基因枪介导法向小麦导入黄花叶病毒复制酶基因的研究   总被引：22，自引：1，他引：22  

徐惠君  庞俊兰  叶兴国  杜丽璞  李连城  辛志勇  马有志  陈剑平  陈炯  程顺和  吴宏亚 《作物学报》2001,27(6):688-693

筛选出适宜小麦转化的优良基因型扬麦158和扬麦10号.以扬麦158幼胚愈伤组织为受体,利用基因枪介导法将含有小麦黄花叶病毒复制酶基因(WYMV-Nib8)的pubiNib8质粒转入了小麦.T0代经PCR扩增分析,获得了14株含WYMV-Nib8基因的转化植株,转化率为0.43%.T1、T2代跟踪分子检测和T2代田间病毒抗性鉴定结果表明,获得了4个抗WYMV的转基因  相似文献   

转Rs-AFP2基因小麦的分子分析及其纹枯病抗性     

路妍  张增艳  任丽娟  刘宝业  廖勇  徐惠君  杜丽璞  马鸿翔  任正隆  井金学  辛志勇 《作物学报》1963,35(4):640-646

Rs-AFP2属于r-硫堇类抗菌肽,主要通过形成离子通道直接破坏细胞来杀灭病原菌。本研究通过基因枪介导法结合对目标基因的分子检测,证明已将外源Rs-AFP2基因转入小麦推广品种扬麦12中。通过逐株抗纹枯病接种鉴定、PCR、PCR-Southern blot、Southern blot和 RT-PCR/荧光定量RT-PCR(Q-RT-PCR)分析,对转Rs-AFP2基因小麦T₁至T₄代植株跟踪检测。结果表明,Rs-AFP2在转基因小麦中能够稳定遗传,以单拷贝整合到小麦基因组中,遗传方式符合孟德尔遗传规律,并能在转录水平上表达。对转Rs-AFP2基因小麦的抗病性、主要农艺性状以及Rs-AFP2表达活性分析结果表明,与受体扬麦12相比,Rs-AFP2表达活性高的转基因小麦植株对纹枯病抗性有明显提高,其抗病性可以遗传,而主要农艺性状没有明显差异,证明可以利用Rs-AFP2基因和基因工程途径创制抗纹枯病小麦新种质。  相似文献   

羊源多杀性巴氏杆菌重组酶聚合酶扩增诊断方法的建立     

刘昂  程逸文  安琪  张振兴  李彬  陈杰  陈巧玲  杜丽  满初日嘎  王凤阳  陈思 《中国畜牧兽医》2021,48(10):3752-3760

为建立适用于羊源多杀性巴氏杆菌的重组酶聚合酶扩增（RPA）诊断方法,本研究依据前期测序鉴定的羊源多杀性巴氏杆菌KMT1基因序列构建pET-28a （＋）-KMT1质粒标准品。设计基于RPA技术的特异性引物及RPA荧光探针,建立实时荧光RPA方法的最适反应体系。采用10倍梯度连续稀释的质粒标准品检测该RPA方法的敏感性并绘制相关性曲线;以10种不同菌株的基因组DNA为模板验证方法的特异性;用感染多杀性巴氏杆菌的山羊及小鼠组织样品对方法的可靠性进行验证。结果显示,本试验建立的实时荧光RPA方法最适反应温度为39 ℃,最佳引物为KMT1-Fe1,灵敏度达100拷贝/μL,检测下限为10拷贝/μL。与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、绿脓杆菌、产酸克雷伯菌、布鲁氏菌S2株和鲍曼不动杆菌均无交叉反应。对13个组织样本进行检测,阳性率为76.9%,与实时荧光定量PCR检测结果的符合率达92.3%。综上所述,本研究建立的羊源多杀性巴氏杆菌实时荧光RPA方法具有特异性强、灵敏度高、可靠、快速便捷等特点,适用于多杀性巴氏杆菌的临床分子诊断。  相似文献   

