应用琼脂扩散试验检测盱眙水牛病抗体的探讨     

林继煌  江杰元  何孔旺  沈江萍  黄宝顺  许金停 《中国预防兽医学报》1991,(2)

以盱眙水牛病自然发病牛或人工感染传代病牛后期血清与病牛肝、淋巴结组织匀浆提取物进行琼脂扩散试验.结果.以病牛肝、淋巴结、脾混合提取物为抗原对该病后期血清可产生沉淀反应(10/13).取其中2头阳性病牛血清作为特异性抗体,对7头病水牛肝、脾、淋巴结混合悬液起反应;对另1头病水牛肝、淋巴结组织分别起反应;对该牛的脾组织不发生反应.  相似文献   

快速ELISA技术检测轮状病毒抗原试验报告     

何孔旺  李保同 《江苏农业科学》1989,(5):35-36

轮状病毒(RV)是引起婴幼儿和多种幼龄动物腹泻的主要病原之一。RV病的诊断主要依赖于粪便中病毒粒子或抗原成分的检出。通常的方法有电镜或免疫电镜、ELISA及核酸SDS-PAGE等,这些方法有的比较繁琐,需要昂贵的设备,有的需要较长的时间,不能适应临床快速诊断的要求。为此,我们建立了一种快速双抗体夹心ELISA技术,能在40分钟内检出粪便中的轮状病毒,获得较为满意的结果。 材料与方法  相似文献   

鸡传染性法氏囊病分子流行病学研究     

白文霞鲍恩东  侯继波何孔旺 《动物科学与动物医学》2004,21(8):51-53

15个江苏省IBDV分离株，对其VP2高变区进行RT-PCR扩增、测序，得到约560bp长的片段。分析比较15个IBDV分离株与参考毒株的VP2高变区(AccI-SpeI)推断的氨基酸序列，构建进化树。氨基酸序列分析以及进化树分析表明，15个IBDV分离株是超强毒株。而且目前vvIBDVs在亚洲各个国家流行，且与欧洲国家的vvIBDVs的进化关系很近。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒变异株N基因的克隆及原核表达     

孙冰  李彬  何孔旺  郭容利  倪艳秀  俞正玉  姜平 《畜牧与兽医》2014,(5):72-76

猪流行性腹泻病(Porcine epidemic diarrhea,PED)是我国猪群近两年的多发疾病。本试验于2012年在安徽分离到一株猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)AH2012。为研究该变异株N基因的特性,采用RT-PCR方法获得了其N基因片段,经测序后与其他代表性的PEDV基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,发现该毒株与近年来在我国流行的几株PEDV变异株同源性在99.3⁹9.5%之间,进化分析显示该毒株属于目前流行的PEDV变异株。将其克隆到表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET28a-N,经测序鉴定正确后,转化至感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为65 ku的融合蛋白,蛋白表达量较高,蛋白免疫印迹结果显示,表达的N蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性的免疫反应,表明原核表达的N蛋白具有良好的反应原性。该研究可为猪流行性腹泻病的流行病学调查、诊断与防控方法的建立奠定基础。  相似文献   

出血性大肠杆菌O157∶H7的Tir与Hly融合基因的构建和表达     

张雪寒  何孔旺  卢维彩  李丽  茅爱华  周萍 《中国兽医学报》2010,30(5)

构建表达Tir和Hly的融合基因,将Tir基因的C端414个氨基酸残基(Tir414)基因部分与Hly基因的C端300个氨基酸残基(Hly300)基因部分串联构建pET28a-Tir414-Hly300重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达.薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右.由于该融合蛋白由Tir和Hly2部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和溶血素(Hly)的抗体,在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值.  相似文献   

中国猪群存在Torque teno Virus(TTV)感染   总被引：1，自引：0，他引：1  

温立斌  何孔旺  杨汉春  郭容利  李成仁  钟书霖  茅爱华  倪艳秀  张雪寒  周俊明  吕立新  俞正玉  李彬  王小敏 《江苏农业学报》2010,26(1)

为了探讨中国猪群TTV的感染现状以及是否存在新的基因亚型,基于TTV1和TTV2相对保守的5′非翻译区(5′UTR)设计引物,采用PCR法对2008~2009年采集于中国江苏省的138份猪血清进行了检测。结果表明,中国猪群TTV1的感染率为15.9%,TTV2的为34.8%,共感染率为5.8%。所扩增片断的核苷酸序列分析结果表明,中国TTV1和TTV2流行毒株之间的核苷酸同源性分别为87.3%~93.8%和74.8%~99.1%,与GenBank其他TTV1和TTV2毒株的同源性分别为69.6%~100.0%和74.8%~99.1%。系统进化分析结果表明,中国TTV1和TTV2流行毒株存在新的基因亚型。  相似文献   

