日本乙型脑炎病毒对干扰素诱导基因ISG15表达的影响     

杨晶  华涛  唐波  唐应华  侯继波  张道华  黄克和 《吉林农业大学学报》2017,39(2)

为研究机体干扰素诱导基因对日本乙型脑炎(JEV)感染的作用,通过IFN-α和JEV刺激猪睾丸(ST)细胞,实时荧光定量PCR检测Mx1、Mx2、OAS1、OAS2、PKR和干扰素诱导基因-15(ISG15)表达情况,发现除PKR外,其他基因相对mRNA量都有不同程度上升,其中ISG15上升最为显著。ISG15在ST细胞中过表达,检测病毒基因组和滴度,结果表明:ISG15可显著抑制JEV增殖;shRNA靶向干扰ISG15,JEV病毒量上升,说明ISG15在体外对JEV的增殖有抑制作用。将JEV的C、M、E、NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B基因克隆入pcDNA3.1真核表达载体,转染ST细胞后E和NS3基因引起ISG15相对mRNA量显著上升,说明JEV的E和NS3基因参与诱导ISG15的表达。  相似文献   

猪细小病毒灭活疫苗NJ株毒种分离及鉴定   总被引：2，自引：0，他引：2  

张道华  张雪花  唐波  许梦微  侯继波 《江苏农业学报》2012,(1):99-103

为防控猪细小病毒病,进行了猪细小病毒灭活疫苗毒种研究。将南京某猪场初产母猪流产胎儿的脾、肺等组织病料处理后接种ST细胞培养,获得了1株猪细小病毒强毒,将分离毒株适当稀释接种ST细胞,经3轮蚀斑纯化获得1株纯净的猪细小病毒NJ株(PPV-NJ株),作为疫苗毒株。将NJ株接种ST细胞培养连续传15代,每代次病毒效价均不低于1 ml 107.25TCID50、血凝素效价不低于29。选择第5代病毒液,灭活后与矿物油佐剂混合乳化制成灭活疫苗,以不同剂量分别免疫豚鼠和后备母猪,用血凝抑制试验(HI)和ELISA检测抗体效价。分别用剂量0.125 ml、0.250 ml和0.500 ml疫苗免疫豚鼠28 d后,各免疫组HI抗体效价均高于28,0.5 ml组HI抗体效价高达211,ELISA抗体均显示阳性(OD630≥0.32),分别用剂量0.5 ml、1.0 ml和2.0 ml疫苗免疫后备母猪后,HI检测结果显示,3个剂量组免疫后1周HI抗体效价高于26,3周后达峰值,至免疫后4个月略有下降,2.00 ml剂量组HI效价最高(211.75)。ELISA检测结果显示,各剂量组在免疫后1周均转阳(OD630≥0.32),免疫后4～18周均维持较高水平。HI抗体效价和ELISA抗体水平与免疫剂量均呈正相关性。结果显示,利用NJ株病毒制备的灭活疫苗具有抗体产生快、效价高等特点,显示出良好的疫苗开发前景。  相似文献   

在豚鼠体内筛选兔出血症病毒“通用型”T细胞表位   总被引：1，自引：0，他引：1  

金明兰  霍晓伟  南文龙  鲁会军  任静强  刘春霞  金宁一  侯继波 《中国兽医学报》2015,(2):213-217

为筛选兔出血症病毒T细胞表位,应用纯化的病毒与佐剂联合免疫6周龄豚鼠,三免后10 d采集血液和淋巴细胞,通过T淋巴细胞增殖试验(WST)、酶联免疫斑点(ELISPOT)、ELISA方法检测淋巴细胞增值、IFN-γ和IL-2变化,评价多肽的抗原性。结果显示,多肽P2、P7、P10、P16、P21和P22能刺激动物产生细胞免疫应答,淋巴细胞增殖、IFN-γ分泌和IL-2水平显著高于其他多肽和对照组。这表明,筛选的多肽P2、P7、P10、P16、P21和P22具有抗原特性,为多表位疫苗的构建和应用提供科学的依据。  相似文献   

基于GEM展示技术内含肽介导的犬α干扰素快速纯化系统的建立     

仝晴晴  杨利  乔绪稳  陈瑾  张元鹏  郑其升  牛家强  侯继波 《中国动物传染病学报》2019,(3):9-15

本研究分别构建含有断裂型内含肽(inteins)C端与犬α干扰素融合基因(C*-CaIFN-α)、断裂型内含肽N端与锚钩蛋白(protein anchor,PA)融合基因(NC1A-PA3)的重组表达质粒,利用IPTG诱导表达。通过GEM颗粒(gam-positive baterial enhancermatrixparticles)与PA3之间的特异性结合,将NC1A-PA3蛋白捕获到GEM颗粒上,再利用内含肽的N端与C端的结合,获得GEM-PA3-NC1A-C*-CaIFN-α。在DTT或EDTA存在情况下,内含肽C末端自我剪切,获得纯化的犬α干扰素重组蛋白CaIFN-α。通过微量细胞病变抑制方法测定CaIFN-α蛋白的活性。结果表明,两种重组蛋白均有可溶形式表达,GEM/inteins纯化系统效果良好;纯化的犬α干扰素CaIFN-α对水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的抗病毒活性为3.0×106U/mL。本研究建立的基于GEM展示平台的蛋白纯化系统,将非层析标签与断裂内含肽系统相结合,为快速有效地纯化重组蛋白提供了一种方法。  相似文献   

