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为提高重组新城疫病毒(NDV)外源基因表达量,本研究采用内部核糖体进入位点序列(IRES)构建表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV) HLJ07株VP2双拷贝基因的重组NDV(rClone30-VP2-IRES-VP2),同时构建表达单拷贝VP2基因的重组NDV (rClone30-VP2)作为对照.间接免疫荧光试验表明VP2蛋白在感染两种重组病毒的鸡胚成纤维细胞(DF-1)中得到表达.Real-time PCR检测结果表明rCIone30-VP2-IRES-VP2中VP2 mRNA转录水平明显高于rClone30-VP2.生长曲线分析表明,两株重组病毒株与亲本NDV LaSota (Clone30)株在细胞培养中可以同样稳定复制.重组病毒株在鸡胚中多次传代之后仍稳定表达VP2蛋白.本研究通过建立NDV的反向遗传操作系统构建了独立表达IBDV双拷贝VP2基因的重组NDV,并证明双拷贝基因的表达水平优于单拷贝基因,为提高重组NDV外源基因的表达量提供了新的思路. 相似文献
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鸡传染性法氏囊病超强毒致弱株的生物学特性研究 总被引：5，自引：4，他引：1
将vvIBDV国内分离株-G株经SPF鸡胚和鸡胚成纤维细胞连续传代致弱,得到适应细胞的致弱株。暂命名为IBDVGt。其毒价为2.0×108PFU／ml以上,具有较好的抗原性,对鸡无致病性。返祖试验及病理组织学试验证明,致弱株可在鸡体内连续传至4代,未有返强现象。 相似文献
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《The Journal of Applied Poultry Research》2017,26(4):491-497
Infectious bursal disease is a highly infectious immunosuppressive disease of chickens endemic in many poultry-producing areas around the world. The non-enveloped virus that causes the disease, infectious bursal disease virus (IBDV), is highly stable and resistant to inactivation by common disinfectants. Avian influenza viruses (AIV), on the other hand, are highly vulnerable to most disinfectants due to their phospholipid envelope, but still pose a major threat to the poultry industry, as the outbreaks in 2015 in the United States have shown. Several studies have evaluated the efficacy of disinfectants against both IBDV and AIV but failed to take into consideration factors that would affect the disinfectant efficacy once used in the field, such as organic material. Therefore, the aim of this study was to investigate the efficacy of a commercial combination of quaternary ammonia and glutaraldehyde as a disinfectant against IBDV and AIV in the presence of organic material commonly found in the commercial poultry industry: fecal matter alone, feathers/dust mixed with feces, and bedding material mixed with feces. After a 10-minute disinfectant contact time, each surface was swabbed and virus isolation attempted in embryonated specific-pathogen-free (SPF) chicken eggs. The non-enveloped very virulent (vv) IBDV was reisolated from spiked feces and shavings treated with the disinfectant. This was confirmed by RT-PCR detection of the virus. In contrast, no viral isolate or RT-PCR product was obtained from the samples collected from spiked feathers/dust treated with the disinfectant. Finally, no low pathogenic (LP) AI was re-isolated from the samples treated with the disinfectant indicating that, under laboratory conditions, the combination of quaternary ammonia and glutaraldehyde was partially and completely effective in the inactivation of vvIBDV and LPAI, respectively. Not only the viral envelope, but also the presence of organic matter plays an important role in the viral resistance to disinfectants. 相似文献
