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随着人民生活水平的不断提高,宠物正逐步走进我们的家庭,并且带动了宠物行业的兴起。宠物产业蓬勃发展带来了无限的商机,同时也带来了不少问题。武汉市与北京、上海、广州、重庆并称全国五大“宠物城市”,其宠物行业具有极大的发展潜力,同样也存在一些无法避免的问题。武汉的宠物交易市场聚集在人口密集区,且在交易过程中的免疫工作不到位;医疗市场水平参差不齐;宠物美容也只是小部分人的游戏;保健品市场份额绝大多数被外国品牌占据。本次调查通过调查问卷、走访相关人士、查阅文献资料等方式对武汉市的宠物交易市场、宠物医疗市场、宠物美容市场及宠物食品保健品市场等各个方面进行了细致的调查,对其发展前景进行了相关预测,并对其存在的问题提出了几点建议。只有充分认清自身的优势与不足后,武汉市的宠物行业才能高效有序健康的发展。 相似文献
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试验旨在构建pET28a-DCpep-GSE原核表达载体，并制备猪链球菌（Streptococcus suis）重组表位蛋白。应用生物信息学方法预测猪链球菌保护性抗原三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）、烯醇化酶（Enolase）、DNA核酸酶（SsnA）的跨膜区结构、信号肽、B细胞表位、辅助T细胞（Th细胞）表位及蛋白的二级结构；设计重组蛋白（DCpep-GSE蛋白）的氨基酸序列并分析其理论等电点、亲疏水性等理化性质；构建重组原核表达载体pET28a-DCpep-GSE，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，优化诱导表达条件，His镍柱纯化并检测目的蛋白的细胞毒性和溶血性。结果显示，SsnA蛋白第1-50及1 036-1 059位氨基酸为胞内或跨膜片段，第1-56位氨基酸为信号肽片段，GAPDH和Enolase无跨膜区及信号肽；B细胞和Th细胞表位处于二级结构中的无规则卷曲与β-转角区域，表位抗原性良好；DCpep-GSE蛋白共373个氨基酸，分子质量为45.3 ku，理论等电点（pI）为4.57，平均亲水性（GRAVY）为-0.677，属于酸性亲水性蛋白；质粒双酶切得到5 369 bp的载体条带和1 131 bp的目的条带，PCR扩增产物测序结果与设计序列一致，载体构建正确；以1 mmol/L IPTG于37 ℃诱导6 h蛋白表达量最高，超声破碎后得到可溶性蛋白；试验组蛋白浓度为500 μg/mL时，RAW264.7、PK15和MARC145细胞的相对增殖率分别达到92.3%、99.5%和99.7%，细胞形态与对照组一致，生长旺盛；各样品组的溶血率均<5%。本研究设计了重组蛋白DCpep-GSE，成功地表达和纯化了DCpep-GSE蛋白，并验证了其安全性，为后续猪链球菌病亚单位疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
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为了探究刚地弓形虫SRS29C基因的生物学特性,利用大肠杆菌原核表达系统将SRS29C基因进行体外表达并制备多克隆抗体。同时利用CRISPR/Cas9技术构建弓形虫SRS29C基因敲除虫株,通过乙胺嘧啶筛选及PCR单克隆筛选,并进行Western blot试验进一步验证SRS29C单克隆敲除株。结果显示,SRS29C蛋白在体外成功表达,且制备的多克隆抗体免疫原性良好。SRS29C基因敲除株在加入乙胺嘧啶后能够正常生长,经PCR鉴定能扩增出797 bp的5′UTR(SRS29C)片段及576 bp的3′UTR(SRS29C)片段,且未扩增出SRS29C基因片段,而在对照组中扩增出了700 bp的SRS29C片段,同时蛋白验证基因敲除株中未能表达SRS29C蛋白。结果表明,成功构建并筛选出SRS29C基因敲除单克隆虫株,暂时命名为ME49△SRS29C及RH△SRS29C,为弓形虫SRS29C基因功能的研究奠定了基础。 相似文献
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为了探究刚地弓形虫表面蛋白(surface antigen, SAG)SRS29C基因和SRS29C、SAG1联合基因的核酸疫苗对小鼠急性感染弓形虫的免疫保护效果，试验利用PCR方法扩增了SRS29C基因片段并将其克隆至真核表达载体pEGFP-N1中，构建重组质粒pEGFP-SRS29C,并对该质粒进行酶切鉴定，同时用该质粒对HEK293T细胞进行转染，再用Western-blot方法检测目标蛋白在细胞中的表达情况；用重组质粒pEGFP-SRS29C和pEGFP-SAG1单独免疫或联合免疫小鼠，用ELISA法测定血清IgG水平，CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖能力，流式细胞仪测定CD4+和CD8+T淋巴细胞百分比，ELISA试剂盒检测脾脏细胞因子的表达情况；进行小鼠体内攻虫试验，记录小鼠存活时间。结果表明：成功构建了重组质粒pEGFP-SRS29C,表达的蛋白质大小为66 ku; pEGFP-SRS29C组和联合免疫组与PBS组和空载体组相比血清IgG含量、脾淋巴细胞增殖率、CD4+ 相似文献
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研究旨在构建弓形虫鸡尾酒DNA疫苗并评价其对小鼠的免疫保护效果。研究将编码弓形虫棒状体蛋白ROP5、ROP9和ROP17的基因分别构建至真核表达载体p VAX1上，获得重组真核表达质粒p VAX1-ROP5、p VAX1-ROP9和p VAX1-ROP17，将上述质粒进行PCR和双酶切验证，并通过Western blot检测重组质粒在真核细胞中表达。将三种重组质粒按1∶1∶1的比例混合后，取100μg通过腿部肌肉注射免疫小鼠，加强免疫后，检测小鼠血清抗体、脾淋巴细胞增殖及细胞因子水平，并接种弓形虫RH强毒株进行攻毒，评价免疫后小鼠的保护效果。真核表达质粒p VAX1-ROP5、p VAX1-ROP9和p VAX1-ROP17经PCR和双酶切验证的结果显示：分别在1 686 bp、1 128 bp和1 836bp处出现特异性目的条带；Western blot检测结果发现，在约为62、41和68 kDa处出现目的条带，分别与预期目的蛋白ROP5、ROP9和ROP17的分子量大小相符。与空载体组和生理盐水组小鼠相比，疫苗免疫组小鼠产生的血清中抗体IgG和淋巴细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL... 相似文献
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