羊源性成分LAMP检测方法的建立     

《经济动物学报》2016,(4)

根据羊cyt B基因设计3对特异性引物,运用GenieⅡ等温扩增荧光检测系统,以LAMP荧光检测方法为基础,建立了检测羊源性成分的LAMP方法,并对该方法进行了反应体系和条件的优化。试验结果表明:该方法操作简单、特异性好;灵敏度比普通PCR方法高100倍,比q PCR方法低10倍,达到5.928×10-3μg/μL;反应时间短,最快10 min即可完成反应。  相似文献   

牛冠状病毒交叉引物扩增快速检测方法的建立     

唐豪  贺泂杰 《中兽医医药杂志》2023,(4):31-35+97

牛冠状病毒(BCoV)引起犊牛腹泻,对养牛业造成极大危害。本研究采用交叉引物扩增(CPA)方法和核酸检测装置相结合,建立了BCoV的可视化快速检测方法。结果表明,CPA体系Mg²⁺最佳物质浓度为2.0 mmol/L,甜菜碱最佳物质浓度为0.4 mmol/L,d NTPs最佳物质浓度为0.6 mmol/L,Bst DNA聚合酶最佳浓度为1.5 U/μL,60℃为最佳反应温度,60 min为最佳反应时间。采用CPA BCoV-N反应体系同时检测沙门菌、大肠埃希菌、弯曲杆菌、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒等犊牛腹泻相关病原,层析试纸条检测显示只有牛冠状病毒呈现检测线,未出现交叉反应。结果显示,CPA BCoV-N具有较高的特异性,CPA检测BCoV不需要昂贵的PCR仪器,简单的水浴或培养箱即可完成DNA扩增,封闭式核酸检测装置避免了气溶胶污染,对结果的判断更加直观客观,是一种简便、快速、灵敏的BCoV检测方法。  相似文献   

SSR分子标记技术及其在玉米种子鉴定上的应用   总被引：10，自引：2，他引：10  

周岚  陈殿元 《中国种业》2005,(6):51-52

近年来,分子标记的研究与利用得到了迅速的发展,对不同分子标记技术的选用,主要取决于应用目的和研究对象,理想的分子标记应既简单又可靠.  相似文献   

分解蔗渣的研究I.菌株的选育及其固态发酵条件的研究     

杨斌  吕燕萍  高孔荣  邓子新 《华中农业大学学报》1997,16(4)

从蔗渣腐烂域筛选出一株高纤维素酶活力的特异青霉（Ｐ．ｎｏｔａｔｕｍ）ＹＢ－５，经紫外线和亚硝基胍诱变，获得一突变株ＹＢ－７，其生长快，产孢子多且无毒性。并研究了碳源、氮源、金属离子和表面活性剂对产酶的影响。在正交优化的固体培养基和优化培养条件下，６０ｈ时ＣＭＣａｓｅ、ＦＰＡ和β－葡萄糖苷酶活力分别可达２９．４ＩＵ／ｍｌ、８．４０ＩＵ／ｍｌ和２５．１ＩＵ／ｍｌ。  相似文献   

分解蔗渣的研究：Ⅱ.特异青霉YB—7纤维素酶的性质研究     

杨斌  吕燕萍 《华中农业大学学报》1997,16(5):361-366

  相似文献   

南瓜SCoT-PCR反应体系的优化与引物筛选     

《中国瓜菜》2017,(1):12-17

为了构建适合南瓜SCoT-PCR反应的最佳体系,笔者对需要控制的5个变量使用L_(25)(5~6)正交试验设计。结果表明,最佳优化体系为:2.5 mmol·L~(-1)Mg~(2+)、0.40 mmol·L~(-1)dNTPs、0.5 U Taq酶、1.00μmol·L~(-1)引物、30 ng模板DNA,共20μL。然后从51个SCoT引物中筛选出多态性明显的引物20个,并优化最适退火温度。最后,对所得优化体系进行可行性验证。该体系有利于SCoT标记在南瓜材料上的应用,构建的优化体系及筛选出的引物可为南瓜分子遗传育种奠定基础。  相似文献   

