悬铃叶苎麻AFLP反应体系的建立     

郭新波  臧巩固  赵立宁 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2008,36(6):61-67

【目的】建立悬铃叶苎麻植物AFLP反应体系,为其无融合生殖的分子标记及构建遗传图谱提供技术支持。【方法】以悬铃叶苎麻叶片为材料,采用改良CTAB法提取基因组DNA,并对酶切与连接体系、预扩和选扩程序进行探索,建立一套优化的AFLP反应体系。【结果】通过对EcoRⅠ+NNN/MseⅠ+NNN的64对引物组合的筛选,获得了清晰的选择性扩增图谱和多态性较高的引物组合。【结论】经多次重复验证,建立的优化体系可用于悬铃叶苎麻的AFLP分析。  相似文献   

玉米微卫星PCR产物变性与非变性PAGE-银染法的比较分析     

王爱听  李永生  穆延召  李玥  白杨  王威  王汉宁 《玉米科学》2013,21(3):48-51

对变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行比较,探讨建立简便、快速、安全、可靠、经济、效率高、毒害低的应用于玉米遗传多样性分析的SSR标记方法。结果表明,用2对SSR引物对6份玉米自交系基因组DNA进行扩增,将扩增产物在变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)上电泳,银染后微卫星扩增产物在二者上的电泳结果存在差异。在变性胶中微卫星扩增产物目的条带清晰,易于鉴定;在非变性凝胶中表现有较多的非特异性条带,但目的条带很明亮,容易看出来,不影响实验结果。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳带型清晰准确、结果可靠、经济快速,能真实地揭示玉米自交系间的遗传多样性,是玉米种质类群划分的有效分子标记方法。  相似文献   

海南南渡江唇䱻染色体核型和银染分析          下载免费PDF全文

李安  李高俊  王世锋  柳淑芳  周永灿  申志新  薛献坵  蔡岩 《渔业科学进展》2020,41(2):95-102

本研究以海南南渡江野生唇?(Hemibarbus labeo)为材料,采用腹腔注射植物血球凝集素(PHA)、秋水仙素,肾细胞直接制片法,分析唇?染色体核型和银染(Ag-NORs)。结果显示,唇?的二倍体染色体数目为50,核型公式为2n=18m+12sm+12st+8t,其染色体臂数(NF)为80,未发现异型染色体,Ag-NORs出现在第5对和第11对同源染色体的短臂末端。鮈亚科鱼类染色体进化综合分析结果表明,唇?具有鮈亚科鱼类的原始核型。本研究不仅补充了唇?的细胞遗传学数据,为研究鮈亚科/?属鱼类的分类与进化提供了数据资料,也为唇?的种质资源保护、种质改良等工作奠定了理论基础。  相似文献   

"高效RAPD"技术的初步研究及其PAGE检测   总被引：4，自引：0，他引：4  

孟宪红  孔杰  刘萍 《海洋水产研究》2004,25(2):13-17

对经典的单引物RAPD技术进行优化．确立了适合于多条引物(2～4条)同时参与同一反应的“高效RAPD”体系及扩增运行条件,不但实现了1次操作检测更多位点、使多样本量RAPD检测变得相对省时省力,同时还可节省珍贵的实验样品。本文采用了具有高分辨能力的非变性PAGE-银染检测方法对RAPD产物进行检测,使一般经琼脂糖电泳检测仅能分辨出不足10条谱带的RAPD产物可分辨出15～30条清晰可见谱带。非变性PAGE-银染检测方法操作安全,银染后的凝胶可长期保存。  相似文献   

合作猪染色体的研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

王勇强  路兴中 《甘肃农业大学学报》1990,25(4):359-363

采用微量外周血淋巴细胞培养以及Ag-NORs染色、C-分带技术,对合作猪染色体的核型、核仁组成区以及结构异染色质进行了研究。结果表明,合作猪染色体阳性银染核仁组成为1,2,3和4的频率分别为0.00,0.22,0.47和0.31,平均有3.02条染色体的核仁组成区被正染,Ag-NORs联会的频率为1.29％;合作猪染色体C-带类型趋于稳定。  相似文献   

