胶孢炭疽菌及两种疫霉菌对苯酰菌胺的敏感性与β-微管蛋白氨基酸突变的相关性分析     

邓维萍  梅馨月  杨敏  陈磊  毕扬  蔡萌  王海燕  阿普前  何霞红  朱书生 《农药学学报》2012,14(2):143-150

选择对多菌灵、乙霉威和苯酰菌胺具有不同敏感性的胶孢炭疽菌 Colletotrichum gloeosporioides、辣椒疫霉菌 Phytophthora capsici 及恶疫霉菌 P.cactorum,采用菌丝生长速率抑制法及氨基酸序列比对法分析了其 β-微管蛋白氨基酸突变与敏感性的关系。结果表明,胶孢炭疽菌对苯酰菌胺、多菌灵和乙霉威的敏感性与 β-微管蛋白198位或200位氨基酸突变有关:对多菌灵敏感、对苯酰菌胺和乙霉威不敏感的胶孢炭疽菌 β-微管蛋白氨基酸198位为谷氨酸(E),200位为苯丙氨酸(F);对多菌灵已产生抗性而对苯酰菌胺和乙霉威不敏感的菌株,其 β-微管蛋白氨基酸200位由苯丙氨酸(F)突变为了酪氨酸(Y);对多菌灵高抗、对苯酰菌胺和乙霉威敏感的菌株其 β-微管蛋白氨基酸198位由谷氨酸(E)突变为了丙氨酸(A)。辣椒疫霉菌和恶疫霉菌对苯酰菌胺敏感,对多菌灵和乙霉威均不敏感。检测疫霉菌菌株 β-微管蛋白未发现氨基酸突变,但发现其 β-微管蛋白氨基酸在196~200位与胶孢炭疽菌差异较大,这可能是导致苯酰菌胺仅对疫霉菌有抑制效果的原因。  相似文献   

胶孢炭疽菌及两种疫霉菌对苯酰菌胺的敏感性与     

邓维萍  梅馨月  杨敏  陈磊  毕扬  蔡萌  王海燕  阿普前  何霞红  朱书生 《农药学学报》2012,(2)

选择对多菌灵、乙霉威和苯酰菌胺具有不同敏感性的胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides、辣椒疫霉菌Phytophthora capsici及恶疫霉菌P. cactorum,分析其β-微管蛋白氨基酸突变与敏感性的关系。结果表明,胶孢炭疽菌对苯酰菌胺、多菌灵和乙霉威的敏感性与β-微管蛋白198位或200位氨基酸突变有关：对多菌灵敏感,对苯酰菌胺和乙霉威不敏感的胶孢炭疽菌β-微管蛋白氨基酸198位为谷氨酸（E）,200位为苯丙氨酸（F）;对多菌灵已产生抗性而对苯酰菌胺和乙霉威不敏感的菌株,其氨基酸200位由苯丙氨酸（F）突变为了酪氨酸（Y）;对多菌灵高抗,对苯酰菌胺和乙霉威敏感的菌株其氨基酸198位由谷氨酸（E）突变为了丙氨酸（A）。辣椒疫霉菌和恶疫霉菌对苯酰菌胺敏感,对多菌灵和乙霉威均不敏感。检测疫霉菌菌株β-微管蛋白未发现氨基酸突变,但发现其β-微管蛋白氨基酸在196~200位与胶孢炭疽菌差异较大,这可能是导致苯酰菌胺仅对疫霉菌有抑制效果的原因。  相似文献   

Genetic Variations Among Liriomyza sativae Blanchard Populations Indicated by β-tubulin Gene Sequences     

ZHENG Fu-shan DU Yu-zhou WANG Li-ping LU Ya-juan LU Zi-qiang 《中国农业科学(英文版)》2007,6(5):580-585

To analyze the genetic differentiation of the host- and geo-populations of Liriomyza sativae Blanchard, the β-tubulin gene of 5 host-populations and 6 geo-populations of L. sativae was sequenced. Subsequently, the sequences were analyzed by biosoftware DNAStar and MEGA, and the phylogenetic trees constructed. The results obtained by the two softwares were similar, that is, the sequences of β-tubulin gene were more than 98% homologous, among the host- and geo-populations of L. sativae, with only 8 variable sites, but no insertions and deletions were detected. It seems that differentiations in β-tubulin gene among the host- and geo-populations of L. sativae are related to the hobby to hosts and the geographical distributions, respectively.  相似文献   

