常见耐药基因多重PCR方法的建立及用于禽致病性大肠杆菌耐药性监测     

张耀东  朱红  AFAYIBO Doss&#  h Jean Ap&#  tre  王瑶  易正飞  信素华  陶程琳  李涛  祁晶晶  田明星  丁铲  于圣青  王少辉 《畜牧兽医学报》2020,51(12):3193-3198

本研究旨在建立β-内酰胺类、四环素类、氨基苷类、酰胺醇类、磺胺类抗菌药物耐药基因的多重PCR检测方法，用于耐药基因的快速检测。根据GenBank公布的上述5类抗菌药物的耐药基因序列，设计17对特异性引物。通过优化PCR体系和反应程序，建立4组耐药基因（cat+floR+tetB+tetC；dfrA12+sul2+sul1+bla_CTX-M+bal_TEM-1；aac3+aph3+aadA1+strB；tetA+cmlA+strA+sul3）的多重PCR反应体系。然后，检测多重PCR方法的特异性和敏感性。利用建立的多重PCR方法检测42株禽致病性大肠杆菌的耐药基因，同时，检测其耐药性，比较分析耐药基因和耐药表型之间的相关性。结果显示，建立的4组多重PCR体系可有效扩增出17个耐药基因片段，测序结果表明特异性较好。敏感性结果表明，4组多重PCR体系的菌液敏感性分别为10³、10⁴、10⁴和10⁵CFU。禽致病性大肠杆菌分离株的耐药基因多重PCR和单重PCR检测结果一致，其携带的耐药基因和耐药表型的符合率为92.86%。本研究建立的耐药基因多重PCR方法能简便、快速地检测常见的耐药基因，可用于耐药基因的传播、流行调查。  相似文献   

禽网状内皮组织增生症病毒p30蛋白的表达及检测     

张石磊  于圣青  陈鸿军  丁铲 《中国兽医寄生虫病》2011,19(6):15-19

根据禽网状内皮组织增生症病毒SNV株的前病毒基因组cDNA序列设计并合成1对引物,以pPB101质粒为模板,通过PCR扩增获得该病毒p30基因片段。将PCR产物克隆入表达载体pCold-HF中,构建的原核表达质粒pCold-p30转化BL21（DE3）菌,经IPTG诱导,p30蛋白呈现可溶性表达。用表达产物免疫6周龄BALB/c小鼠,制备p30抗体,经Westernblot和间接免疫荧光法检测,结果发现,原核表达的SNV株p30蛋白具有良好的免疫原性。  相似文献   

滑液支原体的危害或将增大     

于圣青 《中国家禽》2013,35(17):37

每两年举办一次的世界禽病大会是全球禽病研究同行公认的科技盛会,刚刚结束的第18届世界禽病大会吸引了1 288名代表参会,再次证明了她的魅力。大会围绕当前全球关注的禽产品安全、营养与家禽健康、细菌性呼吸道疾病、肿瘤病与马立克氏病等热点话题,邀请了16位国际著名专家作主旨报告,同时邀请142位专家学者进行  相似文献   

犬结核SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立     

王伟  陈鸿军  刘佩红  王水明  周锦萍  于圣青  丁铲 《中国兽医寄生虫病》2009,17(2)

本研究基于IS1081基因建立了鉴定犬结核的SYBR Green荧光定量PCR方法.在最佳反应条件下反应效率为1.09,获得的标准曲线相关系数R值达0.999 5,标准曲线的线性范围达到1～1×107拷贝8个数量级,最低可检测到约10个目的拷贝,即31.4 fg DNA.根据溶解曲线分析,扩增产物中无引物二聚体的影响,说明所设计引物特异,退火温度合适.这表明本研究建立的SYBR Green荧光定量方法灵敏度高、定量范围广.利用该方法对临床样品进行检测,结果发现:与结核杆菌分离培养方法比较,符合率为85%.240份犬猫鼻拭子中150份被检测为阳性,这说明犬猫鼻腔中分枝杆菌携带率很高.  相似文献   

鸭疫里默氏杆菌血凝素基因的克隆、表达及其蛋白的定位分析     

屠晶  胡青海  于圣青  丁铲  韩先干  朱寅玉  王小兰  苗双  卢凤英 《中国预防兽医学报》2012,34(9):692-696

为研究鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer)血凝素蛋白的功能,本实验克隆表达了鸭疫里默氏杆菌血凝素基因,并对其蛋白定位进行了分析。根据鸭疫里默氏杆菌CH3株血凝素基因序列设计一对特异性引物,采用PCR扩增不同血清型鸭疫里默氏杆菌的血凝素基因,进行序列测定与分析。结果表明其血凝素基因全长1 059 bp,编码352个氨基酸。不同血清型鸭疫里默氏杆菌血凝素间的氨基酸同源性为94.1%～100%,与黄杆菌3519-10株血凝素的氨基酸同源性为68.0%～68.9%。采用表达的血凝素蛋白免疫鼠血清和鸭抗鸭疫里默氏杆菌阳性血清对血凝素在细菌中的定位分析表明,鸭疫里默氏杆菌血凝素可能不是一种膜蛋白,而是存在于胞浆中的一种蛋白。  相似文献   

