龙眼AFLP银染体系的建立与优化     

李冬波  朱建华  李鸿莉  黄凤珠  李江舟  潘丽梅 《安徽农业科学》2008,36(3):893-894,907

[目的]优化龙眼AFLP银染体系中的影响因素。[方法]以23份龙眼品种和2份龙眼近缘植物龙荔为试材,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系中的几个影响因素(DNA提取、酶切与连接、电泳与银染)进行研究,建立起龙眼AFLP银染分析体系。[结果]用紫外分光光度计检测样品DNA质量和浓度,发现提取的DNA吸光度A260/A280比值在1.8左右,A260/A230的比值大于2.0,说明所提取的DNA样品纯度较高,无蛋白质或盐类的污染。酶切与连接中采用37℃水浴5 h,然后转入65℃水浴2 h的方法能保证酶切充分,又能防止酶切过度。电泳和银染时用4℃预冷的显影液进行显影,可以降低显影速度。[结论]采用该技术体系得到的AFLP指纹式样清晰,重复性强,适宜用作龙眼品种鉴别和遗传多样性分析。  相似文献   

蜡梅AFLP-银染体系的建立与优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

周明芹  杨琴军  陈龙清 《华中农业大学学报》2007,26(3):394-398

为了建立蜡梅AFLP-银染的优化体系,采用EcoRI和MseI 2种限制性内切酶酶切组合,对该2种酶的用量、酶切时间、预扩增与选择扩增中的Mg2 浓度、Taq DNA聚合酶的用量、引物的浓度以及预扩增产物的稀释倍数等因素进行了多水平的筛选,同时探讨了温度及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的电流强度等因素对胶图的影响。结果表明:用5 U限制性内切酶酶切4 h便能在40μL的反应体系中完全切割500 ng的总DNA,酶切连接产物稀释10倍后在含有1.5 mmol/L Mg2 1、U Taq、预扩增引物E A和M C分别为40 ng的20μL反应体系中进行预扩增,将预扩增产物稀释30倍后在含有1.5 mmol/L Mg2 、0.6 U Taq、选择扩增引物E 3为30 ng、M 3为60 ng的20μL的体系中进行选择性扩增,能够得到质量比较好的AFLP胶图。此外,在进行PAGE电泳和硝酸银染色,将电泳的温度控制在50℃左右,电流控制在45~60 mA左右能提高胶图的质量。利用这种优化的反应体系,成功地评价了40个蜡梅基因型的遗传多样性,6对选择扩增引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性,它们分别是:E-AAC/M-CCC,E-ATC/M-CCC,E-AGA/M-CAG,E-AAA/M-CAC,E-ATA/M-CCA,E-ATT/M-CCA。  相似文献   

DNA指纹技术-AFLP的优化   总被引：6，自引：0，他引：6  

张春庆  杨凯  贾继增 《山东农业大学学报(自然科学版)》2002,33(1):89-92

ＡＦＬＰ(ａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ)技术自Ｚａｂｅａｕ和Ｖｏｓ 1 993年发明后 ,已经在分子标记的许多方面得到广泛应用 ,特别是在生物多样性、遗传作图和性状标记等方面研究较多 (ＡｎＶａｎｄｅｎＢｒｏｅｃｋｅ等 1 998;Ｊ.Ｚｈｕ等 1 998) [1 ,2 ] 。ＡＦＬＰ技术研究初期主要以同位素标记进行检测 (ＰｉｅｔｅｒＶｏｓ ,1 995 ) [3] 。由于同位素比较昂贵 ,也不太安全 ,运输也不便 ,目前越来越多的实验室正在使用荧光素标记检测和银染技术。荧光素标记检测同同位标记成本基本相近 ,但…  相似文献   

高粱微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的优化     

许丽  李玥莹  邹剑秋  林凤  许昕  陶思源 《安徽农业科学》2007,35(2):328-329

以高粱抗、感丝黑穗病3号生理小种部分品种(S95062B、7050B、2381R、LR625;622A、622B、矮4)为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行抗病基因的引物筛选.通过比较各因子对电泳体系的影响,建立了一个高粱微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系:电泳时间为92～105 min;银染温度为27.8～29.0 ℃;显色温度为32℃左右.  相似文献   

甘蔗AFLP分析技术体系的建立     

阙友雄林剑伟  陈天生许莉萍张木清  陈如凯 《勤云标准版测试》2007,(6)

