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51.
【目的】建立悬铃叶苎麻植物AFLP反应体系,为其无融合生殖的分子标记及构建遗传图谱提供技术支持。【方法】以悬铃叶苎麻叶片为材料,采用改良CTAB法提取基因组DNA,并对酶切与连接体系、预扩和选扩程序进行探索,建立一套优化的AFLP反应体系。【结果】通过对EcoRⅠ+NNN/MseⅠ+NNN的64对引物组合的筛选,获得了清晰的选择性扩增图谱和多态性较高的引物组合。【结论】经多次重复验证,建立的优化体系可用于悬铃叶苎麻的AFLP分析。 相似文献
52.
"高效RAPD"技术的初步研究及其PAGE检测 总被引：4，自引：0，他引：4
对经典的单引物RAPD技术进行优化．确立了适合于多条引物(2～4条)同时参与同一反应的“高效RAPD”体系及扩增运行条件,不但实现了1次操作检测更多位点、使多样本量RAPD检测变得相对省时省力,同时还可节省珍贵的实验样品。本文采用了具有高分辨能力的非变性PAGE-银染检测方法对RAPD产物进行检测,使一般经琼脂糖电泳检测仅能分辨出不足10条谱带的RAPD产物可分辨出15～30条清晰可见谱带。非变性PAGE-银染检测方法操作安全,银染后的凝胶可长期保存。 相似文献
53.
对变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行比较,探讨建立简便、快速、安全、可靠、经济、效率高、毒害低的应用于玉米遗传多样性分析的SSR标记方法。结果表明,用2对SSR引物对6份玉米自交系基因组DNA进行扩增,将扩增产物在变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)上电泳,银染后微卫星扩增产物在二者上的电泳结果存在差异。在变性胶中微卫星扩增产物目的条带清晰,易于鉴定;在非变性凝胶中表现有较多的非特异性条带,但目的条带很明亮,容易看出来,不影响实验结果。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳带型清晰准确、结果可靠、经济快速,能真实地揭示玉米自交系间的遗传多样性,是玉米种质类群划分的有效分子标记方法。 相似文献
54.
本研究以海南南渡江野生唇?(Hemibarbus labeo)为材料,采用腹腔注射植物血球凝集素(PHA)、秋水仙素,肾细胞直接制片法,分析唇?染色体核型和银染(Ag-NORs)。结果显示,唇?的二倍体染色体数目为50,核型公式为2n=18m+12sm+12st+8t,其染色体臂数(NF)为80,未发现异型染色体,Ag-NORs出现在第5对和第11对同源染色体的短臂末端。鮈亚科鱼类染色体进化综合分析结果表明,唇?具有鮈亚科鱼类的原始核型。本研究不仅补充了唇?的细胞遗传学数据,为研究鮈亚科/?属鱼类的分类与进化提供了数据资料,也为唇?的种质资源保护、种质改良等工作奠定了理论基础。 相似文献
55.
56.
为建立适用于研究香菇(Lentinula edodes)分化中基因表达差异的银染差异显示方法,以香菇突变株fbd1及其出发菌株98411的菌丝体和子实体为材料,采用Trizol法提取总RNA,优化了反转录和PCR扩增中5项反应参数,再经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和银染显示差异条带.试验结果表明,适宜分析香菇mRNA差异的反转录体系中RNA投入量为0.5～1 μg、dNTP浓度为20 μmol/L,PCR扩增反应MgCl2、dNTP和Taq酶分别为2 mmol/L、200 μmol/L和1.0 U,此条件下,目标条带清晰且重复性好. 相似文献
57.
差异显示PCR (differential display PCR,DDRT-PCR)技术是快速分离差异表达基因的强有力工具,但是其繁琐的染色程序和较高的假阳性率给研究者带来了不便.为了提高DDRT-PCR技术的效率和试验结果的清晰度和重复率,本研究以济宁青山羊皮肤组织的总RNA为试验材料,对影响DDRT-PCR的因素,如:反转录条件、反应体系和染色条件进行了优化研究.通过对染色程序和温度等染色条件的反复对比试验,建立了快速银染技术,得到了十分清晰的DDRT-PCR电泳图谱.快速银染技术既缩短了染色时间,又可以得到清晰的电泳图谱. 相似文献
58.
mRNA差异显示技术是分析差异表达基因的强有力的工具。本实验针对油菜差别显示体系筛选优化,最终获得了差别显示体系。研究结果为:RNA模板在2μg,反转录产物用量为1.5μl时,可以扩增出较多且清晰的条带;PCR退火温度在40℃扩增条带清晰。该体系用于甘蓝型油菜低磷胁迫前后基因差异表达研究稳定可靠。 相似文献
59.
60.
本文以山西省栽培的硬粒豌豆品种为实验材料，对豌豆个体之间细胞核仁的数目Ａｇ—ＮＯＲ的位置变化，及在实验过程中所观察到的染色体分化程度进行了研究。结果表明，该品种在问期核可见到１—４个核仁，核仁的大小随染色体的浓缩程度发生变化，在不同类型的细胞中，银染核仁的面积分布不同，说明ＲＮＡ与蛋白质的比例有颇大的变动。试验还证明，染色体标本的制备技术对银染的分化程度有较大的影响，只有在适当的条件下才能促使银染的正反应。 相似文献