒染色结果为紫蓝色,多数在细胞浆,少数在细胞核,而对照组细胞无显色反应。定量PCR检测结果显示,P1可以在转染P1双拷贝分子克隆的PK-15细胞中复制,并且转染后104 h 增殖量达最大。【结论】通过转录分析和免疫组化试验分别从转录和蛋白质水平上证实了类猪圆环病毒P1 存在ORF2 和ORF3。 相似文献
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奶牛隐性乳房炎检测方法的研究进展 总被引：2，自引：0，他引：2
国家乳房炎委员会根据乳房和乳汁有无肉眼可见变化,将奶牛乳房炎分为临床型和隐性型(亚临床型)两种类型.临床型乳房炎有明显的临床症状,易于被发现;而隐性型由于没有明显症状,不易被检出. 相似文献
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一、病原 能引起猪链球菌病的病原复杂,主要有马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp equi)、猪链球菌(Streptococcus suis)、马链球菌类马亚种(Streptococcus equisubsp equi similis)以及兰氏分群中D、E、L群的链球菌等.尽管在临床上也常常能分离到其它的链球菌,但我国流行的主要病原为马链球菌兽疫亚种和猪链球菌2型. 相似文献