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近年来,用灭活疫苗免疫接种已成为我国控制禽流感的一种主要策略,但免疫禽类不能与自然野毒感染的禽类从血清学水平上进行鉴别,并常导致贸易障碍.为了克服禽流感灭活苗的这种局限性,提出对疫苗免疫和野毒感染禽类鉴别诊断.一是免疫群内安插未免疫过的"哨兵禽",二是采用亚单位疫苗免疫定向检测血凝素蛋白,三是接种疫苗的血凝素与野毒同源而神经氨酸酶为异源,四是检测非结构蛋白(NS1)的血清学反应.文章对上述四种鉴别诊断策略的优缺点进行了评价,为禽流感的控制策略提供一些新的思路. 相似文献
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检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立 总被引:9,自引:3,他引:9
以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)为抗原,建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术(NP—ELISA)。对263份待检血清(包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清)进行检测,NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验(AGP)的总符合率为83.3%,与血凝抑制试验(HI)的总符合率为92%。特异性试验表明,NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体,检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实,NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品,并于感染后10d确定100%血清阳性,而AGP检测直到首免后21~28d才出现部分血清阳性,HI检测直到10~14d才出现部分血清阳性,并且NP-ELISA要比HI敏感4~40倍。试验证明,NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。 相似文献
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直接竞争ELISA法快速检测动物源性食品中磺胺嘧啶残留 总被引:3,自引:0,他引:3
采用重氮化-偶联法将磺胺嘧啶(SD)与人血清白蛋白(HSA)相连制备了免疫抗原SD—HSA,与卵清白蛋白(OVA)相连制备了包被抗原SD—OVA,用过碘酸钠法将SD—OVA与辣根过氧化物酶(HRP)连接制备了酶标抗原(SD—OVA—HRP)。用SD—HSA免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选和克隆化制备了单克隆抗体,利用单抗建立了直接竞争ELISA方法。该方法具有好的特异性,在1—729ng/mL浓度范围标准曲线方程Y=12.05x+2.2538,R^2=0.995,IC50为41.7ng/mL,在猪肉、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、牛奶中的检测限分别为20、20、20、5、5μg/kg。在20μg/kg和100μg/kg水平猪肉、鸡肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋样品中添加,回收率为82.78%-104.6%。与高效液相色谱方法比较,二者的阳性符合率为81.3%,阴性符合率为83.3%,总符合率为88.9%;与同类英国RANDOX试剂盒比较,二者符合率为100%。 相似文献
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从持续感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎肾细胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp。将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43 000,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白gp51作为抗原,建立检测BLV抗体的间接ELISA诊断方法。结果表明,抗原gp51的最佳包被浓度为2.19μg.mL^-1,血清的最佳稀释倍数为1∶80,阳性判定标准确定为样品OD450 nm大于0.451。用该方法对12份参考血清进行检测,准确率为91.67%。 相似文献
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采用逆转录病毒介导的方法,将PrV Ea株gD基因整合进PK-15细胞染色体中,建立起表达gD蛋白的细胞系PK^D。通过荧光观察,发现PK^D表达的gD分布在细胞膜上,具备原有的免疫反应性;同时,还发现gD蛋白在PK^D细胞膜上呈明显极性分布。PCR技术和间接免疫荧光染色法对PK^D进行检测的结果表明该细胞系具有良好的遗传稳定性。在相同培养条件下,PK^D细胞的生长速度及形态与正常PK-15细胞无明显差异。用脂质体介导的方法,将PrV Ea株基因组转染PK^D细胞,在转染后30h细胞发生典型病变,表明PK^D细胞对脂质体的毒害具有耐受性。TCID50测定结果显示:PK^D对PrV Ea株增殖尽管有明显的抑制作用,但PrV Ea株仍能在其上正常增殖。上述研究结果提示:所构建的细胞系PK^D可用于构建PrV Ea株gD基因缺失毒株,为PrV Ea株gD基因缺失毒株的构建提供了必备的工具。 相似文献
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抗氯霉素单克隆抗体的制备及鉴定 总被引:16,自引:3,他引:13
用人工合成的氯霉素-人血清白蛋白(CAP-HSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株分泌抗CAP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞1F9.经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目84~96条,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1256,诱生小鼠腹水的抗体效价可达16×105.该细胞连续培养生物学性状稳定,竞争间接酶联免疫吸附试验(ciELISA)显示,其与供试抗生素交叉反应小,表明该单抗具有较大的应用价值. 相似文献