IGF-1调控RBM3表达抑制低温应激诱导牦牛卵丘细胞凋亡   总被引：1，自引：0，他引：1  

潘阳阳  王萌  芮弦  王立斌  何翃闳  王靖雷  马睿  徐庚全  崔燕  樊江峰  余四九 《中国农业科学》2020,53(11):2285-2296

【目的】探索动物机体遭受低温应激及细胞冷冻过程中胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor, IGF-1)与RNA结合基序蛋白3(RNA-binding motif protein 3, RBM3)之间的作用关系,及IGF-1参与哺乳动物细胞抑制低温损伤的机制。【方法】体外培养牦牛卵丘细胞,采用实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot, WB )和免疫荧光技术检测不同浓度（0、50、100、200 ng·mL ^-1）IGF-1和低温应激（30℃、25℃）对RBM3表达影响。卵丘细胞经最佳浓度IGF-1(100 ng·mL ^-1)和对照组(0 IGF-1)作用30 h后,低温（30℃、25℃）应激8 h,比较RBM3表达水平。评估在低温应激组、100 ng·mL ^-1 IGF-1处理组和100 ng·mL ^-1 IGF-1+RBM3抑制剂处理组,卵丘细胞25℃应激8 h后凋亡水平差异,并从基因和蛋白水平检测3组卵丘细胞中凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达水平。【结果】 (1) IGF-1作用卵丘细胞后RBM3基因和蛋白的表达水平显著上升 (P<0.05),其在100 ng·mL ^-1 IGF-1处理组最高,免疫荧光检测显示100和200 ng·mL ^-1 IGF-1处理组卵丘细胞胞核和细胞质均可检测到RBM3,而0和50 ng·mL ^-1处理组,RBM3仅定位在细胞质。(2) 卵丘细胞经受低温应激时,RBM3的表达水平显著增加,但其在30℃和25℃应激处理组差异不显著;100 ng·mL ^-1 IGF-1作用卵丘细胞30 h后,其再次接受25℃、8 h低温应激,卵丘细胞中RBM3的表达水平显著高于低温应激前未经IGF-1处理卵丘细胞中RBM3的表达水平,且该处理组卵丘细胞胞质和胞核均可检测到RBM3。(3) 25℃应激后,100 ng·mL ^-1 IGF-1处理组卵丘细胞的凋亡率为(15.94±2.03)%,显著低于其在未经IGF-1处理组和100 ng·mL ^-1 IGF-1+RBM3抑制剂处理组中卵丘细胞的凋亡率,两者分别为(25.86±1.09)%和(20.14±2.65)%,在100 ng·mL ^-1 IGF-1处理组Bcl-2的表达水平显著高于其余两个处理组(P<0.05),而Bax的表达水平显著低于其余两个处理组 (P<0.05)。【结论】RBM3参与牦牛卵丘细胞低温应激调控,IGF-1可调控其在低温应激中的表达水平,从而降低低温诱导的卵丘细胞凋亡。本研究为揭示IGF-1和RBM3参与动物机体或细胞免受低温损伤的分子机制提供了关键信息,为体细胞和生殖细胞冷冻技术的提高提供了理论依据。  相似文献   

妊娠期和分娩前后牦牛胎盘组织形态学变化及细胞凋亡的研究     

韩小红  樊江峰  于艺腾  何翃闳  马悦  余四九  崔燕 《农业生物技术学报》2018,(10)