血清1型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制     

王小兰  胡青海  童永亮  韩先干  丁铲  于圣青 《中国预防兽医学报》2012,34(4):313-316

为研究血清1型鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer,RA)的灭活油乳剂疫苗,本研究将10株血清1型RA的临床分离株经腿部肌肉注射7日龄雏鸭进行动物体内复壮,结果表明所有被测菌株均具有较强的毒力,易感雏鸭致死率100％.对其中3株RA分离株CH3、WJ4和YL4的毒力测定结果表明其半数致死量(LD50)分别为2×108 cfu、3.25×108 cfu和2.37×106 cfu.选取5株RA分离株分别制备灭活油乳剂疫苗,分别于5日龄和18日龄对樱桃谷鸭进行两次免疫后,免疫鸭能够产生高水平的RA特异性抗体,对2 LD50 WJ4或CH3攻毒产生很好的保护效果,其中由CH3、CQ3和YXb12制备的灭活油乳剂疫苗对攻毒的保护率高达100％.  相似文献   

血清2型鸭疫里默氏杆菌制苗用菌株的筛选及灭活油乳剂疫苗的研制     

王小兰  胡青海  韩先干  丁铲  于圣青 《中国动物传染病学报》2012,(1):54-58

血清2型鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)分离株经雏鸭体内复壮、回收、鉴定后,选取其中2株细菌NJ3和Yb2进行毒力测定,结果表明其半数致死量分别为5.62×107CFU和1.07×105CFU。选取5株细菌制备灭活油乳剂疫苗后免疫鸭,并进行攻毒保护试验。结果表明不同菌株制备的疫苗均可使免疫鸭产生高水平的RA特异性ELISA抗体和攻毒保护力,但是攻毒保护性差异较大,NJ3免疫后的攻毒保护性最好。抗体检测及攻毒保护实验表明NJ-3是较理想的制苗用菌株。  相似文献   

鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈文静  韩先干  何亮  胡青海  于圣青 《中国兽医寄生虫病》2010,18(2):34-40

鸭致病性大肠杆菌病是危害养鸭业的最为重要的细菌性传染病之一。本研究分离鉴定了65株鸭致病性大肠杆菌,并对其O血清型、耐药谱以及毒力相关基因进行了检测。结果表明：大肠杆菌O78,O2和O1为主要流行血清型,各占分离株的75％、11％和5％。对15种常规抗菌素或药物的药敏试验结果表明：100％的分离株对利福平和红霉素耐药;94％以上的分离株对头孢噻吩等10种抗菌素或药物耐受;70％以上的分离株对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、壮观霉素和头孢噻肟敏感。对14种可能的大肠杆菌毒力相关基因的检测结果表明：ompA、pfs和luxS三种基因高度保守,在分离菌株中的检出率为100％;iss、iuCD、tsh、fimC、cvaC和iroC基因的检出率达到72％以上,为重要的鸭致病性大肠杆菌毒力相关基因。  相似文献   

鸡毒支原体烯醇化酶的可溶性表达及检测     

沈欣悦  陈鸿军  陈丹清  于圣青  丁铲 《中国兽医寄生虫病》2010,18(3):26-31

烯醇化酶参与支原体糖酵解、细胞黏附及免疫调节等多种生命活动,对其开展功能研究有助于了解鸡毒支原体黏附及感染机制。本研究通过重叠PCR克隆获得鸡毒支原体烯醇化酶,经原核表达获得可溶性融合蛋白rMGEno,将纯化产物免疫BALB/c小鼠后制备获得特异性多抗。通过Western blot和ELISA检测发现,烯醇化酶在鸡毒支原体不同强弱毒株中高度保守,表达产量高,在鸡毒支原体参试各毒株的细胞膜中均有分布。这一表达产物的成功制备为深入研究鸡毒支原体烯醇化酶的生物学功能奠定了基础。  相似文献   

与传染性支气管炎病毒血清型有关的S1亚基氨基酸差异的定位   总被引：3，自引：0，他引：3  

于圣青 《中国家禽》1994,(4):30-31

研究发现３个不同血清型的４株英国毒株，其Ｓ１氨基酸的差异仅为２～３％。其Ｓ１核苷酸序列与３个荷兰分离物（Ｄ２０７、Ｄ２７４和Ｄ３８９６）也非常相似，７个分离物中两个间的最大差异是４．４％。氨基酸差异主要位于成熟Ｓ１亚单位的１９～１２２和２５１～３４７残基上。  相似文献