GFP标记拟南芥突变体sad2微管及F_2代幼苗的检测与分析     

陈炳佑  武仁文  刘广志  侍福梅 《西北农业学报》2015,24(10):131-136

为观察拟南芥突变体sad2(sensitive to ABA and drought)的微管列阵,以拟南芥突变体sad2-1和sad2-2为母本,转GFP(green fluorescence protein)-α-tubulin野生型拟南芥为父本杂交,并对F2代幼苗进行叶表型分析、卡那霉素抗性筛选和荧光镜检。表型分析显示,拟南芥sad2-2突变体与转GFP-α-tubulin的杂交F2代幼苗叶片出现有毛和无毛2种性状,二者分离比为2.81∶1。卡那霉素抗性筛选显示,部分F2代幼苗在卡那霉素培养基上出现白化死亡,大部分可正常生长。荧光镜检显示,卡那霉素阳性苗的子叶出现GFP绿色荧光。此外,共聚焦显微镜观察显示,拟南芥突变体子叶细胞微管列阵清晰可见,且sad2-1和sad2-2两种突变体的微管比野生型更加致密,但sad2-1和sad2-2两突变体间无明显差异。说明:采用杂交法将GFP-α-tubulin引入突变体来分析微管是一种简便可靠的方法,且sad2基因影响细胞微管列阵,可用于sad2基因与微管功能的进一步研究。  相似文献   

纤维素合酶的组成以及蛋白间的相互作用     

孔雪  张翠霞  暴帅 《安徽农业科学》2013,(25):10239-10241,10243

活细胞成像技术极大地加深了人们对纤维素沉积分子机制的理解.微管细胞骨架参与影响了纤维素合酶复合物的正常分布及其组织和动力学特征.随着纤维素合酶互动蛋白1（CSI1）的最新研究发现,纤维素微纤丝和微管间的关系十分紧密.CSI1是首个与纤维素合酶复合物相关联的非CESA蛋白,这给人们今后研究纤维素合酶开辟了许多新的机会.文中综述了纤维素合酶复合物（CSCs）的组成及纤维素蛋白间的相互作用.  相似文献   

小麦幼苗微管结合蛋白MAP65的鉴定和基本特性的研究(英文)     

马爱珍  程娜娜  韩榕 《农业科学与技术》2013,(1):26-29

[目的]探讨小麦幼苗MAP65体外对微管聚合的影响。[方法]以"临优2018"小麦幼苗为材料,通过免疫印迹实验鉴定小麦幼苗中微管结合蛋白MAP65的存在,并利用紫外吸收法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法探究了小麦幼苗MAP65体外对微管聚合的影响。[结果]免疫印迹实验表明在小麦幼苗中存在微管结合蛋白MAP65;共沉淀实验结果显示,MAP65蛋白可与微管结合,具有一般微管结合蛋白的基本特性;浊度法实验显示MAP65对微管聚合的影响与其浓度相关,低浓度促进微管聚合,高浓度则抑制微管聚合。[结论]为进一步研究MAP65蛋白的生理功能提供了重要的依据。  相似文献   

毛竹微管蛋白的分子特征及PeTUA3的功能     

朱成磊  李彩丽  李晓佩  史晶晶  高志民 《林业科学》2020,56(7)