牦牛(Bos grunniens)具有典型的子叶型胎盘,在妊娠过程中经历了从形成、生长发育到成熟的变化,是妊娠期连接母体和胎儿的纽带,发挥着营养物质和代谢废物交换、激素分泌等重要的功能。为探讨细胞凋亡与胎盘不同时期主要生理功能之间的相互关系,本研究采集4~8岁分别处于正常妊娠期、分娩前后牦牛的胎盘组织,将其组织制成石蜡切片并进行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)染色,观察妊娠各阶段胎盘结构的变化;通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口及末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL)技术和4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)染色技术观察和分析胎盘组织细胞凋亡的情况。结果显示:妊娠期牦牛胎盘的基本结构在形成过程中处于不断变化的状态,怀孕45 d前后时已形成典型的上皮绒毛膜型胎盘结构;随着胎儿的发育,胎儿绒毛分支并深入母体隐窝中,双核滋养细胞在该结构中的数量也逐渐增多。子宫隐窝上皮在妊娠6个月前后时开始出现退行性变化,如细胞空泡化,整个隐窝上皮到分娩前基本消失,细胞凋亡现象存在于整个妊娠期牦牛胎盘组织中。胎儿绒毛上皮、母体隐窝上皮是TUNEL阳性细胞主要的分布场所,而子宫肉阜基质在妊娠早期少有凋亡细胞存在。随着胎儿的发育,母体隐窝上皮和胎儿绒毛上皮中的TUNEL阳性细胞也逐渐增多,且母体部分明显低于胎儿部分。胎儿绒毛上皮中的阳性细胞数在分娩前显著升高并在分娩后达到最大。本研究从组织学水平上对胎盘发育过程中的形态学变化和凋亡特征进行研究,研究结果为进一步解决牦牛生产过程中出现的如流产等问题提供一定的理论依据。  相似文献   

HSP70在牦牛肠道中的分布与变化规律     

廖博  崔燕  杨雪  何俊峰  宋亮丽  杨晓晴  刘鹏刚 《畜牧兽医学报》2018,(8)

为了探索HSP70在牦牛肠道组织中的分布与变化规律,选择6头份健康成年(3~6岁)牦牛的肠道组织,采用免疫组织化学(IHC)、蛋白免疫印迹(WB)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HSP70在牦牛十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠组织中的分布与变化规律。免疫组织化学结果显示,HSP70在牦牛小肠的黏膜层、黏膜下层和肌层中均有表达,其中小肠黏膜上皮的柱状细胞呈强阳性表达,杯状细胞未见表达;小肠腺的肠腺细胞和肌层的平滑肌细胞也呈阳性表达,阳性反应主要分布于阳性细胞的细胞质和细胞核。HSP70在大肠中的定位表达与小肠相似,在大肠壁黏膜层、黏膜下层和肌层三层结构中也均有表达,其阳性反应主要位于黏膜上皮和固有层内散在分布的结缔组织细胞中,而固有层内大肠腺细胞仅在细胞核有表达,细胞质呈阴性。蛋白免疫印迹和免疫组化积分光密度值分析得出,从小肠的前端到大肠末端,HSP70的表达呈先增高后降低的趋势,其中在盲肠中的表达量达到峰值,且盲肠和结肠中HSP70的相对蛋白表达量极显著高于其他肠段(P0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,HSP70mRNA在盲肠中的相对转录量最高,分别是十二指肠、空肠、回肠、结肠和直肠的2、1.68、1.06、1.43和1.52倍。本试验显示牦牛肠道中HSP70呈广泛性阳性反应,HSP70基因和HSP70蛋白在牦牛小肠和大肠中具有不同的表达模式,揭示了HSP70在牦牛小肠和大肠中所发挥生物学作用的异同,为HSP70在反刍动物组织中的表达和功能研究提供了资料。  相似文献   

LRP6和VEGFR2在牦牛肺的分布     

马俊兴  何俊峰  崔燕  张倩  刘鹏刚 《畜牧兽医学报》2018,(7)

