猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗（LA-A株）的最小免疫剂量和制品保存期的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

乔永峰  郭容利  宋增财  刘娅梅  许梦微  郑亚婷  陈赛赛  王志胜  张传健  侯继波  范红结  王继春 《中国动物传染病学报》2020,(1):56-62

本研究将伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株(PRV AH02LA株)的gE基因缺失株(LA-A株)接种BHK-21细胞,经纯悬浮培养制备抗原,甲醛灭活后制备油乳剂灭活疫苗,并确定该灭活疫苗的最小免疫剂量和效力检验方法,以及在2~8℃保存期。结果显示:猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗(LA-A株)的效力检验方法为以2.0 mL(抗原含量108.20TCID50)接种4~5周龄PRV阴性健康仔猪,颈部肌肉注射,间隔28 d以相同剂量和方法加强免疫,加强免疫后第21 d,免疫猪血清PRV抗体中和指数应不低于10000,攻毒保护率应不低于80%;最小免疫剂量为1.0 mL(抗原含量107.90 TCID50);制品保存期:在2~8℃保存期为18个月。该研究结果为新型疫苗的研制提供了重要的试验依据。  相似文献   

IBDV不同分离株VP2高变区的基因序列分析     

白文霞  鲍恩东  侯继波  何孔旺 《四川畜牧兽医》2004,31(12):26-27

对9个IBDV(传染性法氏囊病毒)分离株的、VP2高变区进行RT-PCR扩增、测序，得到约560bp长的片段分析比较9个IBDV分离株与参考毒株的VP2高变区（Aeel-Spell)的氨基酸序列，并构建进化树、结果表明，9个IBDV分离株是超强毒株，并且得出亚洲目前流行的、rvIBDVs与欧洲国家的vvIBDVs的进化关系很近。  相似文献   

猪CD40L基因的原核表达及特异性多克隆抗体制备   总被引：1，自引：1，他引：0  

薛刚  祝长青  郑其升  张雪花  李倬  侯继波 《南京农业大学学报》2011,34(3)

从猪外周血淋巴细胞中克隆猪CD40L基因,构建表达载体pET-CD40L,转化大肠杆菌BL21(DE),表达获得相对分子质量约为48x103的重组融合蛋白.以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗猪CD40L的特异性抗体.间接ELISA检测到多克隆抗体效价达到1:12 800,Western-blot检测结果表明,得到的抗体既可与纯化的CD40L蛋白特异性结合,又可与表达猪CD40L的重组杆状病毒特异性结合.  相似文献   

GEM技术浓缩纯化O型口蹄疫病毒灭活抗原方法的建立     

汪浩  乔绪稳  陈瑾  李图帅  张元鹏  侯继波  郑其升  孙卫东 《南京农业大学学报》2018,(1)

[目的]验证利用革兰氏阳性增强基质颗粒(GEM)浓缩纯化口蹄疫病毒(FMDV)抗原的可行性。[方法]将含有3个自溶素基序的锚钩蛋白基因(PA)与针对O型口蹄疫病毒特异性纳米抗体基因(VHH)串联克隆入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-VPA,将其转化大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),表达获得融合重组蛋白VPA。先将GEM颗粒与重组蛋白VPA在37℃孵育30 min,离心,取沉淀用适量的FMDV抗原液重悬,再经一步低速离心,获得沉淀即为浓缩纯化的口蹄疫病毒抗原。利用SDS-PAGE、Western-blot、蛋白含量测定及146S测定等方法对浓缩纯化方法的可行性进行鉴定,并通过动物免疫试验初步验证浓缩纯化后抗原的免疫原性。[结果]VPA融合蛋白能够在大肠杆菌中部分可溶性表达。作为接头蛋白,VPA既能与GEM颗粒结合,又能与FMDV抗原结合。SDS-PAGE与Western-blot结果表明:FMDV通过GEM法得到有效纯化;146S测定结果表明FMDV的回收效率达到99%;总蛋白含量测定结果显示口蹄疫抗原杂蛋白去除率达到90%;动物免疫试验结果显示GEM技术纯化后的FMDV具有良好的免疫原性。[结论]利用GEM技术浓缩纯化口蹄疫病毒抗原是可行的。  相似文献   

不同稀酸制备革兰氏阳性增强基质(GEM)颗粒的比较     

李鹏成  张晓燕  乔绪稳  郑其升  侯继波 《江苏农业学报》2018,(3)

本研究旨在比较不同稀酸制备革兰氏阳性增强基质(GEM)颗粒的效果。首先将3种不同的稀酸[硫酸(H2SO4)、盐酸(HCl)、三氯乙酸(TCA)]煮沸,制备GEM颗粒,分别比较得率(细菌计数)、蛋白去除率(SDSPAGE和SDS解离蛋白定量分析)以及GEM颗粒与锚钩蛋白(PA)的亲和活性等,最后进行4℃以及冷冻干燥后4℃下GEM的保存期研究。结果显示,0.025 mol/L的H2SO4制备GEM颗粒得率为89.8%,蛋白去除效果和锚定活性均较好。0.050 mol/L HCl与0.100 mol/L HCl制备的GEM颗粒蛋白质去除效率无显著差异,0.050 mol/L HCl制备GEM的得率(99.7%)高于0.100 mol/L HCl(86.5%),但0.050 mol/L HCl制备的GEM颗粒与PA的锚定活性不及0.100 mol/L HCl制备的GEM颗粒。不同浓度TCA制备的GEM颗粒得率、锚定活性均较好,但蛋白质去除效果较差。GEM颗粒4℃保存18个月,其活性不受影响,且冷冻干燥对GEM颗粒活性无影响。0.025 mol/L的H2SO4和0.100 mol/L的HCl可制备高质量的GEM。  相似文献   