结球绿菊苣温室秋冬茬高效栽培     

杜丽红  杜丽 《西北园艺》2005,(7):26-27

  相似文献   

玉米秸秆发酵基质对辣椒育苗效果的影响   总被引：4，自引：0，他引：4  

牛爱书  杜丽  周延伟 《中国农技推广》2007,23(7):39-40

以发酵玉米秸秆为材料,以草炭与蛭石2:1(体积比)基质为对照,研究了玉米秸秆发酵基质与蛭石不同配比的复合基质对辣椒育苗效果的影响,分析了辣椒幼苗形态指标、壮苗指数。结果表明:如果要采用发酵玉米秸秆作基质原料,选择玉米秸秆与蛭石体积比为2:1的基质相对较好。  相似文献   

抗纹枯病、赤霉病的转TaPIEP1基因小麦的分子鉴定与选育     

刘欣  蔡士宾  张伯桥  周淼平  路妍  吴继中  杜丽璞  李斯深  臧淑江  张增艳 《作物学报》2011,37(7):1144-1150

小麦纹枯病(主要病原为禾谷丝核菌)和赤霉病(主要病原为禾谷镰刀菌)已成为我国小麦生产的重要病害。TaPIEP1是从小麦中分离到的1个病原诱导的基因,其编码蛋白是可与GCC-box顺式元件结合、转录激活型的ERF转录因子。本研究以8个转TaPIEP1基因小麦株系的T₄和T₅代植株为试材,进行了外源转TaPIEP1基因的PCR检测、Southern杂交、RT-PCR与Q-RT-PCR的分析以及纹枯病菌、赤霉病菌接种与抗性鉴定。结果表明,外源TaPIEP1基因在转基因小麦中能够稳定遗传,以单拷贝或双拷贝整合到7个转基因小麦株系基因组的不同位点;外源TaPIEP1基因在转基因小麦中能超量表达;与受体扬麦12相比,TaPIEP1表达水平高的8个转基因小麦株系对纹枯病抗性显著提高,4个株系中一些材料对赤霉病抗性显著提高,3个株系中一些材料兼抗纹枯病和赤霉病,说明TaPIEP1正向参与了小麦对纹枯病和赤霉病抗性反应,利用该基因通过基因工程可创制抗纹枯病、赤霉病的小麦新种质。  相似文献   

安阳市土壤养分监测及培肥措施     

徐玉森  倪玉芹  杜丽  郭金凤  郭伟伟  杨斌  吴斌 《中国棉花》2004,31(3):39-40

为了适应棉区高产、高效、优质的要求 ,对棉区1 2 0多个定位监测点进行取土化验 ,取土 1 2 7个 ,化验了土壤有机质、全氮、速效磷、速效钾、碱解氮五个项目 ,分析 635项次 ,对土壤养分含量进行了系统分析。1土壤养分含量状况2 0 0 3年土壤监测结果表明 (表 1 ) ,全市土壤养分含量与 2 0 0 1年、2 0 0 2年相比基本处于持平状态。有机质含量 1 5 .0‰ ,比 2 0 0 2年下降 8% ;全氮含量0 .96‰ ,与 2 0 0 2年基本持平 ;速效磷含量 2 2 .7mg· kg-1,与 2 0 0 1年相比有所提高 ,与 2 0 0 2年相比基本持平 ;速效钾含量 1 1 1 mg· kg-1,三年变化较…  相似文献   

类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析   总被引：2，自引：2，他引：0  

黄海峰  张振兴  杨小健  曹瑞勇  李宝宝  聂鑫  朱姝  李国华  彭冬梅  李亚颖  王凤阳  杜丽 《中国畜牧兽医》2018,45(2):302-309