青山羊皮肤组织差显快速银染技术的优化研究     

张兆远  康文霞  董彬  崔志峰  王慧 《山东农业大学学报(自然科学版)》2008,39(1):59-61

差异显示PCR (differential display PCR,DDRT-PCR)技术是快速分离差异表达基因的强有力工具,但是其繁琐的染色程序和较高的假阳性率给研究者带来了不便.为了提高DDRT-PCR技术的效率和试验结果的清晰度和重复率,本研究以济宁青山羊皮肤组织的总RNA为试验材料,对影响DDRT-PCR的因素,如:反转录条件、反应体系和染色条件进行了优化研究.通过对染色程序和温度等染色条件的反复对比试验,建立了快速银染技术,得到了十分清晰的DDRT-PCR电泳图谱.快速银染技术既缩短了染色时间,又可以得到清晰的电泳图谱.  相似文献   

甘蓝型油菜银染mRNA差别显示条件的建立及优化     

秦岭  张春雷 《勤云标准版测试》2007,(5)

mRNA差异显示技术是分析差异表达基因的强有力的工具。本实验针对油菜差别显示体系筛选优化,最终获得了差别显示体系。研究结果为:RNA模板在2μg,反转录产物用量为1.5μl时,可以扩增出较多且清晰的条带;PCR退火温度在40℃扩增条带清晰。该体系用于甘蓝型油菜低磷胁迫前后基因差异表达研究稳定可靠。  相似文献   

Ag─NOR染色技术在豌豆染色体研究中的应用     

李贵全  赵晓明 《山西农业大学学报(自然科学版)》1995,15(1):6-9

本文以山西省栽培的硬粒豌豆品种为实验材料，对豌豆个体之间细胞核仁的数目Ａｇ—ＮＯＲ的位置变化，及在实验过程中所观察到的染色体分化程度进行了研究。结果表明，该品种在问期核可见到１—４个核仁，核仁的大小随染色体的浓缩程度发生变化，在不同类型的细胞中，银染核仁的面积分布不同，说明ＲＮＡ与蛋白质的比例有颇大的变动。试验还证明，染色体标本的制备技术对银染的分化程度有较大的影响，只有在适当的条件下才能促使银染的正反应。  相似文献   

龙眼AFLP银染体系的建立与优化     

李冬波  朱建华  李鸿莉  黄凤珠  李江舟  潘丽梅 《安徽农业科学》2008,36(3):893-894,907

[目的]优化龙眼AFLP银染体系中的影响因素。[方法]以23份龙眼品种和2份龙眼近缘植物龙荔为试材,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系中的几个影响因素(DNA提取、酶切与连接、电泳与银染)进行研究,建立起龙眼AFLP银染分析体系。[结果]用紫外分光光度计检测样品DNA质量和浓度,发现提取的DNA吸光度A260/A280比值在1.8左右,A260/A230的比值大于2.0,说明所提取的DNA样品纯度较高,无蛋白质或盐类的污染。酶切与连接中采用37℃水浴5 h,然后转入65℃水浴2 h的方法能保证酶切充分,又能防止酶切过度。电泳和银染时用4℃预冷的显影液进行显影,可以降低显影速度。[结论]采用该技术体系得到的AFLP指纹式样清晰,重复性强,适宜用作龙眼品种鉴别和遗传多样性分析。  相似文献   

蜡梅AFLP-银染体系的建立与优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

周明芹  杨琴军  陈龙清 《华中农业大学学报》2007,26(3):394-398

为了建立蜡梅AFLP-银染的优化体系,采用EcoRI和MseI 2种限制性内切酶酶切组合,对该2种酶的用量、酶切时间、预扩增与选择扩增中的Mg2 浓度、Taq DNA聚合酶的用量、引物的浓度以及预扩增产物的稀释倍数等因素进行了多水平的筛选,同时探讨了温度及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的电流强度等因素对胶图的影响。结果表明:用5 U限制性内切酶酶切4 h便能在40μL的反应体系中完全切割500 ng的总DNA,酶切连接产物稀释10倍后在含有1.5 mmol/L Mg2 1、U Taq、预扩增引物E A和M C分别为40 ng的20μL反应体系中进行预扩增,将预扩增产物稀释30倍后在含有1.5 mmol/L Mg2 、0.6 U Taq、选择扩增引物E 3为30 ng、M 3为60 ng的20μL的体系中进行选择性扩增,能够得到质量比较好的AFLP胶图。此外,在进行PAGE电泳和硝酸银染色,将电泳的温度控制在50℃左右,电流控制在45~60 mA左右能提高胶图的质量。利用这种优化的反应体系,成功地评价了40个蜡梅基因型的遗传多样性,6对选择扩增引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性,它们分别是:E-AAC/M-CCC,E-ATC/M-CCC,E-AGA/M-CAG,E-AAA/M-CAC,E-ATA/M-CCA,E-ATT/M-CCA。  相似文献