内含NDV核酸的耐核糖核酸酶病毒样颗粒作为荧光定量RT-PCR内标的制备与鉴定     

《畜牧与兽医》2017,(6):120-124

为制备检测新城疫病毒的实时荧光RT-PCR病毒样颗粒内标,扩增MS2噬菌体的成熟酶蛋白和衣壳蛋白序列,将其定向插入pET32a载体的相应位置,双酶切和PCR鉴定,构建pET32a-MS2重组质粒;根据新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测的目标片段,采用化学合成和klenow酶连接技术制备内标片段,将内标片段插入pET32a-MS2重组质粒,构建pET32a-MS2-IC重组质粒,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经RNase和DNase消化后,采用荧光RT-PCR检测耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标的含量。结果表明,制备了高表达量耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标,可用于新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立。  相似文献   

利用荧光观测明确载球孢白僵菌松毛虫赤眼蜂对亚洲玉米螟的防控增效作用          下载免费PDF全文

杨芷  路杨  张庆贺  毛刚  徐文静  赵宇  隋丽  崔璐璐  张正坤  李启云 《中国生物防治学报》2020,36(1):58-64

载球孢白僵菌松毛虫赤眼蜂能够显著提高对亚洲玉米螟的防控效果，为了明确其对亚洲玉米螟卵期及幼虫期可持续防控的作用机理，采用松毛虫赤眼蜂吸附绿色荧光蛋白（GFP）标记的球孢白僵菌分生孢子，进行赤眼蜂载菌情况，以及亚洲玉米螟卵和幼虫的寄生、侵染过程观察。结果表明，赤眼蜂羽化后能够吸附柞蚕卵表面粘附的白僵菌分生孢子，并将其携带至亚洲玉米螟卵块表面，并吸附于未被赤眼蜂寄生的亚洲玉米螟卵孵化的幼虫体表，实现侵染并致死，幼虫带菌率达60.00%，网室内杀虫生物测定僵虫率达27.00%。本研究表明，载菌赤眼蜂在提高杀虫效率的同时实现害虫可持续防控，该方法为其他载菌天敌的应用提供了依据。  相似文献   

黄瓜幼苗光合荧光特性及根系抗氧化系统对外源肉桂酸的响应     

马宁  陈碧  杨华  刘威  黄兴昌  陈英  蒋军卫  肖雪梅 《江苏农业科学》2020,48(12):113-119

以津研4号黄瓜为试验材料,采用外源肉桂酸(CA)模拟自毒胁迫,研究水培方式下黄瓜幼苗生长发育、光合荧光特性和抗氧化系统对CA胁迫的响应。结果表明,外源CA处理可对黄瓜幼苗生长发育产生明显的抑制作用。当CA浓度为0.25 mmol/L时,处理4 d后黄瓜幼苗的株高和叶面积受到显著抑制,甚至造成部分死亡。黄瓜幼苗根系总根长、根表面积、根体积在CA浓度为0.25 mmol/L时分别比对照降低了19.9%、31.7%、34.7%,随着CA浓度的增加,抑制作用逐渐增强。与对照相比,CA处理下的黄瓜幼苗净光合速率(P_n)、蒸腾速率(T_r)、气孔导度(G_s)、初始荧光(F_o)、最大荧光(F_m)、最大光化学效率(F_v/F_m)、有效光化学量子产量(Φ_(PSⅡ))、调节性能量耗散的量子产额Y_(NPQ)和光化学淬灭系数(q_P)均呈降低趋势,而胞间CO_2浓度(C_i)、非光化学淬灭系数(q_N)和非调节性能量耗散的量子产额Y_(NO)则呈升高趋势。此外,随着CA浓度的升高,根系过氧化物酶(POD)活性不断升高,而超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性呈先升高后降低的趋势。说明CA处理会造成黄瓜幼苗光系统Ⅱ(PSⅡ)的损伤,使光合性能下降,同时促进活性氧(ROS)的积累和丙二醛(MDA)含量的增加,从而影响黄瓜幼苗正常的生长发育。  相似文献   

应用SYBR Green I的Real-time PCR方法定量检测空肠弯曲杆菌   总被引：2，自引：0，他引：2  

阳成波  蒋原  黄克和  祝长青 《动物医学进展》2003,24(1):74-78

空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)被认为是人类主要食源性病原菌之一。由于空肠弯曲杆菌特殊的生长条件和容易进入不可培养但存活的状态(Viablebutnonculturable,VNC),所以传统的生化鉴定结果不一定可靠,并且是一项费时而繁琐的工作。核酸检测方法的出现为空肠弯曲杆菌的检测带来了方便。本文基于LightCycler为平台,利用SYBRGreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立一种Real-timePCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌。用该方法检测时,发现所有空肠弯曲杆菌(11株)都呈阳性,所有其它弯曲菌(3株)和其它菌株(5株)都是阴性。整个检测过程60min内可以完成,检测限度为5CFU,标准曲线的相关系数为1。结果表明基于SYBRGreenI的定量PCR方法既为空肠弯曲杆菌提供了一种特异、敏感、快速和简洁的定量检测方法,又为研究空肠弯曲杆菌致病机理提供了一种重要方法。  相似文献   

