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【目的】探究呼吸型传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)对蛋鸡免疫反应的影响及重组禽β-防御素(avian β-defensins,AvBDs)的抗病毒作用。【方法】试验将70只7日龄SPF白来航鸡随机分为2组,每组35只。攻毒组通过滴鼻点眼途径接种呼吸型IBV强毒(CK/CH/LSD/05I),对照组以相同途径接种等剂量灭菌PBS。定时观察临床症状14 d并记录,在攻毒后12 h、36 h、3 d、7 d和14 d 2组各随机选取5只鸡心脏采血处死,检测血清抗体水平并收集部分气管和肾脏进行组织病理学检测。采集法氏囊、脾脏、肾脏和气管,提取RNA,运用实时荧光定量PCR方法检测组织中IBV的病毒载量、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及信号转导分子、AvBDs基因表达量变化。将重组AvBD11和AvBD12转染鸡胚肾细胞(chicken embryo kidney,CEK)并在病毒感染细胞后6、12、24、36和48 h收取细胞上清和细胞用于提取RNA,通过实时荧光定量PCR方法检测病毒载量。【结果】感染呼吸型IBV强毒后,鸡出现轻微呼吸道症状,剖检无明显病理变化。在感染14 d后,鸡血清抗体水平转阳且阳性率为100%。实时荧光定量PCR结果显示,对照组均未检测到病毒,攻毒组仅在感染14 d后的气管中检测到病毒且病毒载量低。与对照组相比,攻毒组脾脏中TLR1、TLR5、AvBD9和AvBD12基因表达量在感染后7 d均显著升高(P<0.05),攻毒组法氏囊中TLR1、TLR2、TLR3、AvBD5和AvBD9基因表达量及气管中核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、NF-κB c-Rel、AvBD5、AvBD9、AvBD11和AvBD13基因表达量在感染14 d后均显著升高(P<0.05)。体外抗病毒结果显示,与转染空载体组相比,转染AvBD11的CEK细胞在感染24和48 h后病毒载量显著下调(P<0.05),细胞上清的病毒载量在感染48 h后显著下调(P<0.05);转染AvBD12的CEK细胞在感染12和24 h后病毒载量显著下调(P<0.05),细胞上清的病毒载量在感染12和48 h后显著下调(P<0.05),说明重组AvBD11和AvBD12在CEK细胞中具有抗IBV活性。【结论】呼吸型IBV强毒感染机体后增强了相关受体的基因表达和信号转导,上调了AvBDs基因表达,加强了机体免疫反应。重组AvBD11和AvBD12具有抗病毒作用,为无抗饲料的配制及研究提供了新思路。 相似文献
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几种中草药对慢性热应激下蛋鸡脂类代谢的影响 总被引:7,自引:0,他引:7
试验选用 5 9周龄 ,平均产蛋率为 80 %的海兰褐产蛋鸡 96只 ,随机分为 6个组 ,试验 1~ 3组分别添加 1%的女贞子 (LL)、五味子 (SC)和四君子汤 (SJZT)等中草药 ,试验 4组添加 10mg/kg的大豆黄酮 (DA) ,试验 5组添加5mg/kg黄霉素 ,基础日粮为对照组。研究上述中草药及DA对热应激下蛋鸡脂类代谢的影响 ,同时比较这几种中草药、DA和黄霉素的效果 ,试验为期 4周。鸡舍内平均温度为 (32± 0 .5 )℃ ,相对湿度为 5 0 %~ 70 %。结果表明 :①LL ,SC ,SJZT和DA显著提高蛋鸡产蛋率 (P <0 .0 5 ) ;②LL和SC能显著降低血清谷草转氨酶 (AST)活性 (P <0 .0 5 ) ,LL、SC和SJZT显著降低血清谷丙转氨酶 (ALT)活性 ;③LL、SC、SJZT和DA显著降低血清中甘油三酯 (TG)含量 (P <0 .0 5 ) ;④SC与SJZT显著提高血清中甲状腺素T3 水平。 相似文献