小麦叶片原生质体微管骨架的免疫荧光标记及其影响因素   总被引：10，自引：0，他引：10  

党磊  王冬梅  刘娟  王智炘 《河北农业大学学报》2002,25(3):23-27

以小麦叶肉细胞原生质体为材料，利用免疫荧光标记并辅以共聚焦激光扫描显微镜检术（Confocal la-ser scanning microscopy,CLSM)观察，对含有叶绿体较多的小麦叶肉细胞微管骨架的标记方法及其影响因素进行了探索。结果表明，来自未完全展开叶片的原生质体中，微管的数量多且骨架的排列方式较复杂，而从完全展开的叶片获得的原生质体中，微管数量很少，实验中发现，外加Ca^2 离子浓度的增加，使微管的稳定性降低，并确定了导致微管解聚的Ca^2 浓度。  相似文献   

研究植物胚囊中微管的PEG切片法的改进   总被引：1，自引：0，他引：1  

朱洪亮  刘向东  卢永根  徐是雄 《华南农业大学学报》2001,22(4):52-54

经改良的PEG切片法，操作简单易行，观察结果清晰。水稻子房经固定、脱水、包埋、切片、真空粘片法粘片、荧光抗体标记等处理后，在激光共聚焦扫描显微镜下观察胚囊中的微管并拍照。传统粘片法（如多聚赖氨酸粘片法）中的粘片剂阻碍了抗体与微管的结合（致使微管不易被标记出），本文提出的真空粘片法从根本上解决了这一问题，这一新的粘片方法的采用，是使PEG切片法的观察效果获得了较大改进的主要原因，真空粘片法的一个最主要特点是不需要粘片剂，该法解决了由粘片剂所引起的一系列问题，适用于既需粘片、而粘片剂又影响以后操作的情况，有较大的推广价值。  相似文献   

微管及其配件水力性能测试与分析研究（上）     

马存奎  李永顺 《节水灌溉》1996,(3):18-24

作者对Φ１．０～Φ８．０ｍｍ的８种规格的微管和７种规格的微管件进行了水力性能测试，得到一系列经验公式及有关参数，可供微灌工程设计和进一步研究参考。  相似文献   

β_1-和β_2-微管蛋白基因在赤霉病菌抗多菌灵中的作用     

曾凡松  尹合兴  史文琦  汪华  杨立军  龚双军  张学江  向礼波  喻大昭 《中国农业科学》2015,48(4):695-704

【目的】揭示β1-微管蛋白基因(β1-tub)和β2-微管蛋白基因(β2-tub)在赤霉病菌(Gibberella zeae)对多菌灵的抗性过程中所起的作用。【方法】采用PCR克隆测序法测定Js449(EC50=7.911μg·m L-1)、Js462(EC50=6.515μg·m L-1)、Js484(EC50=5.031μg·m L-1)、Js506(EC50=8.455μg·m L-1)和Js519(EC50=6.280μg·m L-1)等5个多菌灵抗性菌株的α-、β1-、β2-、γ-tub序列,并与敏感菌株HG-1(EC50=0.552μg·m L-1)进行比对。采用实时荧光定量PCR(q PCR)测定β1-tub和β2-tub在多菌灵胁迫下的抗性菌株Js506中的相对表达量。构建β1-tub和β2-tub的超量表达载体,分别在HG-1中表达。运用split PCR获得含有潮霉素磷酸转移酶基因和目标基因的融合片段,并对Js506进行原生质体转化,通过同源重组获得β2-tub的敲除体和互补体。对菌株Js506、HG-1及其突变体分别进行多菌灵敏感性测定、菌落生长观察和致病力测定。【结果】基因比对结果表明,5个抗性菌株的α-、β1-、γ-tub基因序列与敏感菌株的一致。对β2-tub序列比对结果表明,Js449、Js462和Js506菌株的第167位氨基酸由苯丙氨酸(Phe)变为酪氨酸(Tyr)。Js484菌株的第200位氨基酸由苯丙氨酸(Phe)变为酪氨酸(Tyr)。Js519菌株的第198位氨基酸由谷氨酸(Glu)变为谷氨酰胺(Gln)。5μg·m L-1多菌灵能诱导Js506菌株的β1-tub表达量显著上调(P0.05)。10μg·m L-1的多菌灵对Js506菌株的β2-tub表达量影响不显著。β1-tub的超量表达使HG-1突变体的EC50增加至2.839μg·m L-1,抗药性显著增强(P0.05)。β2-tub超量表达突变体的抗性水平与野生型菌株无显著差异。对Js506菌株的β2-tub进行敲除试验,分别获得了2个转化体(△β2tub-Js506-1、△β2tubJs506-2),经潮霉素抗性筛选、PCR和Southern杂交验证,确认2个转化体均不含有β2-tub。与野生型菌株Js506相比,敲除体△β2tub-Js506-1(EC50=0.078μg·m L-1)和△β2tub-Js506-2(EC50=0.072μg·m L-1)对多菌灵均表现为超级敏感,且菌落生长变慢,致病力显著下降(P0.05)。对△β2tub-Js506-1进行互补转化获得了2个互补体,β2tub-Js506-C1(EC50=7.521μg·m L-1)和β2tub-Js506-C2(EC50=7.243μg·m L-1),2个互补转化体均使敲除体△β2tubJs506-1基本恢复了抗性、菌落生长速率和致病力。【结论】5个赤霉病菌菌株对多菌灵的抗性与β2-tub的第167、198、200位密码子突变有关,与α-、β1-和γ-tub序列的突变无关。β1-tub在多菌灵胁迫下诱导表达,且β1-tub的超量表达能增强赤霉病菌对多菌灵的抗性。β2-tub是小麦赤霉病菌对多菌灵抗性所必需的,β1-tub和β2tub均能影响赤霉病菌对多菌灵的抗性。  相似文献   