【目的】微管蛋白是植物细胞骨架的重要组成部分,在植物细胞分裂与生长、细胞形态维持、细胞内物质运输和细胞壁的生物合成等过程中均发挥着重要作用。为全面了解毛竹微管蛋白的分子特征,开展了毛竹微管蛋白全基因组鉴定与分析,并初步研究了Pe TUA3基因的功能,以期为揭示微管蛋白在毛竹生长发育过程的作用提供参考依据。【方法】采用生物信息学的方法开展毛竹中微管蛋白基因的全基因组分析,利用转录组数据和实时荧光定量PCR技术分别分析微管蛋白基因的组织表达模式及其随笋高度增加的表达变化,通过在拟南芥中异位表达及表型观察初步研究Pe TUA3基因的功能。【结果】在毛竹基因组中共获得18条微管蛋白基因序列,编码蛋白具有完整的保守结构域,蛋白长度为430～634 aa,分子量为48.31～69.89 k Da。在与水稻、拟南芥微管蛋白构建的系统进化树中,被聚类到2个亚家族(TUA和TUB),且毛竹各微管蛋白成员与水稻的亲缘关系更近,这些基因分别命名为Pe TUA1-Pe TUA6和Pe TUB1-Pe TUB12。亚细胞定位预测显示PeTUAs均定位在细胞质中,而PeTUBs均定位于细胞核中。基于转录组数据的基因组织特异性表达分析表明,不同微管蛋白基因在毛竹7个不同组织中的表达量存在着一定的差异,如Pe TUA3、Pe TUA6、Pe TUB2和Pe TUB3在各个组织中均有较高的表达,而Pe TUA2和Pe TUB12在各组织中表达量均较低。实时荧光定量PCR结果显示,随着毛竹笋高度的增加,6个TUA亚家族成员基因的表达均呈现上调趋势,而TUB亚家族成员基因中有8个呈现上调趋势,4个表现为波动变化,表明它们在笋的不同发育阶段可能发挥着不同的作用。在拟南芥中正义表达Pe TUA3促进了转基因植株的生长,尤其是对主根的伸长有明显促进作用,而转反义Pe TUA3则抑制转基因植株的生长,主根生长明显受到抑制。【结论】从毛竹中鉴定了6个TUA基因和12个TUB基因,各基因的分子特征存在着一定的差异,并且各基因在毛竹不同组织以及不同发育阶段笋中呈现出不同的模式,说明它们在不同组织以及同一组织的不同生长发育阶段可能发挥着不同的功能;过量表达Pe TUA3能够影响转基因拟南芥的生长,说明Pe TUA3对毛竹的快速生长可能具有重要的作用。  相似文献   

微管的相关研究     

黄小丹 《畜牧兽医科技信息》2012,(7):8-9

微管(microtubule,MT)是由微管蛋白组装成长管状细胞器结构,存在于所有的真核细胞中,微管外径的平均值为24 nm,对较高的压力、较低的温度和秋水仙素很敏感。微管在细胞内呈网状和束状分布,并连同其它蛋白质组装成神经管、轴突、纤毛、鞭毛、中心粒、基粒、纺锤体等结构,参与维持细胞形态、细胞运动和细胞分裂。微管由两种类型的微管蛋白亚基组成,即α-微  相似文献   

香蕉叶片微管免疫荧光染色方法的建立与应用     

乔飞  曹晶潇  江雪飞  徐立 《热带作物学报》2012,33(8):1409-1411

以香蕉幼叶为材料,通过优化间接荧光免疫染色流程,建立了香蕉微管显微观察方法.结果如下:在微管稳定缓冲溶液中加入37g/L的多聚甲醛,10 mL/L的Triton x-100,10 mL/L的甘油以及10 mL/L的DMSO作为固定液,固定60 min,可以保持微管骨架的原有形态;水解细胞壁30 min,可使抗体有效通过细胞壁.进一步用镰刀菌酸处理香蕉叶片后发现:微管骨架出现解聚和断裂,呈现出典型的抗性响应特征,暗示微管骨架参与了香蕉和枯萎病病原镰刀菌的互作.  相似文献   

稻水象甲卵巢内β1 微管蛋白基因cDNA全长的克隆及定量表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

