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对已发表的戊型肝炎病毒(HEV)不同基因型毒株全序列进行分析,针对ORF3的保守区设计引物和探针优化建立了HEV荧光RT-PCR检测体系。分析表明该反应体系具有良好的扩增效率、特异性和稳定性,且检测灵敏度比普通RT-PCR方法高10～100倍。利用所建立的荧光定量PCR方法对采集自浙江及其周边上海、江苏等地区规模化猪场的样品以及HEV抗体阳性人血清样品进行了HEV核酸检测。其中,77份人血清样本仅有2份为HEV核酸阳性(2.6%)。而猪粪便样品阳性率则高达20.5%(56/273),且所调查的猪场均存在HEV感染。进一步的分子流行特征分析表明,浙江及周边地区的猪HEV毒株多为基因Ⅳ型,与其他地区的Ⅳ型HEV毒株同源性较高(83.4%～89.5%),但它们之间也存在较多的变异位点。猪源HEV毒株PJ-1则与多数Ⅲ型HEV毒株同源性较高(88%),进化分析也表明其为基因Ⅲ型。人血清样品中检测到的2份HEV毒株Human-1与Human-2与本地区Ⅳ型猪源毒株在分子进化关系上具有很高的亲源性,它们分布于同一分支内,而不构成独立分支。以上分析结果表明浙江及其周边地区猪HEV感染较为广泛,且以基因Ⅳ型毒株为主,但也存在... 相似文献
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猪戊型肝炎病毒大庆株DQ1全基因序列分析 总被引：5，自引：0，他引：5
本试验采用RT．-PCR的方法对戊型肝炎病毒大庆株（DQ1HEV株）的全基因进行分片段扩增，并对其两个末端采用末端快速扩增法（RACE）进行扩增、克隆，测序。与已报道的人的14株HEV的4个基因型的核苷酸和氨基酸进行比较，与IV型HEV的同源性最高。ORF1区与IV型HEV核苷酸的同源性为82．6％～83．6％．氨基酸同源性为93．5％，ORF2区与IV型HEV核苷酸的同源性为87．0％～88.4％，氨基酸同源性为95．8％～97．4％。ORF3区与IV型HEV核苷酸的同源性为94．4％～96．5％，氨基酸同源性为90.3％～96．5％。其结果表明DQ1 HEV株为IV型HEv。 相似文献
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在建立高效快速检测猪肝样品中戊型肝炎病毒(HEV)的RT-RPA检测新方法并调查分析锦州市零售猪肝中HEV的污染情况。试验以基因4型HEV参考毒株的ORF2/3保守序列为靶序列设计符合RPA检测的特异性引物,建立HEV RT-RPA检测方法,并评估该方法的敏感性及特异性。使用该方法与目前HEV RNA检测金标准RT-qPCR方法对锦州市零售猪肝中的HEV RNA进行同步对比检测,并配合HEV IgM ELISA检测,最终综合统计分析锦州市零售的猪肝被HEV污染的情况。结果显示,本次研究成功建立了HEV RT-RPA检测方法,该方法在39℃恒温条件下30 min即能完成扩增,具有良好的敏感性和特异性。本次研究共收集猪肝样品358份,HEV RNA阳性检出率为0.6%(2/358),该结果与参考方法一致。HEV IgM阳性检出率为44.13%(158/358)。试验结果表明,说明锦州市零售猪肝中普遍存在HEV污染。虽然在屠宰上市后的猪肝样品中检测到HEV RNA的概率较低,但仍然提示本地生猪产业链中HEV流行普遍,因此需要做好公共卫生防范。 相似文献
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为进一步了解广东省近年猪戊型肝炎病毒(HEV)基因组特点及其演化情况,本研究于2010年～2011年间从广东省不同地区猪场收集的69份病猪胆汁样品中,分离得到两株猪源HEV(命名为SS19和ZS11).采用通用引物通过PCR方法扩增病毒的全基因序列.应用DNAStar和MEGA 5基因分析软件,将分离株与24株不同基因型的HEV参考序列进行核苷酸全序列比对和遗传进化分析.结果显示,分离的两株猪源HEV SS19和ZS11的核苷酸序列相似性为95.6％,两个病毒分离株与基因Ⅳ型HEV各参考病毒株核苷酸序列最为接近,其相似性分别为83.2 ％～94.5％和83.6 ％～94.6％,并且均属于基因Ⅳ型HEV.实验结果表明,广东省HEV流行病毒株仍以基因Ⅳ型为主,病毒株之间存在一定的地域局限性. 相似文献
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在工业化国家,戊型肝炎病毒（HEV）的传播途径还是未知的,但许多研究结果表明,HEV可能是一种由猪引起的动物传染病。本试验旨在研究HEV在野猪中的患病率及野猪和家猪、人的HEV序列间的遗传关系。试验选取法国东南部的285头野猪,利用Real-time RT—PCR技术检测到有7头野猪（占2．5％）存在HEV RNA表达,其中5头野猪的HEV序列属于3f型,相互之间的核苷酸同源性为89％～100％,与从法国南部HEV患者身上提取的HEV同源性较近。因此,法国东南部野猪可能是人戊型肝炎的传染源。 相似文献
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免疫组织化学法检测北京地区牛肝脏中戊型肝炎病毒抗原 总被引：1，自引：0，他引：1