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中草药抗仔猪大肠杆菌性腹泻作用机理的研究 总被引:9,自引:0,他引:9
从中草药对大肠杆菌的体外抑菌活性、对热敏肠毒素LT所致结扎肠袢液体蓄积的拮抗作用、对抗药物性腹泻作用、减少炎性渗出及抑制肠蠕动加快等方面,初步探讨了大青叶、板蓝根、连翘、败酱草4 味中草药及其复方配伍抗仔猪大肠杆菌性腹泻的作用机理。结果表明板蓝根、连翘、败酱草等及其复方制剂对大肠杆菌O149K88均显示出不同程度的体外抗菌活性;将上述中药提取液加入到细菌培养液中与大肠杆菌一起培养,用所得培养物LT进行兔回肠结扎试验,均可显著或极显著地减少培养物上清液所致肠袢液体蓄积量(P<0 05,P<0 01);将败酱草提取液同LT一起注入结扎肠袢,可显著地减少肠袢液体蓄积量(P<0 05);复方组显著或极显著地降低了蓖麻油引起的腹泻发生率和腹泻频率(P<0 05,P<0 01);板蓝根极显著地抑制了小鼠小肠推进率(P<0 01);败酱草、板蓝根和复方组还可显著或极显著地抑制醋酸所致小鼠腹腔染料渗出(P<0 05,P<0 01)。上述试验结果表明:抑制病原菌的繁殖、拮抗热敏肠毒素的致泻作用、对抗药物性腹泻作用、减少炎性渗出及抑制小肠推进运动是治疗仔猪大肠杆菌性腹泻的重要机理,研究结果为临床应用中草药治疗仔猪大肠杆菌性腹泻提供了重要理论依据。 相似文献
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中草药对蛋雏鸡生长性能和免疫功能的影响 总被引:19,自引:0,他引:19
研究了中草药女贞子、五味子、四君子汤和六味地黄丸,以及甘露寡糖和黄霉素对蛋雏鸡生长性能、甲状腺素分泌和免疫机能的影响。试验选用294只1日龄海兰褐健康蛋公雏,随机分为7组,每组设3个重复,每重复14只。对照组饲喂基础日粮,试验组日粮分剐为:基础日粮 1%中草药、基础日粮 50mg/kg甘露寡糖、基础日粮 5mg,/kg黄霉素。结果表明,上述饲料添加剂对蛋雏鸡的生长性能和血浆T3和T4的含量以及T3/T4均无不同影响;与对照组相比,试验所用4种中草药均可显著提高血清抗新城疫抗体水平,而甘露寡糖与黄霉素作用不明显;与对照组相比,各试验组雏鸡脾淋巴细胞转化率均有所提高,其中女贞子组的转化率显著提高,表明本试验所用几种添加剂均有增强细胞免疫的作用。 相似文献
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几种中草药抗蛋鸡热应激作用分子机制的初步研究 总被引:13,自引:0,他引:13
试验选用59周龄海兰褐蛋鸡80只,随机分为4个处理组,试验1~3组分别添加1%的女贞子、五味子和四君子汤,试验4组为对照组。试验期为4周。研究这几种中草药对热应激状态下蛋鸡生产性能、抗氧化功能、内分泌以及HSP70基因表达的影响。鸡舍内平均温度为(32.0±0.5)℃,相对湿度为60%~70%。结果表明:(1)女贞子、五味子和四君子汤显著提高了热应激状态下蛋鸡的产蛋率(P<0.05),女贞子和五味子显著降低料蛋比(P<0.05);(2)女贞子、五味子和四君子汤能显著降低蛋鸡组织和血清脂质过氧化物含量;(3)女贞子和五味子能显著降低血清GOT和ALT活性(P<0.05),四君子汤显著降低血清ALT活性(P<0.05);(4)五味子和四君子汤极显著提高了血清中T3含量(P<0.01),女贞子、五味子和四君子汤显著降低高温条件下产蛋鸡血清中Cor含量(P<0.05);(5)女贞子、五味子和四君子汤显著提高肝脏HSP70基因表达(P<0.05)。由本试验结果可见,女贞子、五味子和四君子汤能通过增强热应激下蛋鸡脂质稳定性、调节内分泌以及提高HSP70基因表达等途径改善热应激下蛋鸡的生产性能,减轻热应激对蛋鸡的危害。 相似文献
