全文获取类型
| 收费全文 | 38125篇 |
| 免费 | 1374篇 |
| 国内免费 | 3901篇 |
专业分类
| 林业 | 736篇 |
| 农学 | 4680篇 |
| 基础科学 | 75篇 |
| 1730篇 | |
| 综合类 | 16113篇 |
| 农作物 | 2872篇 |
| 水产渔业 | 1165篇 |
| 畜牧兽医 | 13401篇 |
| 园艺 | 1497篇 |
| 植物保护 | 1131篇 |
出版年
| 2024年 | 421篇 |
| 2023年 | 1374篇 |
| 2022年 | 1537篇 |
| 2021年 | 1557篇 |
| 2020年 | 1369篇 |
| 2019年 | 1664篇 |
| 2018年 | 847篇 |
| 2017年 | 1249篇 |
| 2016年 | 1502篇 |
| 2015年 | 1534篇 |
| 2014年 | 1726篇 |
| 2013年 | 1767篇 |
| 2012年 | 2618篇 |
| 2011年 | 2634篇 |
| 2010年 | 2537篇 |
| 2009年 | 2655篇 |
| 2008年 | 2628篇 |
| 2007年 | 2154篇 |
| 2006年 | 1779篇 |
| 2005年 | 1651篇 |
| 2004年 | 1377篇 |
| 2003年 | 1266篇 |
| 2002年 | 838篇 |
| 2001年 | 899篇 |
| 2000年 | 668篇 |
| 1999年 | 539篇 |
| 1998年 | 399篇 |
| 1997年 | 312篇 |
| 1996年 | 337篇 |
| 1995年 | 294篇 |
| 1994年 | 285篇 |
| 1993年 | 228篇 |
| 1992年 | 217篇 |
| 1991年 | 185篇 |
| 1990年 | 118篇 |
| 1989年 | 117篇 |
| 1988年 | 36篇 |
| 1987年 | 28篇 |
| 1986年 | 16篇 |
| 1985年 | 11篇 |
| 1984年 | 2篇 |
| 1983年 | 3篇 |
| 1981年 | 3篇 |
| 1980年 | 1篇 |
| 1976年 | 1篇 |
| 1963年 | 7篇 |
| 1955年 | 8篇 |
| 1953年 | 1篇 |
| 1952年 | 1篇 |
排序方式： 共有10000条查询结果，搜索用时 31 毫秒
241.
RNAi(RNA interference，RNA阻断)当初是在研究绦虫C elegans时观测到的一种现象。当将双链的RNA(double stranded RNA；dsRNA)导人体内后，与这种双链RNA相同性较高的mRNA将被特异性地抑制或者消除。除了绦虫之外，RNAi已被作为一种研究基因功能的有效工具，广泛运用于植物、真菌、线虫、果蝇以及哺乳动物，并获得了好的效果。近来使用短链(21～23碱基对)siRNA(short interfering RNA)也获得了同样的效果。siRNA与传统RNA干涉技术相比具有极大的优越 相似文献
242.
小尾寒羊具有常年发情、性成熟早和多胎性能的高繁殖力特性，平均每胎产羔2．6只，是我国优良的地方绵羊品种，也是我国独特的遗传资源。目前在Booroola Merino羊、Inverdale羊和Hanna羊中已找到影响多胎性能的主基因，但国内对小尾寒羊多胎性能遗传机制的研究主要集中在常规的选育和分子标记方面，也有一些以候选基因法从分子水平上对小尾寒羊多胎机制进行研究，仍没有确立控制小尾寒羊高繁特性的主效基因，本文就其研究现状进行综述，为小尾寒羊主效基因的研究提供有益的参考。 相似文献
243.
尧北 《兽药与饲料添加剂》2004,9(6):32-32
由扬州大学兽医学院科研人员发明的防治奶牛乳房炎的基因药物日前获得国家专利局发明专利证书。据从事该项研究的扬州大学兽医学院孙怀昌教授介绍,目前,治疗奶牛乳房炎的主要方法有抗菌素疗法、中药疗法和疫苗免疫法。其中抗菌素治疗是最为普遍的乳房炎治疗方法,常用的药物有青 相似文献
244.
