检测鸡TRIM25蛋白的免疫组化方法     

禇颖  马文杰  胡卫国  陈茹  邱建华  郭慧君  李宏梅 《畜牧兽医学报》2018,(4)

为建立检测鸡TRIM25蛋白表达的免疫组化方法,根据发表的鸡TRIM25基因序列,设计引物,从海兰褐鸡脾中扩增TRIM25基因,构建重组原核表达质粒,通过诱导表达获得重组TRIM25蛋白,经纯化后免疫接种兔和小鼠,获得高效价血清抗体,用该抗体建立免疫组化方法,对鸡肺、脾、肝组织中TRIM25蛋白进行检测。结果显示,克隆的鸡TRIM25抗原基因大小为1 012bp,构建的重组表达质粒能够在大肠杆菌中稳定表达,经纯化后的重组蛋白质能够诱导兔和小鼠产生效价为1∶106以上的血清抗体,该血清抗体免疫组化检测发现鸡肺、脾和肝组织中均有不同程度的TRIM25蛋白表达,在肺组织中主要存在肺泡周围的内皮细胞、淋巴细胞等的细胞质内;脾组织主要出现在脾淋巴细胞和血管内皮细胞等的细胞质中;肝组织中主要出现在肝小叶肝细胞、淋巴细胞以及血管内皮细胞细胞质中。该研究为深入研究鸡TRIM25蛋白的组织分布、动态表达和生物学活性提供物质基础和方法依据。  相似文献   

亚洲棉GaPP2C24基因的克隆及表达分析     

蔡肖  甄军波  刘琳琳  刘迪  唐丽媛  张素君  李兴河  王海涛  刘存敬  张香云  张建宏  迟吉娜 《华北农学报》2020,35(3):33-39

PP2C是一大类重要的蛋白磷酸酶,广泛参与不同的逆境胁迫响应。为了解PP2C基因在干旱响应中的功能,以亚洲棉石系亚1号为材料,利用RT-PCR方法从中克隆了GaPP2C24基因,并对该基因进行了生物信息学分析,荧光定量PCR研究了其在亚洲棉不同组织和干旱胁迫下的表达情况。结果表明,GaPP2C24基因CDS序列全长为1 251 bp,编码416个氨基酸。序列同源比对发现,GaPP2C24与其他植物的PP2C氨基酸序列有较高的相似性,其中与可可树(EOY33930.1)、黄麻(OMO91132.1)的相似性分别为85%,84%。进化分析表明,GaPP2C24与同属锦葵目的黄麻聚在一支,亲缘关系最近,与可可树的亲缘关系次之。实时荧光定量PCR结果表明,GaPP2C24基因在子叶、下胚轴、胚根、叶、茎和根均有表达,且在茎中的表达量最高,根中次之。GaPP2C24受干旱胁迫的诱导表达,其在根和叶片中的相对表达量在处理1 h后最高,分别达到对照的53.9,6.9倍,推测该基因在棉花干旱响应中有重要作用。  相似文献   

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒双重液相基因芯片检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈茹  于晓璐  高小博  薛春宜  宋长绪  邱杨  刘志玲  王莹  段燕喻 《动物医学进展》2016,(6):1-6

为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性PRRSV毒株(HPPRRSV),根据PRRSV囊膜蛋白GP2基因保守序列和HP-PRRSV特有的Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法RT-PCR不对称扩增和双重微球杂交反应,建立了双重液相基因芯片方法。对12株PRRSV以及其他12种猪病原体的检测显示,该法能特异性检测12株PRRSV毒株并准确鉴别其中7株HP-PRRSV,与其他病原体无交叉反应;对PRRSV、HP-PRRSV病毒液的检测低限均小于每个反应0.5TCID_(50);其组内、组间检测变异系数均10%;检测55份疑似临床样品并与商品化荧光RTPCR试剂盒比较检测结果,符合率达98.2%(54/55)。研究结果为适应临床快速检测PRRSV提供了一种新的分子生物学检测方法。  相似文献   

滨水环境景观设计研究——以湖州太湖旅游度假区为例     

刘琳琳  海岩 《林业科技情报》2011,43(1):85-87

湖州市是一座江南古城,有着浓厚的文化底蕴.湖州太湖旅游度假区位于湖州市境内,其区域内河道网络纵横交错,产生了众多的桥梁和滨水地带.为进一步提升湖州滨湖度假区环境品质,增加度假休闲氛围,打造国内一流休闲旅游度假区,现对滨湖休闲景现带的景观设计理念进行研究探讨.  相似文献   

