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81.
将除去3'端跨膜区的猪瘟病毒E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb,获得重组质粒pFBHT-E2,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,发生转座作用,经抗性及蓝白斑筛选得到含E2基因的重组载体质粒rBacmid-E2,以脂质体介导的方法将此重组载体质粒转染sf9昆虫细胞,获得重组病毒,命名为rvBac-E2.经SDS-PAGE和Western-blot及ELISA等方法检测,结果表明,此E2基因在昆虫细胞中正确表达,表达的蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应. 相似文献
82.
提取实验室保存禽副粘病毒-2标准毒株Yucaipa株和3株分离毒株F4、F6、F8株的RNA，经RT—PCR，获得4株毒株的HN基因，同时测得F基因与HN基因之间的序列。序列分析结果表明，HN基因的ORF全长为1743 nt，编码一个由580个氨基酸组成的蛋白。运用DNAMAN软件分析，4株毒株与GenBank上已发表毒株的HN基因的核苷酸和氨基酸之间的同源性相比，同源率分别为99．89％和99．69％。分析F基因与HN基因间序列发现两基因间序列与副粘病毒科其他病毒的基因间序列相似，含有基因起始信号和终止信号，但不含3个碱基的连接序列。通过序列分析，在分子水平上进一步证实分离于同一批进口七彩文鸟的F4、F6株是抗原性存在差异的两个毒株。毒株间的血清学关系与分子水平的核苷酸序列、氨基酸序列的比较关系一致。 相似文献
83.
Deanna L. Funnell Christopher B. Lawrence Jeffrey F. Pedersen Christopher L. Schardl 《Physiological and Molecular Plant Pathology》2004,65(6):285-296
Systemic acquired resistance (SAR) is induced following inoculation of Peronospora tabacina sporangia into the stems of Nicotiana tabacum plants highly susceptible to the pathogen. Previous results have shown that accumulation of acidic β-1,3-glucanases (PR-2's) following induction of SAR by P. tabacina may contribute to resistance to P. tabacina. We showed that up-regulation of the PR-2 gene, PR-2d, following stem inoculation with P. tabacina, is associated with SAR. Studies using plants transformed with GUS constructs containing the full length promoter from PR-2d or promoter deletions, provided evidence that a previously characterized regulatory element that is involved in response to salicylic acid (SA), may be involved in regulation of PR-2d following induction of SAR with P. tabacina. This work provides evidence that regulation of PR-2 genes during P. tabacina-induced SAR may be similar to regulation of these genes during infection of N-gene tobacco by TMV or following exogenous application of SA, and provides further support for the role of SA in regulation of genes during P. tabacina-induced SAR. 相似文献
84.
2004初从正常鸭群中分离到一株鸭源禽流感病毒，命名为A／Duck／HN／4／2004(H6N2)。经对血凝素基因(HA)序列分析发现HA基因全长为1744bp，共编码566个氨基酸，在裂解位点仅含一个碱性氨基酸-精氨酸(R)，符合LPAIV的标准。将所得基因序列与已发表的同一亚型参考序列分析表明，与H6亚型流感HA基因同源性为89．2％-97．1％，经分子遗传演化分析表明本次分离株与香港分离株A／Duck／Hong Kong／3600／99(H6N2)、A／Duck／Hong Kong／3600／99(H6N2)最近。 相似文献
85.
86.
根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物，用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后，克隆至质粒表达载体pET-32a( )，成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3)，并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10．8％，其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后，用E．necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析，结果为阳性。 相似文献
87.
猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究 总被引：9，自引：0，他引：9
PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3．1（＋），构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游，使二者融合表达，命名为pCORF2BVP22和pCBVP220RF2。分4组肌肉免疫BALB/c小白鼠，分别注射pCDNA3．1（＋）、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP220RF2，共免疫2次，间隔2周，分别于首免后2周和二免后4周采血，ELISA法检测体液抗体。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达，将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP-N1载体，构建了pNORF2和pNBVP22，转染Hela细胞后在荧光显微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示，通过两次免疫后，各疫苗组均产生了针对ORF2的体液抗体，同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果，其中以BVP22在ORF2上游效果更好。本研究为防制猪2型圆环病毒感染提供了较为理想的侯选疫苗。 相似文献
88.
89.
Canine GM2‐Gangliosidosis Sandhoff Disease Associated with a 3‐Base Pair Deletion in the HEXB Gene 
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下载免费PDF全文 P. Wang P.S. Henthorn E. Galban G. Lin T. Takedai M. Casal 《Journal of veterinary internal medicine / American College of Veterinary Internal Medicine》2018,32(1):340-347
Background
GM2‐gangliosidosis is a fatal neurodegenerative lysosomal storage disease (LSD) caused by deficiency of either β‐hexosaminidase A (Hex‐A) and β‐hexosaminidase B (Hex‐B) together, or the GM2 activator protein. Clinical signs can be variable and are not pathognomonic for the specific, causal deficiency.Objectives
To characterize the phenotype and genotype of GM2‐gangliosidosis disease in an affected dog.Animals
One affected Shiba Inu and a clinically healthy dog.Methods
Clinical and neurologic evaluation, brain magnetic resonance imaging (MRI), assays of lysosomal enzyme activities, and sequencing of all coding regions of HEXA, HEXB, and GM2A genes.Results
A 14‐month‐old, female Shiba Inu presented with clinical signs resembling GM2‐gangliosidosis in humans and GM1‐gangliosidosis in the Shiba Inu. Magnetic resonance imaging (MRI) of the dog's brain indicated neurodegenerative disease, and evaluation of cerebrospinal fluid (CSF) identified storage granules in leukocytes. Lysosomal enzyme assays of plasma and leukocytes showed deficiencies of Hex‐A and Hex‐B activities in both tissues. Genetic analysis identified a homozygous, 3‐base pair deletion in the HEXB gene (c.618‐620delCCT).Conclusions and Clinical Importance
Clinical, biochemical, and molecular features are characterized in a Shiba Inu with GM2‐gangliosidosis. The deletion of 3 adjacent base pairs in HEXB predicts the loss of a leucine residue at amino acid position 207 (p.Leu207del) supporting the hypothesis that GM2‐gangliosidosis seen in this dog is the Sandhoff type. Because GM1‐gangliosidosis also exists in this breed with almost identical clinical signs, genetic testing for both GM1‐ and GM2‐gangliosidosis should be considered to make a definitive diagnosis. 相似文献90.