试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因进行克隆与原核表达，并对其表达蛋白进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板，参考GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因序列，设计1对引物。通过PCR扩增得到大小为1 641 bp的groEL基因片段，将其连接至pMD19-T载体，构建pMD19-T-groEL重组质粒，经BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切鉴定正确后，构建重组质粒pET-28a（+）-groEL。将鉴定正确的pET-28a（+）-groEL质粒转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中，经IPTG诱导表达，运用SDS-PAGE和Western blotting方法进行蛋白质鉴定，利用DNAMAN和BioEdit等软件进行生物信息学分析。结果发现，试验成功克隆了类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因并进行了蛋白表达，表达的融合蛋白大小约为64 ku，GroEL蛋白的分子式为C₄₅₁₀H₇₃₈₁N₁₆₄₁O₁₈₄₀S₅₂₁，原子总个数为15 893，消光系数为32 500，不稳定指数为40.31，亲水性平均值为0.901。GroEL蛋白二级结构中α-螺旋（Hh）、延伸链（Ee）、无规则卷曲（Cc）分别占48.71%、13.19%和38.10%。本试验结果为深入探究类鼻疽杆菌groEL基因的分子作用机理奠定了基础。  相似文献   

羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSL1467基因克隆、表达及其蛋白生物信息学分析     

张萌萌  李宝宝  曹瑞勇  黄海峰  张振兴  杨小健  聂鑫  朱姝  王凤阳  杜丽 《中国畜牧兽医》2018,(9)

试验旨在克隆和表达羊源性类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSL1467基因,并对其表达的蛋白进行生物信息学分析。以羊源类鼻疽伯克霍尔德菌(BPHN1株)基因组为模板,参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSL1467基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因片段,将所得片段与pET-28a(+)载体连接,构建pET-28a(+)-BPSL1467重组质粒。将鉴定正确的pET-28a(+)-BPSL1467重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达产物。使用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale相关生物信息学软件对BPSL1467基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,本试验成功克隆了462bp的BPSL1467基因,诱导表达重组蛋白大小约为22ku,主要以包涵体的形式存在。BPSL1467蛋白分子式为C763H1209N203O217S6,分子质量为16 890.58u;其不稳定系数为33.95,属于稳定蛋白;理论等电点(pI)为8.85,为碱性蛋白;总平均疏水性(GRAVY)为-0.190,为亲水性蛋白。该蛋白的二级结构中以无规则卷曲和α-螺旋为主。本试验结果为深入研究羊源类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSL1467基因的分子作用机理提供了参考依据。  相似文献   

基因组重排植物乳杆菌对断奶仔猪生长发育及其肠道微生物的影响     

万入汇  杜丽欣  邹雪  乔鑫  李炜月  张建斌  蒲蕾  洪亮 《中国畜牧杂志》2023,(7):235-243

本试验旨在研究植物乳杆菌（Lactobacillus Plantarum,LP）基因组重排（Genome Shuffling）突变体LP-GS的抑菌性能及其对断奶仔猪生长发育和肠道微生物的影响。通过紫外诱变和基因重组LP，得到抗菌性能增强的LP-GS作为饲料添加剂进行饲养试验。选用120头28日龄三元杂交去势断奶仔猪，按饲喂日粮随机分为NC组（基础日粮）、PC组（基础日粮+粘菌素）、T1组（基础日粮+野生型LP）、T2组（基础日粮+突变型LP），每组3个重复，每个重复10头仔猪。试验期35 d。结果表明：各组仔猪的体重、平均日采食量、平均日增重、饲料转化率无显著差异。第3周起，T2、PC组仔猪的粪便稠度评分较NC组显著降低；T2组仔猪粪便中大肠杆菌、产肠毒素大肠杆菌数显著减少，嗜酸乳杆菌含量显著增高；PC组乳酸杆菌数显著减少。各组仔猪血液成分无显著差异。由此可见，饲粮添加LP-GS可改善腹泻，调节肠道菌群，进而增强仔猪免疫力，具有替代抗生素作为促生长用饲料添加剂的潜力。  相似文献