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试验旨在探讨不同来源的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)诱导SPF鸡发病的免疫机制。选用140只1日龄SPF白来航鸡,随机分为4组,3组攻毒组通过滴鼻点眼途径分别接种鸡源IBV强毒株、鸡源IBV弱毒株和野鸡源IBV毒株3个毒株,对照组以同种方式接种等量灭菌的磷酸盐缓冲液。在感染后12 h、36 h、72 h、7 d和14 d,每组随机选取5只进行剖检,并分别采集法氏囊、肾脏和气管组织,剩余鸡用于观察临床症状、发病及死亡情况。应用实时荧光定量PCR检测攻毒后不同时间点采集的各组织中IBV的病毒载量、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及部分细胞因子(白细胞介素(interleukin,IL)和干扰素(interferon,IFN))表达量的变化。结果显示,感染不同来源IBV毒株之后仅鸡源IBV强毒株感染组SPF鸡出现抑郁、翅膀下垂、甩头等典型的临床症状,且在感染后5~10 d共有7只死亡,死亡率为20%。病理剖检发现,感染鸡源IBV强毒株的鸡肾脏肿大、尿酸盐沉积和有花斑样病变,而感染野鸡源IBV毒株、鸡源IBV弱毒株和对照组的鸡无明显的眼观病变。实时荧光定量PCR结果显示,在鸡源IBV强毒株组的法氏囊、肾脏和气管3个组织中均检测到病毒。对照组和野鸡源IBV毒株组中均未检测到病毒,鸡源IBV弱毒株组只在部分组织中检测到病毒。在感染后72 h,鸡源IBV强毒株组与其他各组相比,TLR1、TLR2、TLR3、TLR5、TLR7和TLR15基因在法氏囊中的表达量均显著升高(P<0.05),IL-6和IFN-β参与更强烈的抗病毒免疫反应;在感染后7 d,鸡源IBV弱毒株组与其他各组相比,肾脏中TLR2、TLR3、TLR15、TLR21、IL-6和IL-18基因表达量均显著升高(P<0.05)。野鸡源IBV感染后36 h法氏囊组织中IFN-γ基因表达量显著上调(P<0.05)。综上所述,3个IBV毒株中仅鸡源IBV强毒感染引起SPF鸡典型临床发病症状与可视组织病变,且可提高SPF鸡组织中免疫相关因子的基因表达量。本研究结果揭示,不同来源的IBV对SPF鸡的不同致病性与其感染诱导的免疫反应不同有关。 相似文献
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鸭β-防御素4cDNA的克隆、表达及其抑菌活性的初步分析 总被引:1,自引:1,他引:0
本研究旨在克隆与表达鸭β防御素4(AvBD4)基因及测定其生物学特性,并检测其在鸭脏器组织中的分布.采用RT-PCR方法从鸭法氏囊组织中扩增到鸭AvBD4,其cDNA大小为171 bp,编码56个氨基酸.经同源性分析,鸭AvBD4与鸡AvBD4的氨基酸序列同源性最高,达73.2%.将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-duck AvBD4.将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃进行诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,重组鸭AvBD4蛋白的相对分子质量约为32 ku,与预期大小一致.该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性,结果显示,重组鸭AvBD4蛋白具有广谱的抗菌活性,对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用.在高盐离子条件下,重组鸭AvBD4蛋白仍具有抑制金黄色葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌的作用.此外,该重组蛋白的溶血活性极低.运用实时荧光定量PCR法检测到该基因在鸭组织器官中表达局限,仅在盲肠扁桃体、脾脏和法氏囊中表达. 相似文献
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