【研究目的】为了建立甘蔗AFLP标记技术体系;【方法】本文通过对甘蔗抗、感黑穗病的杂交亲本CP84-1198和科5,以及根据其杂交后代的浸渍接种田间抗性鉴定结果所构建的抗、感黑穗病池的AFLP银染法分析;【结果】建立了甘蔗黑穗病抗性的AFLP分析实验体系,同时将AFLP-银染技术应用于甘蔗近缘植物斑茅抗旱胁迫及其对照材料的cDNA差别筛选,建立了一种mRNA差别显示技术体系。实验过程中还筛选出了四对能在抗、感亲本上扩增出特异条带的引物,以及一对在斑茅水分胁迫和对照中表现良好差异的引物,为下一步的实验工作的开展奠定了基础。【结论】通过本实验建立了甘蔗AFLP分析技术体系、变性聚丙烯酰胺凝胶的快速银染、凝胶简单保存以及聚丙烯酰胺凝胶中的特异条带的高效回收技术。  相似文献   

红麻种质资源遗传多样性和分子鉴定技术研究I．红麻AFLP—银染技术和种质资源指纹图谱的构建   总被引：4，自引：3，他引：4  

程舟 卢宝荣王琼  鲛岛一彦 陈家宽 《中国麻业》2003,25(2):53-58

通过摸索和优化实验条件，建立了红麻的AFLP—银染实验体系，获得了清晰的红麻种质资源AFLP指纹图谱。通常不同品种的红麻种质资源在形态特征上差异很小，但AFLP—银染技术检测到不同来源和不同品种的在红麻种质资源中存在较大的遗传差异。这一技术对红麻种质资源的鉴定和遗传多样性的检测非常有效。  相似文献   

甜菜SRAP扩增产物两种不同检测方法的比较     

吴则东  王华忠  韩英 《中国糖料》2010,(2):9-11

为了研究不同电泳及染色方法对甜菜SRAP扩增产物的影响,以6个甜菜二倍体品系为材料,比较变性聚丙烯酰胺凝胶电泳与非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对SRAP-PCR扩增产物用不同银染方法的检测效果进行了比较分析。结果显示:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳与变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的分辨率差异不大,但非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳具有灌胶简单易学,显色时间短,节省药品等特点,可以作为今后甜菜SRAP电泳及显色的首选方法。  相似文献   

邓恩桉国内引种和繁育技术研究进展   总被引：4，自引：0，他引：4  

宗亦臣  郑勇奇  常金财 《中国农学通报》2010,26(5):82-86

摘要：邓恩桉为引入国内较为耐寒的桉树树种,其材质优良、生长迅速,是我国南亚热带北部边缘地带大力推广的优良阔叶树种。目前国内生产和研究部门在引种驯化、优树选择、繁育技术等多个方面进行了试验与研究。本文综述了目前国内关于邓恩桉引种和繁育技术的研究进展,指出选育良种和工厂化无性繁育技术是推动邓恩桉良性发展的关键,旨在为国内的生产和经营者提供借鉴。  相似文献   

SSR标记小麦抗白粉病基因变性凝胶电泳体系的优化     

孙现军  郑炜君  徐军飞  柴守诚  瞿利英 《西北农业学报》2012,21(7):49-53

为寻找适合SSR标记定位小麦抗白粉病基因的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的理想体系。主要研究Arc+Bis占凝胶的质量浓度、Arc/Bis质量比、上样量、电泳电压及染色等因素对变性聚丙烯酰胺凝胶电泳效果的影响。结果表明电泳效果较好的体系为:凝胶中Arc+Bis 60g/L、m(Arc)∶m(Bis)=29∶1、上样量5μL(含φ=20%的6×loading dye)、1 500V恒压、强碱法染色。此变性凝胶电泳体系下得到的图谱较为清晰。  相似文献   

银染聚丙烯酰胺凝胶电泳技术体系的优化     

王露露  刘欣婷  周涛  王娟  贾东海  李强  侯献飞  石必显  顾元国  兰海燕 《新疆农业科学》2019,56(12):2312-2319

【目的】针对银染PAGE实验中常出现的背景颜色深、条带弥散、凝胶变形及条带不整齐等问题进行归纳总结并提出优化方法。【方法】以甘蓝型油菜基因组DNA为研究对象,通过PAGE电泳后银染并调整试剂配方、实验条件,筛选出适合实验的技术体系。【结果】甲醇浓度、电压稳定性、电泳温度、气泡等显著影响实验结果。甲醛浓度过高(1.25%)时,虽所需染色时间短,但凝胶背景深;甲醛浓度过低(0.001 25%)时,背景浅但条带淡,需要长时间染色;电压不稳定会造成条带弥散;电泳温度过高,导致凝胶变形,条带弯曲;凝胶中的气泡会扰乱DNA条带的形状;NaOH浓度在0.875%~1.375%,染色结果无明显差异。【结论】甲醛用量4 mL(1%)、保持稳定电压、在冰浴中电泳、制胶时及时赶走所有气泡,可得到凝胶背景浅、条带清晰且正常的结果。  相似文献