刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性的比较研究     

叶建军  田静  高传亮  闫安  叶利颖  王宇冰  宋淇淇 《黑龙江畜牧兽医》2023,(21):18-25

为了探究刚地弓形虫表面蛋白(surface antigen, SAG)SRS29C基因和SRS29C、SAG1联合基因的核酸疫苗对小鼠急性感染弓形虫的免疫保护效果，试验利用PCR方法扩增了SRS29C基因片段并将其克隆至真核表达载体pEGFP-N1中，构建重组质粒pEGFP-SRS29C,并对该质粒进行酶切鉴定，同时用该质粒对HEK293T细胞进行转染，再用Western-blot方法检测目标蛋白在细胞中的表达情况；用重组质粒pEGFP-SRS29C和pEGFP-SAG1单独免疫或联合免疫小鼠，用ELISA法测定血清IgG水平，CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖能力，流式细胞仪测定CD₄⁺和CD₈⁺T淋巴细胞百分比，ELISA试剂盒检测脾脏细胞因子的表达情况；进行小鼠体内攻虫试验，记录小鼠存活时间。结果表明：成功构建了重组质粒pEGFP-SRS29C,表达的蛋白质大小为66 ku; pEGFP-SRS29C组和联合免疫组与PBS组和空载体组相比血清IgG含量、脾淋巴细胞增殖率、CD4⁺  相似文献