禽副粘病毒-2型标准毒株与不同分离株HN基因的序列测定及分析     

杨爱梅  赵继勋  赵西星  张国中  卜春亚 《畜牧兽医学报》2004,35(4):424-427

提取实验室保存禽副粘病毒-2标准毒株Yucaipa株和3株分离毒株F4、F6、F8株的RNA，经RT—PCR，获得4株毒株的HN基因，同时测得F基因与HN基因之间的序列。序列分析结果表明，HN基因的ORF全长为1743 nt，编码一个由580个氨基酸组成的蛋白。运用DNAMAN软件分析，4株毒株与GenBank上已发表毒株的HN基因的核苷酸和氨基酸之间的同源性相比，同源率分别为99．89％和99．69％。分析F基因与HN基因间序列发现两基因间序列与副粘病毒科其他病毒的基因间序列相似，含有基因起始信号和终止信号，但不含3个碱基的连接序列。通过序列分析，在分子水平上进一步证实分离于同一批进口七彩文鸟的F4、F6株是抗原性存在差异的两个毒株。毒株间的血清学关系与分子水平的核苷酸序列、氨基酸序列的比较关系一致。  相似文献   

Expression of the tobacco β-1,3-glucanase gene, PR-2d, following induction of SAR with Peronospora tabacina     

Deanna L. Funnell  Christopher B. Lawrence  Jeffrey F. Pedersen  Christopher L. Schardl 《Physiological and Molecular Plant Pathology》2004,65(6):285-296

Systemic acquired resistance (SAR) is induced following inoculation of Peronospora tabacina sporangia into the stems of Nicotiana tabacum plants highly susceptible to the pathogen. Previous results have shown that accumulation of acidic β-1,3-glucanases (PR-2's) following induction of SAR by P. tabacina may contribute to resistance to P. tabacina. We showed that up-regulation of the PR-2 gene, PR-2d, following stem inoculation with P. tabacina, is associated with SAR. Studies using plants transformed with GUS constructs containing the full length promoter from PR-2d or promoter deletions, provided evidence that a previously characterized regulatory element that is involved in response to salicylic acid (SA), may be involved in regulation of PR-2d following induction of SAR with P. tabacina. This work provides evidence that regulation of PR-2 genes during P. tabacina-induced SAR may be similar to regulation of these genes during infection of N-gene tobacco by TMV or following exogenous application of SA, and provides further support for the role of SA in regulation of genes during P. tabacina-induced SAR.  相似文献   

Molecular Identification of a New Member of the Clover Proliferation Phytoplasma Group (16SrVI) Associated with Centaurea Solstitialis Virescence in Italy     

Francesco Faggioli  Graziella Pasquini  Valentina Lumia  Gaetano Campobasso  Timothy L. Widmer  Paul C. Quimby Jr 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》2004,110(4):353-360

In the United States, yellow starthistle (Centaurea solstitialis) is an annual invasive weed with Mediterranean origins. Malformed plants displaying witches' broom, fasciations, abortion of buds and flower virescence symptoms were observed in central Italy. Attempts to transmit the causal agent from the natural yellow starthistle host to periwinkle by grafting, resulted in typical symptoms of a phytoplasma, i.e. yellowing and shortening of internodes. The detection of phytoplasmas was obtained from both symptomatic yellow starthistle and periwinkle by the specific amplification of their 16S-23S rRNA genes. PCR amplification of extracted DNA from symptomatic plant samples gave a product of expected size. Asymptomatic plants did not give positive results. An amplicon obtained by direct PCR with universal primers P1/P7 was cloned and sequenced. The homology search using CLUSTALW program showed more than 99% similarity with Illinois elm yellows (ILEY) phytoplasma from Illinois (United States) and 97% with Brinjal little leaf (BLL) phytoplasma from India. Digestion of the nested-PCR products with restriction enzymes led to restriction fragment length polymorphism patterns referable to those described for phytoplasmas belonging to the clover proliferation (16S-VI) group. Since this is a previously undescribed disease, the name Centaurea solstitialis virescence has been tentatively assigned to it. This is a new phytoplasma with closest relationships to ILEY and BLL, but distinguishable from them on the basis of 16S rDNA homology, the different associated plant hosts and their geographical origin.  相似文献   

猪附红细胞体16S rRNA基因的序列测定和系统进化分析   总被引：11，自引：3，他引：11  

张浩吉  谢明权  张健騑  覃宗华  顾万军  蔡建平 《畜牧兽医学报》2005,36(6):596-601

从确诊为猪附红细胞体感染的猪场，无菌采集血样，抽提猪附红细胞体基因组DNA，采用真细菌的通用引物进行16S rRNA基因扩增，对扩增产物进行克隆和测序。从3个地理位置不同的猪场均成功地扩增出长度为1469bp的核苷酸序列。系统进化分析表明，3个猪场样品所测序列一致性达99．52％以上，具有相同的基因型，但与国外报道的猪附红细胞体Illinois株同源性为95％，属于同一基因群，但基因型不同；所有种类的附红细胞体和血巴尔通氏体组成同一进化分支，这类血营养菌与支原体科，支原体属的病原最靠近(75％)，而与立克次氏体目的病原较远(70％)。上述研究证实，广东所流行的猪附红细胞体是一种新基因型的猪附红细胞体，建议命名为猪附红细胞体广东株型；为反映进化关系，猪附红细胞体和其它血营养菌应划归于支原体科的支原体属。  相似文献   