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IBDV超强毒GX8/99株细胞适应毒及其鸡体回传毒的致病性、免疫原性比较 总被引：1，自引：0，他引：1
传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)的超强毒株GX8/99经在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续传代22代后,细胞适应毒株GXC23对鸡的致病性显著减弱,对4~6周龄SPF鸡的致死率从85%~90%,减为0~5%.将GXC23在96孔细胞培养板上经两次无限稀释法得到3个克隆病毒.在SPF鸡回传20代后,相应的毒株GX-2B20、GX-4B20、GX-5B20,对SPF鸡的致死率仍维持在0~5%.回传23代后,GX-2B23,GX-4B23免疫2周龄SPF鸡,3周后虽然能引起法氏囊一定程度的萎缩及点状出血,法氏囊髓质区淋巴细胞坏死和变性,而且,仍表现出明显的免疫抑制性,都能造成新城疫,禽流感(H9-和H5-)疫苗抗体水平的显著降低.但是二者却都可以诱导机体产生很高的抗体水平,可抵抗超强毒GX8/99的人工感染,保护率可达100%. 相似文献
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利用反转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR) ,扩增克隆传染性法氏囊病病毒超强毒 (vv IBDV) HZ株 VP2基因 ,并对 VP2基因进行全序列测定、序列分析和聚类分析 ,同时将VP2基因与真核表达载体 pc DNA3相连接。结果克隆到 VP2基因全序列长 1 356bp,分析表明 HZ株与欧洲超强毒株 UK661高度相似 ,同时将 VP2基因正向插入 pc DNA3的 CMV启动子下游 ,得到了 VP2基因的真核表达质粒。为 IBDV分子流行病学和基因工程疫苗的研究奠定了物质基础 相似文献
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RT-PCR扩增获得4株鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)分离株(GT、HN、ZB、BZ)VP2基因并测序,序列分析结果表明:各基因全长均为1356bp,编码452个氨基酸残基;核苷酸、氨基酸序列同源性分别在93.2%～99.9%与93.6%～100%之间;除HN株与经典毒株Cu-1核苷酸同源性为95.5%外,其余3株均为95.6%;GT、HN、ZB及BZ株与VariantE株核苷酸同源性均为95.9%;该4株病毒与北欧、非洲、西亚、东南亚、东亚等地区于1998～2008年报道的超强毒株的核苷酸与氨基酸序列同源性均非常高。根据VP2蛋白氨基酸序列特征,HN、ZB、BZ株病毒皆为超强毒株(vvIBDV),GT株除254位氨基酸残基为变异株特征性的S(丝氨酸)外,其余均与超强毒株特征相符。以GT株VP2基因克隆至原核表达载体pBV220,转化大肠杆菌BL21(DE3),低温培养后42℃热诱导,并对诱导产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析。结果显示,目的基因获得表达,并与阳性抗体具有良好的反应原性,为以VP2为基础的基因工程亚单位疫苗的研制奠定基础。 相似文献
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传染性法氏囊病病毒上海超强毒株VP2-4-3基因真核表达质粒的构建与表达 总被引：3，自引：0，他引：3
应用Long and Accurate—PPCR(LA—PCR)技术。扩增克隆了鸡传染性法氏囊病病毒上海超强毒(vvIB—DV)的VP2—4—3基因。应用粘性末端连接策略,将VP2—4—3基因克隆人真核表达载体pALTER—MAX。经酶切鉴定,表明VP2—4—3基因为正向插入,位于CMV启动子下游。该真核表达质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞,经特异性抗IBDV抗体的免疫荧光检测,发现在细胞内有特异蛋白表达。 相似文献
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传染性法氏囊病病毒超强毒GZ株VP2基因的克隆和序列分析 总被引：3，自引：0，他引：3
根据已发表的传染性法氏囊病病毒（IBDV）52/70株基因组序列，设计并合成了1对特异扩增IBDV VP2基因的引物。以IBDV超强毒（vvIBDV)GZ株基因组为模板，利用PT-PCR技术扩增出了1.5kb的cDNA产物，将VP2基因克隆于pUC119质粒上，得到重组pUC119质粒。对VP2基因全序列进行了测定。序列分析和聚类分析表明，GZ株与欧洲超强毒株UK661非常相似，而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株HQ0806的分离与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
通过对辽宁阜新近郊某鸡场数群 15 日龄左右的病鸡的临床症状、病理变化、病毒分离、纯化、动物回归、血清学检测、病毒形态观察等检测, 分离到一株鸡传染性法氏囊病病毒并命名为HQ0806。研究表明：该病毒效价达到10-5.8/ 0.2ml,在动物回归试验中其引起发病率为100％,死亡率达83％,剖检可见法氏囊呈“紫葡萄样”外观,胸腺萎缩,骨髓脂肪化等病变,表现了超强毒株的致病特点。 相似文献