正交设计优化青蒿SRAP-PCR反应体系及引物筛选     

石紫薇  梁妍  姜婷婷  梁剑平  贾宁  辛志君  陆锡宏  周翔  李雪虎 《分子植物育种》2020,(10):3303-3310

为了建立青蒿的SRAP最佳扩增体系,并筛选出SRAP多态性引物,本研究以青蒿叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg^2+、dNTP Mix、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板5种因素5个水平,对青蒿SRAP反应体系进行研究。结果表明,青蒿SRAP-PCR最佳反应体系为:引物0.6μmol/L、Mg^2+2.0 mmol/L、模板DNA 5.1 ng、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs 0.25 mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应均有不同影响,其中引物浓度的影响最大,dNTPs的影响最小。运用该体系对不同种质资源的青蒿进行验证,证明该体系稳定可靠,并在30个引物组合中筛选出了25对扩增条带清晰,多态性丰富的引物组合。这一结论为今后利用SRAP标记技术进行青蒿分子遗传学研究提供了科学依据。  相似文献   

枇杷iPBS分子标记的PCR体系优化与引物筛选     

顾林平  张冰  费艳  王化坤  王鹏凯 《中国果业信息》2019,48(1)

枇杷的DNA为模板进行iPBS-PCR扩增，采用预实验中效果较好的iPBS分子标记引物2241，对枇杷iPBS-PCR反应体系中的dNTP、Mg2+、引物、模板用量进行优化，根据检测结果确定枇杷iPBS-PCR使用：10×Taq buffer 2μL，25mM Mg2+ 1.6μL，2.5mM dNTP 1.6μL，10μmol/L Primer 1μL，5U/μL Taq酶0.2μL，模板DNA 5ng 的20μL反应体系。反应程序中的退火温度可以参考iPBS引物理论Tm值。对33条iPBS引物扩增测试的结果显示在该反应体系下可以筛选到22谱带清晰、多态性好的引物，可用于枇杷的分子标记分析。  相似文献   

特异抗体对细胞单层上细胞结合性伪狂犬病病毒培养的作用     

Namw.  HJ 崔尚全 《国外兽医学(畜禽传染病)》1997,17(1):55-57

  相似文献   

南方、爪哇和花生根结线虫的快速灵敏的PCR鉴定方法     

《作物育种信息》2005,(4):13-14

为了研制南方、爪哇和花生根结线虫快速灵敏的检测和鉴定方法，分别分离了4个南方根结线虫和3个爪哇根结线虫特异性的随机扩增多态性DNA(RAPD)片段。在这些RAPD标记DNA序列的基础上，设计了多对SCARPCR引物，并用源于国内外的南方、爪哇、花生、北方和象耳豆根结线虫群体验证其扩增特异性和灵敏度。最终确定了3对高效扩增的SCAR引物，  相似文献   

B—单型特异血清型对马立克氏病疫苗免疫效果的影响     

Baco.  LD 顾有方 《国外兽医学(畜禽传染病)》1995,15(4):24-27

以前的研究表明，Ｂ－单型地抵抗超强毒马立克病病毒攻击的效果依所使用的马立克氏病疫苗的种类不同而不同。为了测定同一血清型ＭＤ疫苗接种同一单型鸡后用ＭＤＭｄ５强毒攻击是否产生相似的保护性。  相似文献   

基因组特异性引物扩增细菌转录产物标记后用于DNA芯片分析     

张亚菲  王秀荣等 《预防兽医学进展》2001,3(3):9-11

  相似文献   

RAPD技术对地方鸡种群体遗传结构的分析   总被引：16，自引：1，他引：15  

周怀军  陈宽维 《中国家禽》1997,(5):7-10

利用ＲＡＰＤ技术对４个地方鸡种和１个引进鸡种的群体遗传结构进行分析，通过筛选的５个随机引物ＯＰＨ－０２、ＯＰＨ－０５、ＯＰＨ－１３、ＯＰＨ－１６、ＯＰＧ－０７对５个鸡种的池ＤＮＡ进行多态性研究，结果表明：５个引物共产生条带６１个，扩增产物片段的长度一般从１５０ｂｐ－４ｋｂ。  相似文献   

水稻特异株型材料7N5改良系R456配组的3个新组合在不同生态地区的表现   总被引：1，自引：1，他引：0  

孙灿慧  姜萍  金帮文  倪克鱼 《贵州农业科学》2002,30(6):29-30

应用水稻特异株型材料7N5改良系R456与不同质源的两系不育系和三系不育系进行配组，调查杂交组合的结实率及产量，结果表明：7N5改良系R456分别与两系不育系和三系不育系配组都具有较高的恢复力和配合力，其配组的3个新杂交组合在不同地区有不同的产量表现。  相似文献   

香蕉ACC氧化酶基因(MAO3)的克隆及其表达特性分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

黄俊生  王华  张世清 《园艺学报》2005,32(5):807-811

 根据同源扩增得到香蕉(Musa acuminata) ACC氧化酶基因(MAO3) 的核心部分, 再通过3'和5'RACE扩增上、下游序列以及Genome-Walker的方法得到启动子部分, 共获得3 718 bp长度的序列。将所得结果进行聚类分析, 发现香蕉中ACC氧化酶的氨基酸序列非常保守, 各序列间的同一性高达99% ,与单子叶植物和双子叶植物中ACC氧化酶的氨基酸序列的同源性在66.7%～71.8%之间。组织原位杂交试验表明MAO3基因的表达具有组织特异性, 初步认为是在韧皮部筛管组织中特异表达。运用实时荧光定量PCR技术, 实时监测到了MAO3基因和香蕉乙烯受体基因ERS2受机械伤诱导的定量变化。  相似文献   

猪弓形虫病特异PCR诊断方法的建立   总被引：11，自引：2，他引：11  

谢德华朱兴全  崔焕粦丘初集范万红  廖申权翟敏莉林瑞庆  翁亚彪 《中国兽医科技》2005,35(4):289-293

以核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列作为弓形虫种特异的遗传标记．建立了猪弓形虫病特异PCR诊断方法。应用人工感染的方法建立了猪弓形虫病动物模型．摸索出猪弓形虫病PCR检测的最佳条件。敏感性和特异性试验结果显示，该PCR方法最低能检测到10个弓形虫速殖子的DNA，且与相关的8种原虫和线虫均无交叉反应，证明该PCR方法具有高度的敏感性和特异性。动物感染试验结果证明．在试验猪出现明显临床症状时(感染后第5d)．对取材的8个组织样品用该PCR方法检测，有6个组织样品为阳性，其中检出率最高的组织为肺门淋巴结。  相似文献