基于公共数据库牙鲆EST-SSR的开发及特征分析     

《海洋渔业》2013,(2)

本研究对公共数据库中的15 268条牙鲆EST序列进行处理和分析。在917条EST序列中查找到SSR,出现频率为12.6%,分布密度为1/5.7 kb。优势重复基序为二核苷酸和三核苷酸重复,占63.5%和24.3%,并且分别以(AC)n重复(63.9%)和(AGC)n重复(15%)最多。基序重复次数以6次为最多,占24.0%。运用所得到的EST-SSR序列设计484对引物,经牙鲆群体验证,共获得了357对有效引物,占总引物数73.8%。研究结果为牙鲆及亲缘关系较近物种的EST-SSR标记的开发提供基础,同时也为后续遗传研究提供有效的分子标记。  相似文献   

应用cDNA微阵列芯片技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因的研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

邹丰才  吴绍强  廖申权  林瑞庆  李明伟  宋慧群  黄翠琴  朱兴全 《畜牧兽医学报》2006,37(2):163-167

采用cDNA微阵列芯片技术，从所构建的猪蛔虫雌、雄成虫cDNA消减文库分别挑取1044和1119个克隆，PCR扩增其插入片段，经纯化后点样于预先处理好的基片上（双点杂交），制备成cDNA微阵列芯片。将分别标记荧光素Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的雌虫和雄虫cDNA探针，与制备好的cDNA芯片杂交（平行进行反标杂交试验）。根据每个点杂交后的Ratio值，筛选出双点杂交和正反标中都同时具有表达差异的基因克隆共1559个。将表达差异最明显的前831个克隆进行测序，获得720个有效序列，经生物信息学分析发现，雄虫特异表达的主要精于蛋白和雌虫特异表达的卵巢信息蛋白的基因序列多数与新杆属线虫存在同源性，有31个可能是新的ESTs。性别差异表达基因及其相关生物信息的获得为下一步研究基因功能奠定了基础。  相似文献   

牛疱疹病毒I型二重LUX荧光PCR鉴别检测方法的建立     

陈茹刘琳琳  曾彩云曾碧健 罗琼曹永长  毕英佐 《中国兽医科技》2007,37(11):944-949

采用LUX新型荧光PCR技术原理，建立了快速检测牛疱疹病毒I型（BHV-1）以及鉴别野毒感染和基因缺失疫苗免疫动物的二重实时荧光PCR方法。结果显示，该方法对多株BHV-1病毒均呈典型gE、gC双基因阳性反应，对其他常见动物疱疹病毒以及健康牛基因组DNA等均呈阴性反应；对细胞增殖病毒液的gE、gC双基因鉴别的检测敏感性可达0．4～O．04TCID50比常规PCR方法高100倍以上；对带毒牛血清、抗凝全血、牛新鲜精液和冷冻精液基因鉴别的检测敏感性分别达0．04TCID50、0．4TCID50、0．4TCID50和4TCID50。采用该方法从临床牛血样、鼻拭子样品中检出IBRV阳性样品，检测全程仅需约2h。对单基因克隆质粒的检测进一步证实该方法能特异地鉴定gE、gC基因，检测灵敏度分别达90、30拷贝。结果表明，该方法可应用于临床快速诊断BHV-1病毒感染，鉴别BHV-1病毒感染与对应的基因缺失疫苗免疫动物。  相似文献   

噬菌体展示技术及其应用研究进展     

尹仁福  丁壮 《动物保健》2006,(9):15-17

噬菌体展示技术（Phage Dlsplay techniques，PDT）起源于1985年，是一种用于筛选和改造功能性多肽、蛋白质强有力的生物技术，广泛应用于研究蛋白质的结构与功能，蛋白质间的识别与作用，分离体内特异蛋白质与基因以及实验进化等多个分子生物学领域。目前噬菌体展示技术的研究进展非常迅速，在抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节分子的分离和人工抗体和疫苗的制备、诊断技术、酶抑制剂的研究开发、多肽药物的研制等生物技术研究的不同领域得到了应用，并对这些领域产生了深远的影响。  相似文献