PAGE凝胶制备方法和银染方法的改进   总被引：4，自引：0，他引：4  

胡建斌  李静  袁鸣  胡深  李建吾 《江西农业大学学报》2009,31(4)

PAGE凝胶分析技术已广泛运用于小分子量PCR产物的分离,但因操作环节多、耗时长,不利于大规模分子标记分析工作的开展.对PAGE凝胶的制备和银染方法作些改进,省去常规凝胶制备中亲和硅烷/剥离硅烷处理过程,以及常规银染过程中的固定和定影两步骤.与常规方法相比,该方法操作简便、耗时短、带谱的分辨率高,可代替常规方法用于SSR等标记的PCR产物的分离.  相似文献   

暴露于异丙隆中文蛤差异表达基因的研究     

赵艳景  胡虹  王颖 《江苏农业科学》2009,(6)

为了研究文蛤经异丙隆处理后引起的细胞基因表达变化,探索文蛤暴露于农药后分子水平上基因的开放、关闭或表达量的改变,以寻找和发现有价值的指示农药污染的生物标记物基因.在恒定温度(25℃)条件下驯化文蛤7 d,将驯化后的文蛤分为2组(每组20个),给药组文蛤暴露于添加除草剂异丙隆的海水中处理30 d,对照组文蛤暴露于天然海水中处理30 d,用酸性酚-硫酸氰胍-氯仿提取法纯化文蛤鳃总RNA,用4种锚定引物,以总RNA为模板在反转录酶的作用下合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板,在锚定引物和随机引物的作用下连续进行2轮PCR反应,用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR产物,银染法显色.对聚丙烯酰胺凝胶电泳显示的差异条带进行回收,并对差异基因片段进行第2次扩增,经琼脂糖电泳后回收基因片段.结果共得到cDNA扩增片段约400条,其中有60余种基因片段的表达发生了明显的差异.在文蛤适应除草剂污染过程中有12个基因表达上调,有11个基因表达下调,有22个基因片段只在试验组表达,有23个基因片段只在对照组表达.基因差异片段可能与指示农药污染的生物标记基因的表达有关.  相似文献   

甘蔗AFLP标记和SSR标记的PAGE胶快速银染检测方法   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘新龙  蔡青  毕燕  陆鑫  马丽  应雄美  毛钧 《江苏农业学报》2009,25(2)

银染方法是一种重要的DNA染色法.其原理是利用银离子和核苷酸结合,在碱性环境下甲醛使银离子还原从而使凝胶中的DNA片段得以显现[1,2].  相似文献   

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化     

艾鹏飞  方闪闪  吴学敏  靳占忠 《安徽农业科学》2011,39(1):63-65

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定了技术基础。  相似文献   

海南野生豹纹鳃棘鲈染色体核型及银染研究     

高宁  蔡岩  周永灿  李根浪  袁卫  刘海天  谢珍玉  王世锋 《大连海洋大学学报》2015,(3):257-260

以野生豹纹鳃棘鲈Plectropomus leopardus为材料,采用抽血、植物血球凝集素(PHA)和秋水仙素体腹腔注射法,取头肾细胞制备染色体标本,对其染色体核型和Ag-NORs进行了分析。结果表明:豹纹鳃棘鲈二倍体染色体数目为48,其核型公式为2n=2st(t)+46t,NF=48;仅有1对NORs位于第1对染色体长臂靠近着丝粒的位置。  相似文献   

mRNA差异显示技术研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘荣梅  李凤兰  王淑菊  胡宝忠 《黑龙江农业科学》2007,(1):86-89

运用mRNA差异显示技术可以了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况,为研究生命活动过程提供重要信息.对差异显示技术的基本原理、优缺点以及近年来此方法的改进进行了论述和评价,并对其应用前景进行了简单分析.  相似文献   

小麦基因组DNA快速提取及SSR标记PAGE的银染检测   总被引：4，自引：3，他引：1  

杨芳  尚勋武  王化俊  刘娟  乔岩  冯毓琴 《甘肃农业大学学报》2008,43(2):46-50

为了提高SSR-PCR速率,降低试验成本,以8份抗条锈小麦幼苗为材料,比较分析了两种DNA提取方法(CTAB法和SDS法)以及两种SSR标记PAGE银染法(Sanguinetti银染法和Bassam银染法).结果表明:用CTAB法和SDS法均可获得质量较好的DNA,但CTAB法花费的时间较长,提取效率低(在相同条件下SDS法提取速度约为CTAB法的2倍);Sanguinetti银染法染色背景较浅、条带清晰、分辨率高、具有较高的多态性检出率,并且在速度上优于Bassam法,仅需30多min,而Bassam银染法染色步骤烦琐,对试剂质量和水质要求均较高,且未能染色成功.  相似文献   

水稻AFLP指纹银染法显带研究   总被引：19，自引：0，他引：19  

朱正歌  贾继增  孙宗修 《中国水稻科学》2002,16(1):71-73

以转基因水稻为材料,对AFLP指纹银染技术及实验操作中的关键技巧做了比较详尽的叙述,取得了比较理想的实验结果。  相似文献   

棉花AFLP银染技术及品种指纹图谱应用初报   总被引：15，自引：7，他引：8  

宋国立  张春庆  贾继曾  王坤波  崔荣霞 《棉花学报》1999,(6)

本文介绍了一种适合于棉花研究的ＡＦＬＰ银染方法,并利用该方法获得了几个棉花品种的指纹图谱  相似文献   

用银染mRNA差异显示技术寻找不同生长阶段绵羊皮肤中差异表达基因   总被引：2，自引：0，他引：2  

崔建东  赵宗胜  李大全  王建华  王宏伟  毛录山 《中国草食动物》2004,24(3):11-14

利用优化了的银染mRNA差异显示技术(DD-PCR)，比较了出生后40日龄、60日龄和120日龄三个不同生长阶段的绵羊相同部位的皮肤中总RNA的差异表达。结果表明：同一个体不同日龄的绵羊存在着表达量不同的差异表达基因，并初步筛选出了8条重复性好的差异cDNA片段，其中1条表达量不同的差异片段存在于40日龄，5条存在于60日龄，2条为120日龄所特有。本试验将为进一步研究影响绵羊毛性状相关基因在皮肤中的表达提供科学的参考依据。  相似文献