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以加工番茄为试验材料,采用PCR-SSCP分子标记技术,对DNA提取方法、PCR反应程序、聚合酶链式反应-单链构象多态性分子标记体系的电泳条件、变性剂等诸多因素进行了研究,筛选和建立了多态性检出率高、带型清晰、重复性好的PCR-SSCP反应体系和反应程序。结果表明:采用CTAB法提取番茄叶片DNA时,在CTAB缓冲液中加入5mol/L NaCl,第一次抽提离心速度和离心时间分别为8 000r/min和15min,可以获得高质量的DNA,PCR扩增程序为94℃5min,94℃1min,52℃30s,72℃1min,72℃10min,29个循环,退火温度52℃,引物大小100~300bp、98℃变性10min,非变性聚丙烯酰胺凝胶浓度8%,电泳1.5~2.5h,聚丙烯酰胺凝胶中不添加甘油为加工番茄PCR-SSCP分子标记体系最佳的条件组合。 相似文献
44.
利用SDS-PAGE和银染检测技术,对我国苦荞、甜荞、小麦、玉米、糯稻米、籼稻米等6种常见粮食粉的种子蛋白亚基进行比较研究,为其鉴别提供经济、快捷、有效的方法.结果发现:甜荞品种间种子蛋白亚基丰富,并显示高度变异性;苦荞种子蛋白质亚基不如甜荞丰富,各品种蛋白亚基变异性不高;荞麦在种子蛋白亚基指纹上与小麦、玉米、糯稻米、籼稻米等粮食粉均有显著差异,可以作为不同粮食作物种子粉鉴别的依据. 相似文献
45.
柿AFLP银染技术体系的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
通过对各主要影响因素的研究,建立了适于柿AFLP分析的银染技术体系:酶切体系20μL总体积中含纯化后的DNA450ng,EcoRI和MseI各3U,37℃酶切4h;酶切完成后加入连接液,37℃连接10h(或过夜),然后65℃变性10min;连接产物稀释5倍用于预扩增,预扩增体系中EcoRI和MseI引物均不含选择性碱基;预扩增产物稀释5倍用于选择性扩增,选择性扩增体系中EcoRI和MseI引物均含3个选择性碱基,选择性扩增完成后,加入10μLLoadingbuffer,95℃变性10min,立即冰浴;取6 5μL变性后的选择性扩增产物在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳,电泳完毕后,对胶板进行固定、脱色、水洗、银染、冲洗、显影、定影及干燥等银染程序。 相似文献
46.
微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术的探讨 总被引：3，自引：0，他引：3
采用PCR一非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、硝酸银染色检测DNA片段。结果表明,该方法检测DNA具有灵敏度高、背景浅、条带清晰等突出特点。聚丙烯酰胺凝胶电泳后采用银染技术分析,方便快捷,易长期保存,且减小了对人体、环境的毒害作用。 相似文献
47.
SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶快速银染方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
《中国马铃薯》2015,(3):136-140
针对传统聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法存在染色时间长、步骤繁琐,难以大批量试验等诸多不利因素,对改良的银染检测方法与文献报道的4种银染检测方法的染色效果、时间及试剂成本等进行对比分析。结果表明,改良方法省略前期的漂洗与固定步骤,只进行银染、漂洗、显影和终止4个步骤,整个银染过程耗时12 min,较其他方法耗时少,目标片段较清晰,试剂用量少,过程较为简单,可批量操作。 相似文献
48.
[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定技术基础。 相似文献
49.
非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究 总被引：1，自引：0，他引：1
对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物索标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针.PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进... 相似文献
50.
反转录差异显示技术及其方法的改进 总被引：7，自引：1，他引：6
运用mRNA反转录差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,为研究生命活动过程提供重要信息。文章对差异显示反转录聚合酶链式反应技术的基本原理 ,优点与缺点 ,以及近年来对该技术涉及的RT PCR方法、引物设计、PCR反应参数、电泳及差异条带的显示方法以及杂交方式进行了论述和评价 ,并对其应用前景进行了简单分析。 相似文献