口蹄疫病毒解旋酶恒温扩增检测方法的建立     

金静维  马保华  邱索平  凌彬冰  李贺  胡晓冰  曹永长  薛春宜 《贵州畜牧兽医》2014,(5):1-5

  相似文献   

一种获得重组传染性法氏囊病病毒的新方法     

曹永长  毕英佐  刘丽 《中国兽医学报》2002,22(1):19-21

采用 RT- PCR技术 ,从传染性法氏囊病病毒 (IBDV)细胞适应株 GZ911中扩增了 A片段的 2个片段 GA5和 GA3,从中国分离的 IBDV超强毒株 L X中扩增了 B片段的 2个片段 L B5和 L B3。将 GA5和 GA3克隆到质粒p Bss K的 Eco R / Kpn 位点 ,将 L B5和 L B3克隆到 p Bss K的 Eco R / Xba 位点 ,获得携带 GZ911完整 A片段基因的质粒 GA- p Bss K和携带 L X完整 B片段基因的质粒 L B- p Bss K。然后将 GZ911的 A片段 c DNA和 L X的 B片段c DNA分别插入带有巨细胞病毒立即早期加强子 /启动子的质粒 p AL TER- MAX中 ,获得重组质粒 GA- p AL TER和L B- p AL TER。用 GA- p AL TER和 L B- p AL TER共转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,获得具有感染活性的重组 IBDV,命名为 r IBDV- GZ L X。该方法的建立为在体外对 IBDV的基因组进行遗传操作 ,进而彻底了解 IBDV基因的结构与功能的关系打下了基础。  相似文献   

益生菌作为基因工程受体菌的研究     

毕英佐  马现永  曹永长 《饲料广角》2002,(21):8-10

1.前言20世纪90年代后期,国内外学者开始应用基因工程技术有目的、有选择地研制新一代微生态制剂。换句话说,就是正常菌群作为外源基因表达受体,尤为双歧杆菌、乳酸杆菌、芽孢杆菌、酵母菌作为工程菌的受体,通过分子克隆、基因重组技术,将外源基因(某种  相似文献   

传染性囊病病毒CJ801VP2基因cDNA的序列分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

曹永长  梁志清 《华南农业大学学报》1997,18(A00):65-72

用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０，ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７．４％，９７．６％和９６．９％，与变异株，Ａ，Ｅ，ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６．５％，９６．３和９６．７％。  相似文献   

PCV2·ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化     

王宪文  谢青梅  曹永长  于康震  毕英佐 《安徽农业科学》2007,35(23):117-7118,7121

[目的]为了研究PCV2-ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化。[方法]用PCR方法扩增PCV2 ORF2基因3′端片段,PCR产物经酶切后与经同样处理过的pET32a质粒连接,构建重组质粒。重组质粒经PCR和酶切鉴定并测序后,转化BL21感受态细胞;重组菌液用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。[结果]ORF2基因在大肠杆菌中正确表达,表达的融合蛋白的分子量约为33 ku;在37℃、1 mmol/L浓度下,诱导时间为6 h时表达量最大,占细菌总蛋白的23.62%。表达产物主要以包涵体的形式存在,将包涵体溶解后过Ni-NTA柱纯化可得到较为纯净的目的蛋白。[结论]该研究为猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)和猪皮炎和肾病综合征(PDNS)等疾病的防治奠定了基础。  相似文献   

新城疫病毒HN基因克隆及其在大肠杆菌中的表达     

刘铀  毕英佐  曹永长 《西南大学学报》2004,26(6)

用RT-PCR方法扩增新城疫病毒HN基因并将其克隆至T载体,测定其核苷酸序列.尔后用PCR扩增球状头部编码区,并将其克隆至pSOC质粒soc基因3端EcoR Ⅰ位点,重组质粒pSOC-HN转化E.coli BL-21(DE 3)感受态细胞,以终浓度1 mmol/L的IPTG诱导表达,在SDS-PAGE凝胶上可检测到分子量约67 KD的融合蛋白特异条带,west-blot证实表达产物与NDV抗血清具有良好的反应性.  相似文献   

