马立克氏病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定     

房德兴  刘作臣  殷震  夏咸柱  刘 《中国兽医学报》1989,(3)

以马立克氏病毒814株(MDV-814)作为免疫用抗原,建立了2个MDV特异性单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株—4A6、3D7。鉴定结果表明;两株细胞所分泌的McAb均为IgM类免疫球蛋白,具有MDVⅠ型病毒特异性,无中和反应特性和沉淀反应特性。利用两种McAb对国内标准强毒MDV-京1株进行鉴定,肯定其为MDV-Ⅰ型毒株。  相似文献   

体外免疫法制备单克隆抗体的研究     

陆芹章 《广西农业生物科学》1994,13(3):199-203

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用单克隆抗体识别出一种与马立克病肿瘤细胞相关的淋巴细胞表面抗原     

《畜牧兽医学报》1995,(2)

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PRRSV间接免疫荧光检测法的建立和应用   总被引：9，自引：0，他引：9  

彭长凌高崧  刘秀梵 《中国兽医科技》2005,35(4):256-260

以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株人工单独感染3头3周龄仔猪，并用PRRSV ATCC VR-2332株和猪圆环病毒2型(PCV2)联合感染2头3周龄仔猪，每日检查试验猪体温、采食情况及临床表现，并用HerdChek IDExx试剂盒测其血清抗体。PRRSV PCV2联合感染猪分别在感染后1、3周剖杀，PRRSV单独感染猪和健康对照猪分别在感染后1、2和3周剖杀，对全部试验猪的肺组织进行灌洗处理以获得肺泡巨噬细胞(PAM)．用PAM进行抹片，同时用肺组织直接进行触片做间接免疫荧光(IIF)检测。结果表明，用所获得的3株单克隆抗体均检测到人工感染猪肺组织中的PRRSV抗原。另外，用IIF检测7头临床疑似PRRS病猪的PAM抹片。其中沭阳县的2头猪呈现阳性反应；对这2头猪的肺组织进行病毒分离。在盲传到第4代时Marc-145细胞上产生明显的细胞病变，进一步证实用所获得的3株单克隆抗体检测临床样品的结果准确而可靠，且获得的3株单克隆抗体均可通过IIF用于检测猪肺组织中的PRRSV抗原。  相似文献   

鹅源新城疫病毒单克隆抗体的研制及其与不同NDV毒株的反应性   总被引：6，自引：0，他引：6  

胡顺林吴艳涛  刘文博刘玉良 刘秀梵 《中国兽医科技》2005,35(5):341-345

以鹅源新城疫病毒(NDV)作为免疫原免疫BALB／c小鼠，获得了5株具有HI特性的单克隆抗体，分别命名为2G5、3A4、385、6B1和8C5，其腹水HI效价分别为2^14、2^12、2^9、2^15和2^8。竞争ELISA结果表明，2G5、3A4、385和6B1在HN蛋白上所针对的表位属于同一抗原区，而8C5针对的表位为另一抗原区。将上述5株单抗与不同来源的NDV进行了HI排谱试验。结果显示，同一抗原区4株单抗的反应谱比较一致，而与另一抗原区单抗8C5的反应谱明显不同。5株单抗与鹅源NDV毒株的反应性较强，而与鸽源NDV毒株的反应性较弱。这5株单抗用HRP标记后再与不同单抗进行交叉夹心ELISA，得到了一个新的系统(2G5—8C5)。用该系统对NDV分离株做排谱试验。结果显示，该系统与鹅源NDV分离株的反应性较好，表明所建立的新系统可用于鹅源NDV的检测。  相似文献   

H9亚型禽流感病毒分型单克隆抗体的研制及初步应用   总被引：2，自引：0，他引：2  

王海燕  刘文博  胡顺林  孔晶  吴艳涛  文其乙  张评浒  高崧  张如宽  刘秀梵 《中国家禽》2004,26(10):21-22,27

禽流感(AI)是由A型流感病毒所引起的禽类(家禽和野禽)的感染和／或疾病综合征。禽流感病毒(AIV)的宿主谱很广，水禽类常可表现为显性感染，或为隐性感染而成为重要的传染源。不同亚型的AIV对家禽的致病性不同，H9亚型禽流感病毒主要引起肉鸡呼吸道症状和蛋鸡产蛋下降。目前禽流  相似文献   

鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

王洪海  苏敬良曹振 田克恭 《中国兽医科技》2004,34(11):13-17,F002

采用差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯鸭肠炎病毒(DEV)鸭胚成纤维细胞适应毒，免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA筛选，有限稀释法3次克隆，获得了2株稳定分泌DEV单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B8和2G8。经鉴定，2株单克隆抗体分别为IgM和IgG1亚类，腹水ELISA效价均达到1：10^7以上。以2G8单抗腹水为材料，采用间接免疫荧光抗体技术对DEV标准毒感染的鸭胚成纤维细胞进行检测，结果表明，用该抗体可特异性检出接毒后6h感染细胞中的DEV，且感染后48h免疫荧光强度最高，该单抗与细胞成分和鸭肝炎病毒无交叉反应。将杂交瘤细胞冻存3和6个月，复苏后仍能稳定分泌单克隆抗体。  相似文献   

出血性大肠杆菌O157eae-stx1/2B融合基因的构建和表达     

陈萍  刘军  祝令伟  孙洋  郭学军  齐翀  冯书章  郑明光 《中国兽医学报》2005,25(3):270-272

构建表达eae和stx1／2B的融合基因，克隆eae基因的C端280个氨基酸残基(Int280)基因部分，以正确地阅读框定向插入到含有stx1／2B融合基因的质粒，构建重组质粒，将其转化于BL21(DE3)，用IPTG进行诱导表达，经SDS—PAGE电泳检测，该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明：目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的50．67％。由于该融合蛋白由eae、stx1B、stx2B等三部分抗原组成，可刺激机体产生针对紧密素和StxB的抗体，在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。  相似文献   

猪伪狂犬病毒gB抗原侧向层析快速检测试纸条的研制     

王华俊  班付国  赵雪丽  谢彩华  闫若潜  王淑娟  马震原  王东方  王翠 《中国动物检疫》2018,35(12):85-90

为建立一种简便、快速、特异的猪伪狂犬病毒(PRV)gB抗原检测方法,利用单克隆抗体技术和侧向层析(LFA)技术,采用柠檬酸三钠还原法,制备颗粒大小为31.5 nm胶体金,再用胶体金标记纯化的抗PRV gB单克隆抗体10D4,在硝酸纤维素膜的质控带和检测带处,分别包被羊抗鼠IgG二抗和单克隆抗体6E9,组装成LFA方法通用胶体金层析试纸条。经测试,该试纸条最低能检测出1:640倍稀释的,TCID_(50)为1×10~(8.6)/0.1 mL的灭活PRV抗原,并与古典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)均无交叉反应,特异性良好;室温干燥密闭的条件下,该试纸条至少可保存10个月。结果表明,本研究建立的试纸条方法操作简单、快速、敏感、特异,易于判定,适合基层PRV的大面积普查和现场检测。  相似文献   

鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体的制备及鉴定     

《中国兽医杂志》2016,(12)

为制备鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体,以常规分子生物学技术从禽细胞系MDCC-MSB1克隆chIL-10基因,将去信号肽chIL-10基因亚克隆至原核表达载体p ET-30a,并在大肠杆菌中表达,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经4次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。将原核表达的GST-chIL-10融合蛋白作为包被抗原,利用间接ELISA筛选阳性克隆。阳性细胞株经3次亚克隆后,获得3株稳定分泌chIL-10抗体的杂交瘤细胞克隆,分别命名为4B2、4F3以及1E3。经间接ELISA测定,以上3株杂交瘤细胞腹水效价为1∶3.2×10~6,亲和力解离常数(Kd)分别为1.05×10~(-9)、5.01×10~(-10)以及7.59×10~(-10)。抗体重链类型分别为Ig G2a、Ig G2a以及Ig G1。经Western Blot试验证明,3株单抗均能特异地识别原核或真核表达的chIL-10蛋白,4B2、4F3单抗识别的抗原表位区域为chIL-10 N端的1 aa~52 aa,1E3识别的是N端的52 aa~102 aa。这些单抗为鸡IL-10的检测及生物学功能研究奠定了基础。  相似文献