旨在探究LRP6和VEGFR2在不同年龄段牦牛肺组织中的表达和定位,以及两者对牦牛肺低氧适应性结构形成和可能的调控作用。选取新生(1~7日龄)、半岁(5~6月龄)、成年(3~6岁)和老年(7~10岁)健康牦牛肺组织样品各5头份,采用酶联免疫吸附试验、Western-blot和免疫组织化学方法对不同年龄的牦牛肺组织中LRP6和VEGFR2的表达量和准确分布位置进行研究。结果显示:LRP6和VEGFR2在初生和半岁牦牛组之间的表达量均差异不显著(P0.05),初生、半岁与老年组牦牛的表达量均差异显著(P0.05),成年和老年牦牛组之间的表达量差异显著(P0.05)。LRP6主要分布于肺内支气管和其分支的上皮细胞以及肺泡Ⅱ型细胞,其表达较强;少量分布在肺血管内皮细胞和管壁平滑肌细胞,表达较弱;VEGFR2主要分布于肺内支气管及其分支的上皮细胞、管壁平滑肌细胞和肺泡隔细胞以及肺泡Ⅰ型细胞中,其表达较强;在肺血管内皮细胞和平滑肌细胞内也有分布,但表达较弱。综上表明,LRP6和VEGFR2不仅在不同年龄段的牦牛肺组织中表达量具有差异性,而且它们对高原环境下牦牛肺适应低氧适应性的结构形成和维持可能的调控具有重要的意义。  相似文献   

FSH对牦牛卵母细胞EGF、EGFR表达及其细胞凋亡的影响   总被引：1，自引：1，他引：0  

何翃闳  潘阳阳  张慧珠  李秦  王萌  崔燕  樊江峰  余四九 《畜牧兽医学报》2018,(9)

旨在研究促卵泡素(FSH)对牦牛卵母细胞体外成熟,以及对表皮生长因子(EGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达影响和与细胞凋亡的关系。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度FSH(终浓度分别为0、2、5、10μg·mL~(-1)),体外成熟培养后,运用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)和免疫荧光染色技术检测EGF、EGFR表达情况,采用qRT-RCR和蛋白免疫印迹法检测Bax、Bcl-2表达变化。结果表明:1)成熟培养液中加入FSH可提高COCs成熟率,当成熟液中FSH为5μg·mL~(-1)时,成熟率最高,达到76.84%,显著高于其他组(P0.05);2)随着FSH浓度的增加,EGF和EGFR表达逐渐升高,其中在5μg·mL~(-1) FSH组中,EGF和EGFR的表达最高,显著高于其他组(P0.05),而在10μg·mL~(-1)FSH组中,EGF和EGFR的表达水平降低;EGF主要位于卵丘细胞中,而EGFR在卵丘细胞和卵母细胞均有表达;3)随着FSH浓度的增加,Bax和Bcl-2的表达显示出明显的逆向模式,Bax的表达水平逐渐降低,Bcl-2的表达水平逐渐升高,在5μg·mL~(-1) FSH组中Bax的表达量最低,Bcl-2的表达量最高,而在10μg·mL~(-1)FSH组中,Bax的表达水平升高。综上表明,在牦牛卵母细胞体外成熟过程中,FSH提高了卵母细胞发育能力,诱导EGF和EGFR表达,而且可能通过调控Bax、Bcl-2等凋亡相关因子的表达,抑制卵母细胞凋亡。  相似文献   

山羊支原体、革兰氏阳性杆菌、附红细胞体混合感染的实验室诊断     

冯杰  崔燕  余四九  夏先林  主性 《贵州畜牧兽医》2018,(4)

为查明某养殖小区饲养山羊的死亡原因,采集13份病羊的血清、2头病死羊的内脏病料和血涂片进行实验室检测诊断。结果:布鲁氏杆菌虎红平板凝集试验阳性率为0%(0/13);羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体阳性检出率为0%(0/13);山羊痘病毒血清免疫抗体阳性检出率为61.5%(8/13);山羊支原体阳性检出率为100%(2/2);姬姆萨染色镜检可见边缘不整齐的红细胞;细菌分离培养、革兰氏染色镜检出革兰氏阳性杆菌,分离细菌对氟苯尼考、利福平、多西环素敏感。结果表明:养殖小区山羊死亡原因是由山羊支原体、革兰氏阳性杆菌、附红细胞体混合感染所致。  相似文献   