H1亚型猪流感病毒广东株HA基因的原核表达   总被引：6，自引：0，他引：6       下载免费PDF全文

周庆丰  马静云  曹永长  谢青梅  杜礼琴  毕英佐 《华南农业大学学报》2007,28(1):105-108

为了研制猪流感检测试剂和流感亚型特异性单抗筛选所需的重组抗原,本研究克隆和原核表达了H1N1亚型猪流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因.首先采用RT-PCR方法扩增了H1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的HA基因.测序结果表明,扩增的SIV HA基因cDNA长度为 1 701 个核苷酸,共编码566个氨基酸.BLAST分析表明,H1N1亚型SIV广东株HA基因核苷酸序列与GenBank中已发表的中国香港特别行政区、中国大陆、美国分离的经典H1亚型毒株相近,核苷酸序列同源性在89%以上.然后将HA基因的cDNA片段亚克隆至pET32a( )表达载体中,构建重组质粒pET32a-H1,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行诱导表达.SDS-PAGE和凝胶扫描分析表明,HA基因在大肠杆菌中获得了高效表达,重组融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的25.2%.经免疫印迹证实重组蛋白可以被SIV特异性抗体所识别.  相似文献   

传染性囊病病毒CJ801 VP2基因cDNA的序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

曹永长  毕英佐  梁志清  周蛟  林文量 《华南农业大学学报》1997,(Z1)

用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０、ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７４％、９７６％和９６９％，与变异株Ａ、Ｅ、ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６５％、９６３％和９６７％。而与Ⅱ型毒株的同源性只有８１％左右。从遗传进化树上看，ＣＪ８０１处于标准Ⅰ型毒株和变异株之间。根据ｃＤＮＡ序列推导出蛋白质序列，比较蛋白质序列发现，ＣＪ８０１与Ⅰ型ＩＢＤＶ毒株的同源性均在９６％以上，其中与５２／７０的同源性最高，为９８２％。ＣＪ８０１ＶＰ２高可变区的七肽区（Ｓ－Ｗ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｇ－Ｓ）未发生变化。以上结果说明ＣＪ８０１为ＩＢＤＶⅠ型强毒株。另外，ＣＪ８０１和所有ＩＢＤＶ强毒株在ＶＰ２的２５３、２７９和２８４位上的氨基酸均相同，分别为Ｑ、Ｄ和Ａ；而ＣＪ８０１的细胞适应株ＣＪ８０１ＢＫＦ和所有弱毒株一样，其相应位置的氨基酸分别为Ｈ、Ｎ和Ｔ。这３个氨基酸可能和ＩＢＤＶ的毒力有关。  相似文献   

HVT＋IBD二联疫苗对黄羽肉鸡传染性法氏囊病的免疫保护效果     

薛春宜  陈峰  罗鸿斌  刘君  瑞汉良  覃健萍  毕英佐  曹永长 《养禽与禽病防治》2011,(11):20-22

传染性法氏囊病超强毒株的存在导致传染性法氏囊病时有发生。为了预防超强毒株引起的传染性法氏囊病,在黄羽肉鸡中多使用中强毒力的传染性法氏囊病活疫苗,但这一类疫苗会影响雏鸡免疫系统的发育,导致免疫抑制现象。HVT＋IBD二联疫苗（威力克）是梅里亚公司生产的一种新型疫苗,是将传染性法氏囊病病毒的主要免疫保护抗原VP2基因插入火鸡疱疹病毒HVT中获得的载体疫苗,1日龄皮下注射免疫之后．可以同时预防鸡马立克氏病和传染性法氏囊病。本研究探讨了这种新型疫苗对黄羽肉鸡传染性法氏囊病的免疫保护效果,综合实验室免疫试验结果和田间免疫试验结果,威力克免疫对黄羽肉鸡法氏囊发育不会造成损伤;威力克免疫组在21d时IBD抗体水平高于法倍灵免疫组,特别是在21～28d时尤其如此。实验结果表明,威力克免疫能为黄羽肉鸡提供更好的免疫保护,获得更好的经济效益。  相似文献   

用酶联免疫吸附试验（ELISA）评价小鸡IBD免疫效果   总被引：4，自引：2，他引：2  

曹永长  毕英佐 《中国兽医杂志》1995,21(11):9-10

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）评价小鸡ＩＢＤ免疫效果曹永长，毕英佐，朱基美（华南农业大学动物科学系，广州５１０６４２）酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）用于生产场疫苗的免疫效果评价还是最近几年才发展起来的￣［１，２］。我们采用美国ＩＤＥＸＸ公司提供的Ｉ...  相似文献