肠出血性大肠杆菌O157:H7Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  卢维彩  叶青  吕立新  周俊明  姜平  张雪寒  李彬  栾晓婷  温立斌  王小敏  茅爱华  赵攀登  郭容利 《江苏农业学报》2011,(6):1300-1304

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157:H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液.共免疫2次,间隔14d,末次免疫后14d...  相似文献   

出血性大肠杆菌O157∶H7的Tir与Hly融合基因的构建和表达     

张雪寒  何孔旺  卢维彩  李丽  茅爱华  周萍 《中国兽医学报》2010,30(5)

构建表达Tir和Hly的融合基因,将Tir基因的C端414个氨基酸残基(Tir414)基因部分与Hly基因的C端300个氨基酸残基(Hly300)基因部分串联构建pET28a-Tir414-Hly300重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达.薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右.由于该融合蛋白由Tir和Hly2部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和溶血素(Hly)的抗体,在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值.  相似文献   

出血性大肠杆菌O157: H7 Stx2B-Tir-Stx1B多价融合蛋白表达及免疫原性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

张雪寒  何孔旺  卢维彩  赵攀登  温立斌  李彬  郭容利  王小敏  倪艳秀  周俊明  俞正玉  茅爱华  吕立新 《华北农学报》2010,25(4)

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157∶ H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势.构建表达tir和stx1b的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stx1b亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-tir-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右.重组蛋白纯化后皮下途径免疫小鼠,能够诱导高滴度(105)的IgG,鼻腔内途径免疫小鼠不仅能够诱导高滴度(104)的IgG,还能诱导高达102的IgA.二免后攻击50LD50的EHEC O157∶ H7,相对于对照组,免疫组粪便中排菌量明显降低、排菌时间明显缩短.结果表明:该融合蛋白免疫原性良好,并且由Tir、Stx2b和Stx1b三部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和志贺毒素(Stx)的抗体,在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值.  相似文献   

猪Th1/Th2型细胞因子重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

温立斌  何孔旺  杨汉春  郭容利  李成仁  卢维彩  贾付从 《华北农学报》2009,24(Z1)

依据GenBank登录的猪Th1型细胞因子(IL-2、IL-2、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增和克隆了上述因子的101 bp核苷酸片段.测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了它们各自的标准曲线及直线回归方程.结果表明,该方法具有线性关系好,特异性、敏感性、重复性高等特点,为猪体内IL-2、IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-6和IL-10的mRNA水平的定量检测,提供了必要的技术手段.  相似文献   

出血性大肠杆菌O157：H7的Tir与stx1／2B融合基因的构建和表达   总被引：4，自引：0，他引：4  

张雪寒  何孔旺  卢维彩  俞正玉  茅爱华  刘亚栋 《内蒙古农业科技》2009,(3):59-61

为了更好防治由出血性大肠杆菌O157：H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗．其中亚单位疫苗具有很大优势。方法：构建表达tir和stxb的融合基因。将tir基因中间295个氨基酸残基（Tir295）与stxB亚基基因72个氨基酸串联。构建pET28a—stx2b—Tir295-stx1b重组质粒,将其转化于BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达,经SDS--PAGE电沫检测,该融合蛋白获得了高效表达。结果：薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30％左右。结论：由于该融合蛋白由Tir、stx1b和stx2b三部分抗原组成．可刺激机体产生针时转位紧密素受体（Tir）和志贺毒素（stx）的抗体,在EHEC0157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。  相似文献   

出血性大肠杆菌O157：H7的Tir与Hly融合基因的构建和表达     

张雪寒  何孔旺  卢维彩  李丽  茅爱华  周萍 《兽医大学学报》2010,(5):647-650

构建表达Tir和Hly的融合基因,将Tir基因的C端414个氨基酸残基（Tir414）基因部分与Hly基因的C端300个氨基酸残基（Hly300）基因部分串联构建pET28a-Tir414-Hly300重组质粒,将其转化于BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。由于该融合蛋白由Tir和Hly2部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体（Tir）和溶血素（Hly）的抗体,在EHECO157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。  相似文献