猪链球菌2型SS2—1和SS2—H的培养稳定性检测     

倪艳秀  何孔旺等 《中国兽医科技》2002,32(4):29-30

将猪链球菌2型制苗候选菌株SS2－1和SS2－H在血平板上连续传代至第41代，并分别检测第1代，第11代，第21代，第31代和第41代菌株的菌落及细菌形态，生化特性，溶菌酶释放蛋白（MRP)几胞外因子（EF0等指标。结果，从第1代至第41代，2株细菌的菌落及细菌形态，生化特性，MRP和EF均没有发生变异，这表明SS2－1和SS2－H菌株培养稳定性较好，使用限定代次至少可达41代，可作为理想的疫苗生产菌株。  相似文献   

猪链球菌2型的PCR快速检测   总被引：37，自引：4，他引：33  

倪艳秀  何孔旺  王继春  何家惠  还红华  吕立新  陆承平  姚火春 《中国兽医学报》2002,22(5):474-476

根据猪链球菌 2型的荚膜多糖抗原基因 cps2 J,合成 1对可扩增长度为 6 75 bp目的片段的引物 ,建立了检测猪链球菌 2型的 PCR法。应用 PCR对 9株经玻片凝集试验检测为猪链球菌 2型的菌株进行了检测 ,均呈阳性 ;而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪葡萄球菌、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等检测结果均呈阴性 ,表明了本方法的特异性。用此法对 88份正常猪的扁桃体样品的细菌分离物进行了检测 ,36份呈阳性 ,同时用玻片凝集试验进行对照检测 ,也全部呈阳性。而此法不需进行细菌的纯分离培养 ,即可用于猪链球菌 2型的快速诊断以及流行病学调查。  相似文献   

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素IV基因体外表达与初步应用     

彭小华  何孔旺  陆承平何孔旺 《农业生物技术学报》2005,13(5)

  相似文献   

IBDV不同分离株VP2高变区的基因序列分析     

白文霞  鲍恩东  侯继波  何孔旺 《四川畜牧兽医》2004,31(12):26-27

对9个IBDV(传染性法氏囊病毒)分离株的、VP2高变区进行RT-PCR扩增、测序，得到约560bp长的片段分析比较9个IBDV分离株与参考毒株的VP2高变区（Aeel-Spell)的氨基酸序列，并构建进化树、结果表明，9个IBDV分离株是超强毒株，并且得出亚洲目前流行的、rvIBDVs与欧洲国家的vvIBDVs的进化关系很近。  相似文献   

规模猪场疫病风险评估技术应用模式构建     

谭业平  刘强  胡肄农  郁达威  何孔旺  陆昌华 《农业科学与技术》2016,(9):2124-2126

从疫病风险因素识别、风险评估模型构建以及风险评估系统开发等方面,阐述了基于Web的规模猪场疫病风险评估技术应用模式.被评估猪场通过在线回答评估问卷上传疫病风险数据信息获得即时评估报告.该模式可增进猪场兽医、管理者与兽医专家之间的风险交流,帮助猪场系统认识和查找疫病风险因素,评估和报告猪场在工程防疫、生物安全、免疫监测三大体系中潜在高风险项,促进疫病防控措施改进和完善.  相似文献   

SYBR Green I实时定量PCR方法检测2型猪圆环病毒     

潘群兴  何孔旺  黄克和 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2007,28(3):13-17

利用PCR技术扩增出2型猪圆环病毒(PCV)ORF2保守区基因107 bp片段,并克隆到pMD-19-T载体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行荧光定量PCR,并绘制标准曲线。再以提取的PCV-2、PCV-1、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR检测。结果表明:建立的实时定量PCR方法,起始模板浓度与样本阈值循环数(Ct)值之间呈很好的线性关系,标准曲线斜率为-0.32,相关系数r2为0.997,Ct值为11.9~26.9。PCV-2能扩出S型荧光曲线,熔解曲线的峰狭窄单一,而PCV-1、PPV和PRV均不能扩出。对32份健康猪和32份断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)可疑猪样品定量检测:健康猪阳性率为44%(14/32),病毒载量均小于104拷贝.μL-1;PMWS可疑猪阳性率96.8%(31/32),病毒载量均大于105拷贝.μL-1。实时荧光定量PCR方法可用于2型猪圆环病毒定性及定量的检测。  相似文献   

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅳ部分基因片段的体外表达与初步应用     

彭小华  何孔旺  陆承平 《农业生物技术学报》2005,13(5):608-611

参照GenBank中的猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropeumoniae，App）血清1和3型菌株序列设计了1对特异性引物，用PCR方法扩增毒素Ⅳ（ApxⅣ）基因3’端1096bp的目的片段，然后克隆到pMD 18-T载体中，转入大肠杆菌（Eschetichia coli）的宿主菌DH5a中，提取阳性克隆质粒进行双酶切和测序鉴定，将T-载体中切下目的片段定向克隆到pET32a（＋）中，转入E．coli BL2I（DE3），经IPTG诱导可表达分子量约60kD的蛋白，免疫转印鉴定呈阳性，ApxⅣ基因体外成功表达。以纯化的表达产物包被ELISA板，初步检测了一些血清样品，结果预示表达的蛋白可用于区分灭活疫苗免疫和野毒感染。  相似文献   

类猪圆环病毒 P1的感染及其分子特征     

温立斌  何孔旺  王凤芝  俞正玉  茅爱华  解建平 《华北农学报》2013,(5)

类猪圆环病毒P1是新发现的一种病原,能引起仔猪出现类似猪断奶后多系统衰竭综合征症状,是目前所知的具有最小基因组的病毒。为了解P1感染范围和基因组分子特征,采用PCR方法扩增P1全基因组,克隆测序后,应用生物信息学进行序列同源性比较及遗传进化分析。结果显示,P1已在我国猪场流行,分离株之间的核苷酸序列同源性为99．1％～100％,可分为2个亚分支;同时免疫组化结果也证实了P1在样品中的分布。  相似文献   

快速检测大肠杆菌O157的LAMP方法的建立与评价   总被引：1，自引：0，他引：1  

张雪寒  何孔旺  叶青  倪艳秀  温立斌  李彬  王小敏  周俊明  郭容利 《中国兽医学报》2013,33(7)

利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以rfbE基因为靶序列,设计LAMP引物,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性试验.结果显示,整个检测过程仅需1h即可通过肉眼直接目测试验结果.在灵敏度试验中,rfbE-LAMP对O157菌液和模拟阳性样品的最低检测限分别为1CFU/mL和1 CFU/g.在特异性试验中,以其他血清型大肠杆菌以及沙门杆菌基因组DNA为模板对rfbE基因进行检测,均没有发生非特异性扩增反应.试验建立的LAMP检测方法具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求.  相似文献   

从山羊持续性腹泻病例中分离到边界病病毒(BDV)     

李文良  毛立  张纹纹  张则斌  赵永前  何孔旺  江杰元 《江苏农业学报》2013,(1):222-224

边界病(Border disease)是由边界病病毒(Border disease virus,BDV)引起的以新生羔羊发生震颤和被毛异常为特征的一种疾病,最早发现于英格兰与威尔士边界地区,故名。该病在临床上以繁殖障碍和羔羊畸形为特征,如不孕、流产、死产、产出弱小胎儿、羔羊先天震颤、骨骼异常和多毛[1]。与  相似文献