水利水电工程建设管理中施工规划设计的价值探究     

崔燕 《农业科技与信息》2018,(16)

本文对水利水电工程的施工规划及管理进行了剖析,指出了施工过程中需注意的事项,阐明了施工规划的意义及水利水电工程的作用和价值。  相似文献   

幼年牦牛不同部位皮肤毛囊的组织学结构及TGF-β2与HIF-1α差异性表达分析     

张虔  崔燕  余四九  廖博  邹胜南  白雪峰  Seth Yaw Afedo  赵鹏飞  龙敏 《畜牧兽医学报》2021,52(11):3224-3233

旨在探究幼年牦牛皮肤毛囊的组织学结构和TGF-β2及HIF-1α对幼年牦牛皮肤毛囊生长发育的影响，选取10头健康幼年牦牛，采集其颈部、背部、胸部、腹部、小腿部、腋下及阴囊皮肤组织，制作石蜡切片后，采用HE和Sacpic染色，对各部位皮肤组织中毛囊进行观察和计数，并筛选出多毛及少毛部位。利用qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学法对TGF-β2和HIF-1α在幼年牦牛多毛皮肤和少毛皮肤进行定位与定量的初步研究。结果表明，幼年牦牛皮肤的毛囊分布于真皮层，常与汗腺及皮脂腺伴行，毛髓质及内根鞘结构不完整。Sacpic染色可见毛囊内根鞘为红色，外根鞘为苍绿色，结缔组织鞘为蓝绿色。腹部皮肤的毛囊数量最多[（2 085±15）个·cm^-2]，阴囊数量最少[（158±15）个·cm^-2]。免疫组织化学结果显示，TGF-β2及HIF-1α主要表达在表皮层、毛囊外根鞘、皮脂腺及汗腺。TGF-β2在阴囊和腋下的mRNA转录水平和蛋白质表达水平均显著高于腹部和背部。HIF-1α在腹部的mRNA转录水平和蛋白质表达水平均显著高于其他三个部位。幼年牦牛的毛囊处于退行期，在腹部数量最多，背部次之，阴囊最少；TGF-β2和HIF-1α在不同部位皮肤中的表达水平存在显著差异，为进一步研究TGF-β2和HIF-1α对牦牛皮肤毛囊生长发育的影响提供理论依据。  相似文献   

灌区水利工程建设管理存在的问题及对策探析     

崔燕 《农业科技与信息》2019,(10)

灌区水利工程为农业灌溉提供了基础设施保障,促进农业增产增收。灌区水利工程建设管理中需要对各类施工资源进行协调,使施工效率和质量兼具,充分发挥水利工程作用和价值。本文结合灌区工程概况,简要分析了灌区水利工程建设管理存在的问题,提出了加强灌区水利工程建设管理的对策。  相似文献   

成年牦牛心室肌微血管床的形态学特征     

贺延玉  崔燕 《中国兽医科技》2007,37(4):338-341

对6头健康成年牦牛颈静脉放血致死并取出心脏，经左右冠状动脉同时灌注甲醛碳素墨水，再经40g／L多聚甲醛水溶液充分固定，取心室组织块石蜡包埋、切片，光学显微镜观察，显微镜测微尺测量并照相。结果显示，牦牛心室微循环床中微动脉的直径小于100μm，以分叉状或梳状发出分支，走行多弯曲，呈蛇行状或螺旋状。终末微动脉管径均小于15μm。牦牛的毛细血管直径小于10μm。毛细血管之间形成H形或Y形的广泛吻合。吻合的毛细血管主要有3种不同的来源。牦牛微静脉的直径小于300μm，呈树根样结构。一条微静脉由若干条不同来源的毛细血管结合而成。牦牛心室肌中存在着动静脉吻合。  相似文献