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微卫星电泳及银染检测中的常见问题分析及对策 总被引：1，自引：0，他引：1
微卫星DNA,又称短串联重复序列(short tandemrepeat STR),是一类广泛存在于原核/真核生物基因组的DNA串联重复序列。它是继RFLP之后兴起的一种新的分子遗标记技术。因其多态信息含量高,检测快速,重组率低,已被越来越多的应用于基因定位及构建基因组图谱和群体遗传结构分析及杂交优势预测等诸多方面[1]。尽管微卫星标记方法操作简便、快捷,但因其灵敏度高、操作时间短,在实际操作中出现的一些问题常常会影响最终的检测结果。笔者总结了一年来STR工作中所遇到的一些有关于微卫星电泳及银染的常见问题,做出了相应的分析和对策,对于保证… 相似文献
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银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因 总被引：5，自引：0，他引：5
以柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料，用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板．用Oligo（dT）12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RTPCR，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5务差异条带，进行2次PCR扩增，产物回收后与PGEM—T—easy Vector连接转化。经PCR鉴定正确后，再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现，地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段（可能为新的基因片段），这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。 相似文献
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mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)是分离差异表达基因的有效方法。以陆地棉组织培养过程中不同时期愈伤组织为材料,对RNA提取、PCR反应体系、银染条件等影响mRNA差异显示的关键因素进行优化试验,建立了一套适合棉花组织培养的mRNA差异显示体系。最终确定了优化体系(50μL)为:随机引物0.4μmol/L,锚定引物0.4μmol/L,dNTP 250μmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,Taq酶1.5 U,退火温度为39.3℃。利用优化后的体系对材料进行扩增,扩增产物特异性好、条带清晰、背景干净。该体系简便、快捷、灵敏、高效,可用于分离差异表达基因。 相似文献
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利用变性聚丙烯酰胺电泳和银染技术,检测了8个SSR位点在71份中国小麦育成品种（系）中的多态性,确定了各SSR位点上等位基因的大小。在71份小麦品种（系）中,共检测到等位基因75个,每对引物检测到的等位基因个数最少为6个（gwm186）,最多为15个（gwm174）,平均9.4个。PIC值最高为0.8739（gwm174）,最低为0.6552（gwm186）,平均为0.7968。仅利用少数几对高PIC值的SSR引物,能够将全部71份品种（系）区分开,供试材料间至少有一对等位基因的差异。并对SSR标记应用于小麦品种鉴定的可行性进行了讨论。 相似文献
77.
蛋白质凝胶电泳的高灵敏度染色法——复合银染 总被引：3，自引：0，他引：3
本实验以牛血清白蛋白为样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,然后用考马斯亮兰Ｒ－２５０和银染法分步染色。这种复合银染法的灵敏度比单独使用银染法提高约１０００倍,比单独使用考马斯亮兰Ｒ－２５０染色法提高约１０６倍。它在１ｍｍ厚的聚丙烯酰胺凝胶上至少可检测出５ｐｇ／ｍｍ２的蛋白质。在没有放射性防护设施的任何一个生物实验室中,采用复合银染法基本上能够达到或接近放射性标记检测的灵敏度。相比之下,它不仅省去了繁琐的各式各样的标记过程及其放射性污染,同时还具有很高的灵敏度,因此复合银染具有广泛的应用性。 相似文献
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2种方法银染的AFLP片段再扩增效果比较及改进 总被引：6，自引：0，他引：6
Bassam银染法和Sanguinetti银染法是AFLP标记最常用的检测方法.本研究比较这2种方法银染的AFLP条带再扩增效果的差异,发现Bassam法银染的AFLP片段再扩增效率达到100%,而用同样的PCR条件,sanguinetti法银染的AFLP片段不能被扩增,限制了Sanguinetti法在AFLP标记分析中的应用.为提高Sanguinetti法银染的AFLP片段再扩增效率,对Sanguinetti法银染的AFLP片段回收和再扩增条件进行了改进.通过增加Sanguinetti法显色后的胶板漂洗次数、延长漂洗时间、改变AFLP条带浸泡溶液、增加浸泡液体积和增加PCR循环次数,成功地将Sanguinetti法银染的AFLP条带的再扩增效率提高到100%,从而解决了San-guinetti银染法应用的限制因素. 相似文献
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