柑橘黑点病菌(Diaporthe citri)快速分子检测技术     

曾雅婷  熊桃  李红叶 《浙江农业学报》2022,34(7):1457

柑橘黑点病是一种严重危害柑橘生产的世界性真菌病害,快速及时地检测出柑橘黑点病病菌(Diaporthe citri)对柑橘黑点病早期诊断和科学防控具有重要的实践意义。本研究基于β-微管蛋白序列,设计柑橘黑点病病菌的特异引物对,基于常规PCR和SYBR Green I实时荧光定量PCR(qRT-PCR)建立了快速分子检测体系,对柑橘黑点病病菌的菌丝和典型带病叶片进行检测验证。结果发现,在常规PCR检测中,该引物可从柑橘黑点病病菌获得244 bp的特异性扩增片段,检测灵敏度达0.78 ng·μL^-1;在实时qRT-PCR中,该引物也只有在柑橘黑点病病菌中获得唯一的产物吸收峰,检测灵敏度达0.35 ng·μL^-1。利用PCR检测体系对发病黑点叶片进行检测,结果显示,常规PCR的阳性检出率为30%,qRT-PCR的阳性检出率为60%,表明qRT-PCR比常规PCR的灵敏度更高。因此,研究设计的柑橘黑点病病菌特异性引物,以及所建立的常规和实时qRT-PCR检测方法具有速度快、特异性强等特点,可以用于柑橘黑点病病菌的分子鉴定,对病害诊断具有参考价值。  相似文献   

海南油茶炭疽病病原鉴定及生物学特性研究     

朱辉  覃伟权  付登强  戚志强 《广东农业科学》2015,42(16):55-54

为了明确海南油茶炭疽病的病原,对病原菌的形态学特征、致病性、分子序列和生物学特性进行研究。结果表明,病原菌分生孢子长卵圆形或圆柱形,大小为13.0~20.3μm×3.7~6.2μm;基于转录间隔区和β-微管蛋白基因部分序列的系统进化分析结果表明,病原菌与胶孢炭疽菌标准菌株处在进化树的同一分支,其自展支持率达100%;碳源、氮源、温度和p H值对病原菌生长的影响差异均显著,病原菌生长的最佳碳、氮源分别为海藻糖和蛋白胨,最适生长温度和p H值分别为28℃和6。据此将海南油茶炭疽病的病原菌鉴定为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Sacc.。  相似文献   

大棚草莓微管滴灌好处多     

王崇福 《农友》2001,(11):15-15

大棚草莓应用微管滴灌技术，经笔者在安徽省广德县近几年的实践证明，具有操作简便，节水、省工、省时、增产、效益高等优点，有条件的果农可以试用。  相似文献