禽流感病毒M2e特异性多肽ELISA检测方法的建立     

郑其升  徐公豹  邓碧华  何家惠  侯继波 《畜牧与兽医》2010,42(3)

本研究人工合成禽流感病毒H5N1亚型M2蛋白的膜外区(M2e),并偶联至半抗原载体血蓝蛋白(KLH),免疫SPF鸡,共免疫3次,每次间隔两周。所获得的阴阳性血清用于ELISA方法的建立,通过方阵滴定确定了人工合成的23肽包被96孔ELISA板的最佳浓度为5μg/mL;1%BSA为封闭液,37℃封闭3 h;被检测血清的最佳稀释度为1∶400,一抗反应时间为37℃,45 min;二抗反应时间为37℃30 min;选用TMB为底物,显色15 min,用2 mol/L H2SO4为终止液为检测血清中抗M2e抗体滴度奠定基础。根据建立的ELISA方法,检测3次免疫2周后的SPF鸡血清中抗M2e抗体,血清开始1∶100倍稀释之后做倍比稀释,测得平均滴度分别为1∶13 500和1∶20 500。  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白5'端基因重组腺病毒的构建及其免疫特性   总被引：2，自引：0，他引：2  

唐芳  何孔旺  侯继波  姜平 《农业生物技术学报》2009,17(1):1-6

RT-PCR扩增出猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus, TGEV）S蛋白基因5'端包含 B、C抗原位点的1.0 kb DNA片段,并与穿梭载体pShuttle-CMV连接;然后与腺病毒（Adenovirus）骨架载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌（Escherichia coli）BJ5183,通过同源重组获得重组腺病毒质粒。该重组腺病毒质粒转染HEK293细胞并进行噬斑纯化,获得了1株含有TGEV S蛋白5'端基因的重组人复制缺陷型血清5型腺病毒rAd-TGEV-S。随后用RT-PCR和间接免疫荧光（indirect immunofluorescent assay, IFA）检测目的基因的转录与表达。重组腺病毒rAd-TGEV-S在HEK293细胞连续传代9次后,病毒效价稳定,滴度平均为107. 7TCID50/mL。动物免疫试验显示, rAd-TGEV-S可以诱导小鼠产生TGEV特异性IgG和IgA。  相似文献   

鸡传染性法氏囊病分子流行病学研究     

白文霞  鲍恩东  侯继波  何孔旺 《猪业科学》2004,21(8):51-53

15个江苏省IBDV分离株,对其VP2高变区进行RT-PCR扩增、测序,得到约560bp长的片段。分析比较15个IBDV分离株与参考毒株的VP2高变区(AccI-SpeI)推断的氨基酸序列,构建进化树。氨基酸序列分析以及进化树分析表明,15个IBDV分离株是超强毒株。而且目前vvIBDVs在亚洲各个国家流行,且与欧洲国家的vvIBDVs的进化关系很近。  相似文献   

猪口蹄疫免疫程序的研究   总被引：6，自引：2，他引：4  

何家惠  侯继波  徐筠遐  王继春  刘冬霞  诸长贵  王伟峰  刘跃兴  杨瑛 《畜牧与兽医》1999,31(2):27-28

口蹄疫系一种人畜共患的烈性传染病,传播迅速,发病率高,导致幼畜死亡,更重要的是使生产性能下降,对世界养殖业造成了巨大的损失。自台湾省暴发猪口蹄疫、给岛内养猪业带来毁灭性灾难以来,国家要求沿海地区强制性进行疫苗接种。在免疫预防中,疫苗质量和相应的免疫程...  相似文献   

鸡新城疫活疫苗室温保存工艺的初步研究     

吕芳  卢宇  王佳佳  郝政林  赵艳红  邓碧华  张金秋  侯继波 《中国农业科技导报》2016,18(4):168-173

选用海藻糖、明胶、PVP等成分配制耐热保护剂,采用梯度真空干燥方法,将鸡新城疫病毒(La Sota株)进行泡沫干燥,通过37℃10 d耐老化试验筛选到配方T5的病毒滴度损失为0.2 Lg;NDV-T5泡沫干燥疫苗经DSC测定配方玻璃化转变温度Tg为56.45℃,扫描电镜观察可见较为规则的片状结构;NDV-T5在各温度耐热性能均较好,2℃~8℃保存24个月,25℃保存15个月、37℃保存5个月,病毒含量下降≤1.0 Lg;将不同保存温度的NDV-T5泡沫干燥疫苗免疫1月龄雏鸡,鸡只均能在免疫后14 d产生抗体,与现有商品疫苗效力相当。  相似文献