从进口种用奶牛中分离出传染性牛鼻气管炎病毒     

罗琼  李力施  陈茹  林志雄 《中国兽医杂志》2005,41(9):45-46

传染性牛鼻气管炎病（infectious boyine rhinotracheitis，IBR）是由牛疱疹病毒1型（BHV1）引起牛的急性接触性传染病。以高热、呼吸困难、鼻炎和上呼吸道炎症为特征。它具有典型的泛嗜性，能侵袭多种器官和组织，引起多种多样的临床症状。本病最初在欧州发生，随着牛的输出而蔓延至各大洲，通过血清抗体检查表明几乎所有国家的牛群都有不同程度地检出IBR抗体，  相似文献   

牛疱疹病毒I型二重LUX荧光PCR鉴别检测方法的建立     

陈茹刘琳琳  曾彩云曾碧健 罗琼曹永长  毕英佐 《中国兽医科技》2007,37(11):944-949

采用LUX新型荧光PCR技术原理，建立了快速检测牛疱疹病毒I型（BHV-1）以及鉴别野毒感染和基因缺失疫苗免疫动物的二重实时荧光PCR方法。结果显示，该方法对多株BHV-1病毒均呈典型gE、gC双基因阳性反应，对其他常见动物疱疹病毒以及健康牛基因组DNA等均呈阴性反应；对细胞增殖病毒液的gE、gC双基因鉴别的检测敏感性可达0．4～O．04TCID50比常规PCR方法高100倍以上；对带毒牛血清、抗凝全血、牛新鲜精液和冷冻精液基因鉴别的检测敏感性分别达0．04TCID50、0．4TCID50、0．4TCID50和4TCID50。采用该方法从临床牛血样、鼻拭子样品中检出IBRV阳性样品，检测全程仅需约2h。对单基因克隆质粒的检测进一步证实该方法能特异地鉴定gE、gC基因，检测灵敏度分别达90、30拷贝。结果表明，该方法可应用于临床快速诊断BHV-1病毒感染，鉴别BHV-1病毒感染与对应的基因缺失疫苗免疫动物。  相似文献   

螨危24%悬浮剂对柑桔红蜘蛛防治效果示范试验     

陈茹花 《果农之友》2006,(11):8-8

柑桔红蜘蛛是我县柑桔生产上的主要虫害,各个柑桔园均有不同程度的发生.受害重的平均百叶9.87头,虫叶率100%,一般平均百叶5.57头,虫叶率100%,对当年和来年树势及产量造成严重影响.为了更好地防治红蜘蛛,我站进行螨危24%悬乳剂防治柑桔红蜘蛛的效果和对柑桔的安全性试验.  相似文献   

芦柑柑桔砂皮病的综合防治技术   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈茹花 《果农之友》2006,(9)

柑桔砂皮病是永春县芦柑生产上的重要病害之一,特别是东关镇果园发生最严重.多年来,由于果园生态环境变化,生产技术变迁,市场开放与对外交流增多,柑桔砂皮病危害加剧,加上果农经验不足,疏于防治,造成蔓延传播.每年发生面积330公顷,轻的损失5%～10%,中等损失20%～30%,重的损失80%以上,严重影响果实外观品质与商品价值,减少了芦柑出口量.通过采取综合防治措施,柑桔砂皮病从叶发病率100%降到1%,果发病率从100%降到15%,可挽回产量0.15万吨.现将其发生特点及综合防治措施总结如下:  相似文献   

用地高辛标记的PCR－ELISA技术快速检测转基因鱼   总被引：8，自引：0，他引：8       下载免费PDF全文

陈茹  林志雄  刘琳琳  朱道中  罗长保  颜思通 《中国水产科学》2001,8(4):13-17

取含有小鼠重金属螯合蛋白（mMT)基因启动子及人生长激素（hGH)基因的鱼样品，以Qiagene核酸纯化技术对鱼组织DNA进行纯化。常规PCR检测显示，mMT启动基因和hGH基因的PCR产物分别为240bp和130bp，与设计相符。PCR产物的核酸测序结果证实其扩增产物具特异性。地高辛-PCR（Dig-PCR)标记反应显示，2个基因均产生1条Dig标记的特异产物带。Dig-PCR-ELISA检测敏感性试验显示，对mMT启动子和hGH基因的检测敏感性可达10^-3，与常规PCR结合琼脂糖胶电泳检测方法相比，检测敏感性可提高至100-1000倍。试验证明，针对mMT和hGH基因所建立的Dig-PCR-ELISA技术特异可靠。  相似文献   

采收方式对烤烟上部烟叶质量的影响     

杨超  刘琳琳  王伟宁  崔发荣 《山西农业科学》2014,(8):859-861

研究了上部烟叶不同采收方式对云烟85上部烟叶的外观质量、化学成分和中性致香成分含量的影响,探讨了最适宜凉山烟区云烟85的采收方式。结果表明,云烟85上部烟叶分2次采收的烟叶外观质量较好,烟叶化学成分较协调,烟叶吸食质量较高。说明凉山烟区云烟85上部烟叶的最佳采收方式是充分成熟,分2次采收。  相似文献