藏猪产色葡萄球菌分离鉴定及生物学特性研究     

赵霞玲  肖琦  钱雯娴  温东旭  严明帅  吕立新  牛家强  何孔旺 《中国畜牧兽医》2020,47(9):3014-3021

为了解西藏林芝市健康藏猪的葡萄球菌感染情况，对从西藏林芝市工布江达县巴河镇屠宰场、林芝市巴宜区西藏农牧学院教学实习牧场、林芝市巴宜区屠宰场采集的232份样品进行了细菌分离培养与鉴定，并对1株分离菌株进行了较为系统的生物学特性研究。流行病学调查结果显示，在232份样品中，共检出73份葡萄球菌阳性，阳性率为31.47%，其中在西藏林芝工布江达县巴河镇屠宰场检出16份阳性，检出率为23.89%（16/67）；林芝市巴宜区西藏农牧学院牧场检出43份阳性，检出率为34.40%（43/125）；林芝市巴宜区屠宰场检出14份阳性，检出率为35.00%（14/40）；分离菌经PCR鉴定、基因测序、生化鉴定，证明分离到5株产色葡萄球菌，对其中一株（Sa LZ1）进行了系统的研究。Sa LZ1菌株在琼脂培养基上形成圆形凸起、边缘整齐、表面光滑、不透明的瓷白色菌落，革兰氏染色为阳性球菌；PCR测序结果显示，分离株与产色葡萄球菌（GenBank登录号：MG576253.1）同源性最高；生化鉴定结果显示，其对血清菊糖、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖等表现为阳性，对阿拉伯糖、马尿酸钠、棉子糖、木糖、尿素等表现为阴性，符合产色葡萄球菌的生化特性；Sa LZ1在接种后5~10 h处于对数生长期；小鼠致病性试验显示，当Sa LZ1菌株攻毒浓度达3.5×10⁹ CFU/mL时小鼠死亡率达100%，且病理切片结果表明，Sa LZ1菌株能引起小鼠内脏组织发生病变。以上结果为西藏林芝市藏猪葡萄球菌的防控提供理论依据。  相似文献   

新西兰白兔γ-干扰素在昆虫细胞中的表达及其活性测定   总被引：2，自引：0，他引：2  

王芳  胡波  任雪枫  范志宇  张则斌  徐为中  何孔旺 《华北农学报》2010,25(3)

用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰素基因转入转移载体pFastBacTM1,得到重组转移载体pFastBacTM1-IFN-γ,用pFastBacTM1-IFN-γ转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经筛选得到重组穿梭载体Bacmid-IFN-γ,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-IFN-γ,经RT-PCR鉴定,结果显示重组IFN-γ在Sf9昆虫细胞中得到表达。用兔IFN-γELISA试剂盒测得重组兔IFN-γ的浓度为1 950 pg/mL。细胞病变抑制法结果显示,重组兔IFN-γ在MDCK上显示了较高的抗病毒活性,并测得重组兔IFN-γ的活性约为5.12×105 U/mg。  相似文献   

兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及其临床应用   总被引：2，自引：1，他引：1  

胡波  魏后军  王芳  范志宇  徐鹏  徐为中  薛家宾  何孔旺 《畜牧兽医学报》2010,41(11)

本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒(RHDV)的RT-PCR方法,研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列,设计了1对特异性引物,经cDNA的合成和PCR扩增,目的片段大小为591bp。结果表明该方法能检出最小RNA浓度为2.40ng·μL-1,敏感性为血凝试验(HA)的8×103倍。通过对自5个省采集的168份健康免疫兔鼻拭子样品进行检测,结果显示,阳性样品为22份,阳性率为13.09%。试验表明:RT-PCR方法能快速、敏感地从健康免疫兔鼻拭子样品中检出RHDV,提示健康免疫兔群存在携带RHDV的现象,该方法适合临床进行大规模病原学检测和兔群携带病毒的调查,具有良好的应用前景。  相似文献   

巴氏杆菌弱毒苗和鸡新城疫弱毒苗饮水免疫蛋鸡后分泌型免疫球蛋白A细胞的分布   总被引：4，自引：0，他引：4  

杨倩  毛卫华  黄国庆  郭容利 《中国预防兽医学报》1998,(6)

用巴氏杆菌弱菌苗和鸡新城疫弱毒苗通过饮水分别免疫１２月龄的蛋鸡，以葡萄球菌Ａ蛋白—辣根过氧化酶（ＳＰＡＨＲＰ）和兔抗鸡分泌型免疫球蛋白Ａ（ＳＩｇＡ）间接组化染色，显示消化道相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）、呼吸道相关淋巴组织（ＲＡＬＴ）及脾中ＳＩｇＡ细胞的产生和分布。结果显示：巴氏杆菌弱毒菌苗免疫组的蛋鸡在十二指肠和盲肠扁桃体中ＳＩｇＡ阳性细胞于首免后３５天出现较多，并一直持续增加到首免后５６天。鸡新城疫弱毒苗免疫组的蛋鸡的ＳＩｇＡ阳性细胞于首免后２８天数量明显增多，首免后３５天达最高峰。呼吸道和脾中同时也出现较多的ＳＩｇＡ阳性细胞。  相似文献