猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用     

李建达  于江  张玉玉  任素芳  陈蕾  郭立辉  孙文博  陈智  王淞  刘俊珍  杜以军  李俊  杨灵芝  王金宝  吴家强 《中国畜牧兽医》2016,43(12):3107-3113

试验根据猪链球菌2型荚膜多糖（CPS）抗原设计CPS2J基因特异性引物,建立猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法的标准曲线为y=-3.073x+36.87,r=0.995,熔解曲线只有单一的特异峰。敏感性试验显示,该方法可以检测出模板最低浓度为1.0×10¹拷贝/μL,是普通PCR的10倍;特异性试验显示,对猪链球菌2型具有良好的特异性,能够区分其他血清型猪链球菌和其他细菌;重复性试验变异系数为0.37%~0.63%,均低于2.5%。临床检测显示该方法的敏感性明显高于常规PCR方法和细菌分离的方法。以上结果表明,本研究建立的方法敏感性高、特异性强、重复性好,有利于对猪链球菌2型的快速检测。  相似文献   

猪链球菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与靶位突变相关性     

芮萍  马增军  段玲欣  刘谢荣  倪静  沈建忠 《畜牧兽医学报》2011,42(4)

旨在了解猪链球菌对氟喹诺酮类药物耐药性与parC、gyrA基因突变的相关性,通过微量稀释法测定34株猪链球菌对4种氟喹诺酮类药物的MIC值,采用PCR方法扩增并测序分析了临床分离的猪链球菌对氟唪诺酮类约物10株耐药株和9株敏感株的parC和gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDRs).在氟喹诺酮类药物耐药菌株parC基因QRDRs发生Ser79→Phe、Arg 87→Leu的氨基酸突变,在4株高度耐药菌株gyrA基因QRDRs发生Arg66→Ser,Ser81→Arg氨基酸突变;当菌株对氟喹诺酮类药物敏感时,parC和gyrA基因的QRDR区均未有突变;而当MIC≥32 μg·L-1 时,parC的氨基酸发生了 Ser79→Phe的突变,同时发生gyrA氨基酸Arg66→Ser,Set81→Arg突变.结果表明,猪链球菌对氟喹诺酮类药物低水平类耐药是由parC单一位点突变引起,而高水平耐药是由parC和gyrA双位点突变引起.  相似文献   

猪三毛滴虫长春株不同染色方法的比较     

李伟志  李文超  王泽东  宫鹏涛  李建华  张西臣 《中国兽医学报》2011,31(9)

将从长春地区腹泻仔猪盲肠中分离得到的猪三毛滴虫用1640培养基短期培养后,使用碘染色法、瑞氏染色法、姬氏染色法、姬氏-瑞氏复染法、Weigere铁苏木素染色法和鞭毛染色法染色分别对其染色,观察不同虫体形态结构,并比较了不同染色方法的染色效果。结果显示,姬氏染色、瑞氏-姬氏复染和鞭毛染色法对猪三毛滴虫染色效果较好,可获得虫体形态完整、结构清晰的染色标本。  相似文献   

猪链球菌噬菌体SMP裂解酶在乳酸乳球菌中的表达及活性研究     

方圆子  王琰  孙建和 《上海交通大学学报(农业科学版)》2011,29(3):24-30

猪链球菌（Streptococcus suis,SS）烈性噬菌体SMP的宿主谱窄,制约了其临床应用潜力。研究发现,由噬菌体编码的裂解酶（LySMP）可有效拓宽其裂解谱。本研究以SMP基因组DNA为模板,扩增获得SMP裂解酶基因,将其克隆至质粒pNZ8148中,电转化乳酸乳球菌NZ9000,获得重组乳酸乳球菌NZ9000（pNZ8148-LySMP）,经Nisin诱导可表达LySMP。浊度递减实验结果显示,所表达的LySMP对7株猪链球菌2型菌株和猪链球菌9型菌株有较高的裂解活性,浊度下降可达30%~77%。表明利用NICE表达系统及pNZ8148表达载体在乳酸乳球菌中可实现猪链球菌噬菌体裂解酶的活性表达,为开展LySMP的应用研究提供了可能。  相似文献   

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)基因在猪链球菌不同血清型中的分布     

倪艳秀  周俊明  张雪寒  温立斌  吕立新  郭容利  俞正玉  茅爱华  何孔旺  陆承平 《江苏农业学报》2008,24(6)

参照GenBank上已发表的次黄嘌呤核甘酸脱氢酶（IMPDH）基因序列,设计引物,对34个猪链球菌不同血清型（缺12型）国际标准株进行了IMPDH基因的PCR检测及序列分析。结果表明：除17型、24型、32型、33型和34型外,其他29个血清型都为阳性,其核苷酸序列的同源性为88．3％～100．0％,所推导的蛋白质序列的同源性为94．7％～100．0％。为进一步研究IMPDH的生物学特性和功能奠定了基础。  相似文献   