根据环形泰勒虫TaA1272-1株裂殖体表面抗原(TaSP)基因的序列设计了1对引物，用PCR扩增出该基因长为393bp的高免疫原性区片段(SBxp)。将扩增产物连接到pGEM-T Easy载体上，转化入大肠埃希氏菌JM109中进行克隆。随后将重组质粒pGEM-SBxp和表达载体pGEX-4T-1分别以BamHⅠ、XhoⅠ酶切后，将酶切的目的片段SBxp亚克隆到原核表达载体中构建了重组表达载体pGEX-4T-1-SBxp，并将其转化到BL21宿主菌中。提取重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ酶切、PCR鉴定和测序确证后，阳性克隆用IPTG诱导表达。收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western blotting检测。结果，SBxp基因在大肠埃希氏菌中成功表达，其表达产物为分子质量43ku的融合蛋白，该产物能被牛环形泰勒虫阳性血清所识别。 相似文献
245.
phyA基因的克隆及其新型表达载体的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
直接以黑曲霉菌株F246基因组为模板，对植酸酶基因phyA的成熟肽(分子长度为1347bp)进行了PCR扩增，再将PCR产物克隆入pMD18-T质粒，经DNA测序鉴定正确后，亚克隆入表达载体pET30a^ 和pMG36e，成功构建了phyA基因2种新型表达载体。植酸酶phyA基因2种新型表达载体的构建，为进一步获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生态制剂打下了基础。 相似文献
246.
对从含有鸡毒霉形体H3株TM-1基因的大肠埃希氏菌DH5α中提取的质粒，进行EcoR Ⅰ和Sα／Ⅰ双酶切，获得了大约为786bp的目的片段。将此片段与经EcoRⅠ和Sαl Ⅰ双酶切的线性原核表达载体pET-30a-1连接。转化宿主菌BL21(DE3)，筛选阳性克隆。提取质粒，经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入正确，从而构建成了重组表达载体。阳性克隆用IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE电泳分析，证明其分子质量约为29ku；Western-blotting分析表明，该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别，具有生物学活性。 相似文献
247.
根据已发表的大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位(FedF／ab)的基因(fedF／ab)序列，设计了1对引物，利用PCR技术从大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、YCED2、C、D和12F株中分别扩增获得了一段序列，并克隆至pGEM—T载体，获得了重组质粒TF107F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、T12FF。经琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析，6个重组质粒的大小均为903bp，与fedF／ab基因大小一致。其中大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、C和12F株的fedF基因序列完全相同；只有YCED2株在第181位碱基处存在1个C→T的无义变异差异，D株在第655位碱基处存在1个T→C变异差异并在氨基酸水平出现1个S→P变异。结果表明，所克隆的序列均为F18ab菌毛F亚单位的基因。 相似文献
248.
根据已克隆的堆型艾美球虫(Eimeria acervulina)广东株子孢子表面抗原基因cSZ1的cDNA序列设计了特异性引物，用PCR方法扩增cSZ1的开放阅读框架(ORF)后克隆至表达载体pET-32a( )，构建了重组表达质粒pET-32a( )-cSZ1，并将其转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)。经IPTG诱导，获得了cSZ1重组抗原在大肠埃希氏菌中的高效表达，表达产物量可达菌体总蛋白的9．3％，融合蛋白的分子质量约为40ku。重组菌诱导表达的产物经SDS—PAGE后，用堆形艾美球虫感染鸡的超免疫血清进行免疫印迹分析，结果为阴性，提示cSZ1所编码的抗原可能主要是T细胞抗原表位。 相似文献
249.
以猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因片段(OMPc),酶切及核苷酸序列分析鉴定后,与原核表达载体质粒pGEX-6P-1进行连接,构建成重组表达载体pGEX-OM-Pc,转入大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳分析发现,转化了重组质粒的菌株所表达的融合蛋白相对分子量为34 kD,与实际预测相符,命名为GST-OMPc.GST亲和层析柱进行纯化,ELISA方法对纯化蛋白进行检测.结果表明:纯化蛋白GST-OMPc能够与兔抗猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型的阳性血清反应.OMPc蛋白的成功表达为其功能的研究打下基础. 相似文献
250.
马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的克隆和序列分析 总被引：4，自引：0，他引：4
参考GeneBank发表的马立克氏病病毒(MDV)国际标准强毒株GA的基因序列，设计合成一对引物，分别以RBIB，814，GD2(广东分离株)，J-1-E(北京分离株)，Md11，Md5，CV1988等不同毒株的MDV基因组DNA为模板，通过PCR扩增，获得了预期大小的PCR产物。该产物经pGEM-T-easy克隆后测序，将所得序列进行比较分析。结果发现：不同毒株间pp38基因的启动子和增强子序列间有缺失突变，序列的同源性大于95．9％，其中大多数的突变发生在MDV复制的原点附近。 相似文献