于奎峰  李红亮  杨璞  崔旭红  祝增荣  商晗武 《中国水稻科学》2010,24(6):575-580

 利用cDNA末端快速扩增技术（RACE）和反转录聚合酶链式反应（RT PCR）分别对中国的孤雌生殖型和美国的两性生殖型稻水象甲卵巢内β1 微管蛋白基因进行了克隆,获得的cDNA全长分别为1727 bp和1730 bp,均包含1344 bp的完整开放阅读框(ORF),编码447个氨基酸,理论分子量约50 kD,等电点4.54。同源性分析表明,克隆的β1 微管蛋白基因与其他昆虫的β微管蛋白基因在氨基酸水平上是高度同源的,相似性介于95%~100%。荧光定量PCR分析表明,β1 微管蛋白在孤雌生殖型稻水象甲卵巢内的表达量（3.14×107 copies/μL±0.66×107 copies/μL）显著高于两性生殖型稻水象甲（508×106 copies/μL± 047×106 copies/μL）。推测该基因的差异表达对于稻水象甲孤雌生殖过程中纺锤体的组装具有重要意义。  相似文献   

微管骨架在辣椒-黄瓜炭疽病菌非寄主互作中的作用     

姚晶  禹坷  陈艳利  马青 《植物病理学报》2013,43(2):136-142

 以辣椒“A11”和黄瓜炭疽病菌（Colletotrichum orbiculare）组成的非寄主互作体系为研究对象,利用组织化学方法研究了辣椒叶片微管骨架解聚后接种黄瓜炭疽病菌,对抗病反应相关的乳突、H₂O₂和过敏性坏死反应的影响以及黄瓜炭疽病菌在非寄主辣椒上的侵入状况,揭示微管骨架在辣椒-黄瓜炭疽病菌非寄主互作中的作用。结果表明,微管骨架解聚显著抑制了乳突的形成,H₂O₂的积累也明显减弱,使黄瓜炭疽病菌能成功侵入辣椒细胞,表明微管骨架参与了辣椒的非寄主抗病性反应,微管的聚合在辣椒非寄主抗病性中具有重要的作用。  相似文献   

抗微管除草剂对玉米单倍体加倍效果研究   总被引：6，自引：3，他引：3  

慈佳宾  李继竹  刘振库  尹日成  姜龙  郑雷雷  梁晓斐  杨伟光 《玉米科学》2012,20(5):10-14

用氟乐灵、拿草特两种抗微管除草剂和秋水仙素在不同处理部位、不同处理时间和浓度条件下对玉米单倍体进行单倍体加倍效率研究。结果表明,3种药剂用浸种法处理玉米单倍体的加倍率以氟乐灵在浓度80μmol/L处理20 h最高(35.7%),用浸芽法处理的加倍率以拿草特在浓度60μmol/L处理24 h最高(24.8%),用浸根法处理的加倍率以氟乐灵在浓度40μmol/L处理15 h最高(16.8%)。因此抗微管除草剂氟乐灵对玉米单倍体加倍效果最好。  相似文献   

扩展莫尼茨绦虫β微管蛋白基因的克隆及序列分析     

夏党荣  王涛  薄新文  马勋  何延华  康立超  王新华 《新疆农业科学》2012,49(2):324-329

[目的]从扩展莫尼茨绦虫中克隆β微管蛋白基因,进行序列测定和生物信息学分析,为进一步研究该基因的功能奠定基础.[方法]构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获得其全长cDNA序列;采用生物信息学等技术对该cDNA序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导、核苷酸和氨基酸同源性比较以及蛋白二级结构的初步预测.[结果]获得了1个扩展莫尼茨绦虫新基因——β微管蛋白基因,全长1571 bp,编码444个氨基酸,与日本血吸虫的β微管蛋白氨基酸序列具有78.6;的同源性.编码蛋白的理论分子量为49.6 ku,等电点为4.96;1 -4位氨基酸MREI为β微管蛋白转录后调控信号,140～146位GGGTGAG存在一个微管蛋白标志信号片段,在99～106位和391～410位存在两个典型的β微管蛋白保守区;亚细胞定位分析其为细胞的骨架蛋白.[结论]获得了扩展莫尼茨绦虫β微管蛋白基因的全长cDNA序列,为该基因功能的实验性鉴定工作奠定基础.  相似文献