鸭流感病毒4/2004-H6N2亚型毒株的血凝素基因全序列克隆与分析     

顾节清 陈杰李晓成  杨增岐吴发兴张燕霞  黄保续 《中国动物检疫》2005,22(5):31-33

2004初从正常鸭群中分离到一株鸭源禽流感病毒，命名为A／Duck／HN／4／2004(H6N2)。经对血凝素基因(HA)序列分析发现HA基因全长为1744bp，共编码566个氨基酸，在裂解位点仅含一个碱性氨基酸-精氨酸(R)，符合LPAIV的标准。将所得基因序列与已发表的同一亚型参考序列分析表明，与H6亚型流感HA基因同源性为89．2％-97．1％，经分子遗传演化分析表明本次分离株与香港分离株A／Duck／Hong Kong／3600／99(H6N2)、A／Duck／Hong Kong／3600／99(H6N2)最近。  相似文献   

复方中草药"毒菌杀"对禽大肠杆菌及鸡白痢沙门氏菌的体外抑菌试验   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘俊栋  刘海霞  张栋  周广生  李建基  刘宗平 《中国家禽》2005,27(5):10-11,14

观察了复方中草药“毒菌杀”的安全性及其对禽大肠杆菌及鸡白痢沙门氏菌的体外抑菌情况。结果发现“毒菌杀”安全性高，组成“毒菌杀”的各单味中药及其合剂对大肠杆菌的最低抑菌浓度MIC(g/mL)分别为板蓝根0．05、穿心莲0．05、黄芪0．025、黄柏0．05、柴胡0．05、生地0．05、甘草0．05、当归0．025，“毒菌杀”方剂为0．05；对沙门氏菌的MIC分别为板蓝根0．05、穿心莲0．025、黄芪0．025、黄柏0．05、柴胡0．025、生地0．05、甘草0．025、当归0．05，“毒菌杀”方剂为0．025；而牛胆汁对这两种致病菌的最低抑菌浓度分别为2％和1％。说明“毒菌杀”方剂对大肠杆菌、沙门氏菌具有明显的抑制作用。  相似文献   

鸡白细胞介素2原核表达载体的构建及表达产物的鉴定   总被引：5，自引：1，他引：5  

提金凤  张艳梅  郝贵杰  邵卫星  刘秀梵 《中国家禽》2005,27(14):15-17

将鸡白细胞介素2(IL-2)的cDNA克隆到原核表达载体pET-30a( )上，构建原核重组表达质粒pET-IL-2，并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达，37℃用IPTG诱导3.5h后，SDS-PAGE检测表明，表达蛋白以包涵体的形式存在。将诱导后的工程菌超声波裂解，离心后的沉淀用PBS洗涤5～6次，得到高纯度的目的蛋白。  相似文献   

毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达     

覃宗华  谢明权  蔡建平  艾哈迈德  彭新宇  魏文康  吴惠贤 《中国兽医学报》2005,25(1):22-25

根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物，用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后，克隆至质粒表达载体pET-32a( )，成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3)，并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10．8％，其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后，用E．necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析，结果为阳性。  相似文献   

添加不同酵母培养物对瘤胃纤维分解菌群和纤维素酶活的影响   总被引：14，自引：0，他引：14  

黄庆生  王加启 《畜牧兽医学报》2005,36(2):144-148

用3种酵母培养物(YC- 1、YC 2和YC- 3)分别饲喂4头带有永久性瘤胃瘘管的肉牛,研究培养物对瘤胃发酵、纤维分解酶活性和3种纤维分解菌数量的影响,结果表明:YC 2处理的乙酸、丙酸、丁酸和总 VFA浓度显著高于对照组(P<0 .05),YC 1和YC 3处理的乙酸/丙酸比例显著降低(P<0 .01);各处理均能显著提高瘤胃内羧甲基纤维素酶、水杨苷酶和木聚糖酶的活性(P<0 .01);各处理都显著提高黄化瘤胃球菌的相对比例(P<0 .01),16SrRNA特异性寡聚核苷酸探针杂交法分析测定结果表明 3 种纤维分解菌在瘤胃细菌中所占比例为 3. 80%±0 .2%。  相似文献   

猪2型圆环病毒核酸疫苗免疫效应研究   总被引：9，自引：0，他引：9  

宋云峰  肖少波  金梅林  张松林  陈焕春 《畜牧兽医学报》2005,36(10):1049-1054

PCR扩增PCV2 ORF2和BVP22基因。将ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3．1（＋），构建了pCORF2作为核酸疫苗免疫小白鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游，使二者融合表达，命名为pCORF2BVP22和pCBVP220RF2。分4组肌肉免疫BALB/c小白鼠，分别注射pCDNA3．1（＋）、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP220RF2，共免疫2次，间隔2周，分别于首免后2周和二免后4周采血，ELISA法检测体液抗体。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达，将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP-N1载体，构建了pNORF2和pNBVP22，转染Hela细胞后在荧光显微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示，通过两次免疫后，各疫苗组均产生了针对ORF2的体液抗体，同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果，其中以BVP22在ORF2上游效果更好。本研究为防制猪2型圆环病毒感染提供了较为理想的侯选疫苗。  相似文献