Prevalence of Streptococcus suis Isolated from Clinically Healthy Sows in China   总被引：2，自引：0，他引：2  

ZHANG Chun-ping  NING Yi-bao  ZHANG Zhong-qiu  SONG Li  QIU Hui-shen  GAO He-yi  FAN Xue-zheng 《中国农业科学(英文版)》2009,8(5):638-642

Streptococcus suis is an important pathogen in pigs. Transmission of this pathogen is generally believed to occur between healthy carrier sows and their offspring, so the carrier status of S. suis in healthy sows is important for the control of S. suis infections in pigs, especially in suckling and growing pigs. In this study, the prevalence of S. suis isolated from clinically healthy sows in China was studied for the first time. A total of 1 043 tonsil samples were collected from clinically healthy sows from 10 regions in China from 2005 to 2007. Among the 421 S. suis isolates, 31 strains were identified as capsular type 2. The results showed that S. suis was widespread in swine herds in China with the carrier rates in different herds ranging from 19.5 to 93.9%. Overall, 40.4 and 3.0% of clinically healthy sows harbored S. suis and capsular type 2 in their palatine tonsils, respectively. Statistically significant differences of carrier rates of S. suis and capsular type 2 between the different farms were observed, which was independent of herd sizes and geographic distributions of different herds.  相似文献   

重庆市羊附红细胞体感染情况研究     

周作勇  聂奎  罗洪林  汤明  胡友兰  胡世君  唐成  於剑 《西南大学学报》2009,31(12)

参考GenBank登录的羊附红细胞体16S rRNA序列设计引物,建立检测羊附红细胞体16S rRNA的特异性PCR方法,对重庆市14个区县山羊进行附红细胞体感染的分子流行病学调查.结果表明:重庆市附山羊红细胞体感染率为16.1%;其中1周岁以下羊附红细胞体感染率为13.9%,低于1周岁以上羊附红细胞体感染率(17.0%).重庆黑山羊、波尔山羊、南江黄羊和板角山羊的附红细胞体感染率分别为15.9%,16.3%,16.6%和17.6%.  相似文献   

四川脑膜炎病例猪链球菌2型溶血素抗原表位富集区的原核表达     

王海丽  徐公义  葛长城  王长军  唐家琪 《中国兽医学报》2010,30(4)

对2005年四川资阳脑膜炎病例猪链球菌2型分离株ZYH33溶血素编码蛋白中包含多个抗原表位的第230～593氨基酸残基区域的基因片段进行扩增并克隆.基因片段经酶切处理后插入表达载体pQE-30的BamH Ⅰ和Sal Ⅰ位点之阃,构建融合表达质粒.转化宿主菌TG1经IPTG诱导后融合基因得到了表达,用猪链球菌2型菌体抗血清对表达的融合蛋白进行免疫印迹试验,分析融合蛋白的免疫反应性.试验结果提示该溶血素蛋白第230～593氨基酸残基区域可作为猪链球菌的诊断抗原,为基因工程疫苗的研制奠定基础.  相似文献   

猪链球菌2型山东强毒株的分离鉴定     

赵蕾  李书光  李坤林  吴立志  陈金龙  韩文瑜  沈志强 《中国兽医学报》2013,33(7)

对某养猪场发生呼吸道感染及神经症状的病猪脑组织进行了病原菌分离,对其优势菌进行菌落形态学观察、生化试验、PCR检测、药敏试验和毒株致病力试验.结果显示,成功分离到1株猪链球菌2型,其含有目前已知的mrp、sly、ef3种毒力基因,该菌株对昆明系小鼠、新西兰白兔具有一定的致病性,动物回归试验证实该菌株对断奶仔猪具有较强的致病性.  相似文献   

猪链球菌2型JX分离株的生物学特性   总被引：2，自引：0，他引：2  

马有智  方维焕  柯春林  张晓峰 《中国兽医学报》2003,23(4):326-328

从临床表现为脑膜炎、关节炎及败血症的发病猪分离到2株细菌，分别命名为JX02和JX03，经鉴定其形态、染色及培养特性均符合链球菌的特点，具α或β溶血，生化试验结果不稳定。用猪链球菌2型、1型和9型抗血清进行凝集试验，结果2株菌均能与猪链球2型抗血清凝集，其中1株菌对小鼠和家兔均有致病性，另1株菌只能致死家兔。PCR均能扩增2株菌的主要毒力因子基因。表明发病猪的病原不同于以往的C群链球菌，不是马链球菌兽疫亚种，而是属于R群的猪链球菌。  相似文献