多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒   总被引：26，自引：0，他引：26  

刘建柱  崔玉东  李鹏  王志强  石星明  朴范泽 《中国兽医学报》2003,23(6):535-537

根据猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)3种病原体的基因保守序列，分别设计了与CSFV的E2基因、PPV的VP2基因和PRV的gⅡ基因序列互补的3对引物。用这3对引物对人为混合的样品中的PPV和PRV的DNA模板及CSFV反转录后的cDNA模板进行多重PCR扩增和多重PCR反应奈件的优化，结果同时得到3务与试验设计相符的288bp(CSFV)、575bp(PPV)700bp(PRV)特异性条带；敏感性检测结果表明，该多重PCR可以检测到14．5ng／L的CSFV、27．1pg／L的PPV、31．4ng／L的PRV的核酸模板。  相似文献   

狂犬病病毒SRV9克隆株核蛋白基因的克隆、表达与特性分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

袁慧君  扈荣良  张守峰  张茂林  涂长春 《中国预防兽医学报》2003,25(1):5-8

根据已发表的狂犬病病毒核蛋白基因序列，设计并合成了一对引物，从SAD株驯化的SRV9。蚀斑株中提取病毒RNA，通过RT-PCR扩增出核蛋白的全长cDNA序列，测序结果显示，其序列与国外报道的SAD母源株序列一致。将核蛋白的cDNA克隆至原核表达载体pET-28b( )中，转化大肠杆菌BL21（DE3）plyss，于30℃1mmol/LIPTG条件下诱导表达，大肠杆菌菌体裂解产物经SDS-PAGE分析，在分子量约为56kDa处出现一新的蛋白带。和预期的目的蛋白分子量相符，Western-blotting检测表明，表达产物能与狂犬病病毒阳性血清发生特异性反应，出现单一反应带，扫描分析显示，表达产物占菌体总蛋白的23%，包涵体分离，纯化后，纯度达89%，上述结果为核蛋白在狂犬病基因免疫和免疫检测中的进一步应用奠定了基础。  相似文献   

三种PCR方法诊断猪伪狂犬病的比较研究   总被引：8，自引：0，他引：8  

范伟兴  刘文强  胡敬东  赵宏坤 《中国预防兽医学报》2003,25(4):294-298

针对伪狂犬病毒gD基因的不同片段设计三对引物，分别进行PCR扩增用于猪伪狂犬病的诊断，扩增的三个片段的长度分别为262bp、217pb以及1203bp的全基因。通过比较发现，这三种PCB诊断方法均具有很高的特异性和敏感性，值扩增gD基因内部262bp的PCR诊断方法种具有突出优点，其退火与延伸合成一步，其操作可于1h内完成，敏感性更高，更适于猪伪狂犬病的快速诊断。  相似文献   

应用多重PCR检测人工感染鸡呼吸道疾病的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

庞耀珊  谢芝勋  谢志勤  刘加波  邓显文  廖敏  M.I.Khan 《中国预防兽医学报》2001,23(6):415-418

本文报道了IBV，NDV，ILTV，MG人工感染4周龄SPF鸡和非免疫鸡后，用多重PCR检测试验鸡的咽喉棉拭子和器官组织样品，并与传统的病原分离鉴定，血清学方法进行比较，多重PCR无论是对单一感染病原，还是对两种以上混合感染病原，其敏感性和检测速度都优于传统的鉴别诊断方法，具有较高的实用价值，可以直接应用于临床检测，服务于生产。  相似文献   

进口肉骨粉及动物饲料中牛源性成分的PCR—微孔板杂交检测方法   总被引：3，自引：0，他引：3  

王静  徐宝梁  王丙武  王曙光  杨瑞馥  张敏丽 《饲料研究》2001,(10):16-19

疯牛病（Mad－Cow Disease）即牛海绵状脑病（Bovine Spongiform Encephalopathy，BSE），已被证实与人的克雅氏病（Creutzfeldt Jakob Disease,CJD）有直接关联。人如果食用感染了疯牛病病原的牛肉，就会患上克雅氏病，造成永久性的脑部损伤，脑组织形成海绵状空洞，导致精神错乱、痴呆，最终死亡。已经报道发现疯牛病的国家有英国、爱尔兰、意大利、葡萄牙、瑞士、法国、西班牙、德国和比利时等，疯牛病已经成为当今世界食品安全的重大威胁。到目前为止，尚未发现疯牛病的病原。肉骨粉是牲畜屠宰后其毛纤维、皮革、角质、骨骼、脏…  相似文献   

城市空间形态定量化研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

牟凤云  张增祥 《水土保持研究》2009,16(5)

对国内外学者有关城市空间形态定量化的研究方法作了回顾与总结,主要介绍了基于GIS的定量分析法和分形维数法,并简要地对各种方法作了评论,使读者对目前在这一方面的研究情况有所了解,以便明确进一步深入研究的方向.  相似文献