猪链球菌2型与马链球菌兽疫亚种生物学特性的初步比较     

王继春  何家惠  侯继波  徐筠遐  刘冬霞  褚长贵  王伟峰  刘跃兴  杨英 《中国预防兽医学报》2000,(Z1)

１９９８年从病死猪分离了数株链球菌（其中２株编号为９８０１，９８０２），经鉴定，９８０１株为猪链球菌２型，９８０２株为马链球菌兽疫亚种。９８０１株系从暴发流行地区的病猪中分离，同时在该流行地区还发生畜禽从业人员感染相同血清型的链球菌而死亡的病例；９８０２株系从散发病猪中分离。临床有共同点，又有各自特点。病理变化均呈现典型的败血症变化，但肝、脾、肺等病变上有一些差别，而染色镜检基本一致。对兔均敏感，对小鼠和猪的敏感性有所不同。９８０１株菌落灰色，中心浑浊，直径０．５ｍｍ，α溶血，有草绿色色素沉着；９８０２株菌落湿润，半透明，直径１．５－２ｍｍ，β溶血。９８０１株对氧哌嗪青霉素、头孢他啶、氨苄青霉素最敏感；９８０２株对氧哌嗪青霉素、复方磺胺、头孢哌酮、呋喃妥因最敏感。  相似文献   

不同基质对鸡新城疫病毒冻干保护作用的研究     

侯继波  于漾  肖琦  何家惠 《江苏农业科学》2004,(5):80-82

将1％可溶性明胶、5％海藻糖、0．25％硫脲、10％蛋白胨、0．5％抗坏血酸等基质与鸡新城疫(La SoTa株)病毒混合。进行病毒相容性试验和单一、混合基质冻干试验。结果表明。10％脱脂乳、1％可溶性明胶、5％海藻糖、5％蔗糖、0．25％硫脲对病毒的保护作用比较理想。为进一步研制耐热保护剂型禽类弱毒苗奠定了研究基础。  相似文献   

检测猪轮状病毒的一种新方法—夹心PPA—ELISA   总被引：1，自引：0，他引：1  

侯继波  何家惠 《江苏农业学报》1993,9(3):47-50

  相似文献   

禽流感的综合防控措施     

唐应华  何家惠  侯继波 《动物保健》2010,(4)

禽流感是由A型流感病毒引起的一种主要感染禽类(家禽和野禽)传染病。禽流感病毒包含多种不同亚型,对世界养禽业危害严重的是H5和H9亚型中的部分病毒,特别是其中的高致病性H5N1亚型禽流感尤为厉害,被世界动物卫生组织列为A  相似文献   

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白CD4+T细胞表位优势区的鉴定     

方剑玉  郑其升  郭小参  侯凤香  王琳  陶红梅  侯继波  陈溥言 《南京农业大学学报》2011,34(1)

采用RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)临床分离株的M基因(525 bp),通过设计4对引物,把M蛋白分成4段K1(78-112)、K2(98-131)、K3(118-153)、K4(139-174),分别扩增相应基因M1、K1、K2、K3和K4,连接pET-32a(+)表达载体,经鉴定后转化Escherichia coliBL21,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot检测结果显示,分别在相对分子质量30.8×103和24.4×103位置出现目的条带,重组蛋白均可与阳性血清发生特异反应。将蛋白M1免疫BALB/c小鼠,于第三次免2周后从小鼠脾脏分离淋巴细胞,分别用K1、K2、K3、K4蛋白进行体外刺激。流式细胞仪检测分泌IFN-γ细胞因子的T细胞的频率,K1蛋白刺激组显著高于其他组和对照组(P≤0.01)。结论:M1蛋白K1(78-112)段为T细胞表位优势区。  相似文献   

猪体内筛选RHDV VP60 T细胞表位的优势区     

金明兰  侯继波  郑其升  鲁会军  任静强  南文龙  韩松  金宁一 《中国兽医学报》2012,32(8):1089-1093

应用戊二醛醛化的人＂O＂型红细胞纯化兔出血症病毒（RHDV）,对非免猪进行3次免疫后,分离外周血淋巴细胞经不同段重组杆状病毒（共分5段表达）、纯化的病毒、Con A刺激后进行IFN-γ、IL-2、IL-4、WST检测。结果显示,纯化病毒的血凝效价为28,与未纯化的RHDV毒价相差1个滴度;WST检测结果为免疫组经3段重组杆状病毒刺激的值最高;IFN-γ和IL-2检测结果也是3段重组杆状病毒刺激的值最高;IL-4检测结果为3段重组杆状病毒刺激的值最低。由此表明病毒经纯化后效果好,3段重组杆状病毒区域为T细胞表位优势区,这为RHDV T细胞表位的进一步研究奠定基础。  相似文献