收集北京地区2月龄犊牛49份肝脏样品,34份血清样品,屠宰肉牛肝脏样品153例和60份屠宰牛血清样品。肝脏样品经戊二醛-多聚甲醛固定,包埋,切片,最后进行HE及免疫组化染色。肝脏HE染色结果显示,大多数的肝脏中均出现炎性细胞浸润及纤维组织增生。免疫组织化学染色结果显示,在49例犊牛肝脏样品中,阳性检出率为48.8%(24/49),而153例屠宰牛肝脏样品阳性检出率仅为13.7%(20/153)。血清样品HEV ELASA检测结果表明,34份犊牛血清中检测出1例阳性样品,阳性率为2.95%,60份屠宰牛血清样品检出阳性样品2例,占3.33%。 相似文献
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为进行国内猪戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒核苷酸序列,设计了1对扩增HEV衣壳蛋白(Y)基因的引物,利用RT-PCR等方法成功克隆出HEV甘肃分离株swCH189的Y基因cDNA片段,并与国内其他9株典型HEV分离株进行序列分析,用DNAstar软件进行序列同源性分析,PHYLIP软件绘制基因进化树。结果表明,swCH189株的Y基因与国内9株典型HEV分离株间的核苷酸序列同源性为79.6%～91.8%,推导的氨基酸序列同源性为91.4%～98.85%。基因进化树显示swCH189与基因Ⅳ型swCH25株亲缘关系最近,在同一分支上,属于基因Ⅳ型。 相似文献
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鸭病毒性肝炎是一种传播迅速并对雏鸭具有高度致死性病毒病,以肝炎为其主要特征。本文报道重庆地区雏鹅暴发鸭病毒性肝炎病例。疾病发生于3～14日龄雏鹅,发病率20%～30%,死亡率20%～25%,临死前出现角弓反张及病死鹅肝脏出血。利用RT-PCR能从肝组织中检测到鸭肝炎病毒A型(DHV-A)和C型(DHV-C)的VP1基因。利用鸭胚从肝组织中分离出A型病毒CQ1株和C型病毒CQ2株,二者人工接种能引起6～7日龄雏鹅出现典型临床症状与病变。这是首次报道A型和C型鸭肝炎病毒混合感染导致雏鹅发病死亡。 相似文献
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夹心ELISA和斑点杂交试验检测鸭血清中鸭乙型肝炎病毒的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
用单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ和斑点杂交试验分别对４６例鸭血清样品中的鸭乙型肝炎病毒表面抗原（ＤＨＢｓＡｇ）和鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ进行平行检测，并根据夹心ＥＬＩＳＡ测定的Ｐ／Ｎ值和斑点杂交试验的反应斑点进行薄层扫描所测定的峰面积值，比较了１９例带毒鸭血清中ＤＨＢｓＡｇ和ＤＨＢＶＤＮＡ的相对含量。结果表明，两种试验的结果判定具有高度一致性。ＤＨＢｓＡｇ与ＤＨＢＶＤＮＡ在带毒鸭血清中呈并存关系，但其含量相关不显著（Ｐ＞０．０５）。 相似文献
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旨在建立一种针对鸭甲肝病毒1型（DHAV-1）和鸭甲肝病毒3型（DHAV-3）的高效快速、高灵敏度和高特异性的双重TaqMan实时荧光定量PCR （q-PCR）检测方法并应用于临床疑似样品检测。根据DHAV-1和DHAV-3的VP1基因保守区域,分别设计合成了2对特异性引物和探针,在此基础上建立并优化了双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示：优化后标准曲线的相关系数（R2）均在0.999以上,扩增效率（E）在105%~110%,其组内变异系数（i-CV）与组间变异系数（c-CV）均在0.77%以下。运用双重q-PCR方法对不同稀释度的混合质粒与病毒核酸进行检测,结果表明,建立的双重TaqMan q-PCR特异性高;同时检测DHAV-1和DHAV-3的灵敏度均可达10个拷贝,分别是常规PCR方法的1 000倍和100倍。对40份来自苏中、苏北地区的疑似鸭肝炎病毒感染的鸭组织病料进行检测,结果表明,q-PCR方法检出36份阳性病料,阳性率为90%;而常规PCR方法未能检出高Ct值的样品,阳性率为72.5%（29份阳性病料）。建立的双重TaqManq-PCR检测方法为DHAV-1与DHAV-3的临床样品检测提供了高效、灵敏、特异的工具,推动了临床分子流行病学调查及病毒定量分析等研究。 相似文献
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邓宇 《中国预防兽医学报》2014,36(10)
为了解攀西地区山羊戊型肝炎的感染情况及流行特点,本研究利用双抗原夹心ELISA方法对凉山州和攀枝花地区采集的180份山羊血清进行戊型肝炎病毒(HEV)抗体检测.结果显示,攀西地区山羊HEV抗体总阳性率为26.11％ (47/180),其中规模化羊场阳性率为19.26％(26/135),散养羊群阳性率为46.67％(21/45),差异极显著(p＜0.01).按年龄划分,3岁以上、1～3岁、1岁以下阳性率分别为39.22％、23.29％、17.86％,3岁以上与1岁以下山羊HEV抗体阳性率差异极显著(p＜0.01).按性别划分,公山羊和母山羊的阳性率分别为33.74％(28/83)和30.59％(16/85),差异不显著.凉山州(30.93％)与攀枝花市(20.48％)山羊抗体阳性率差异不显著.检测结果表明,HEV在攀西地区山羊群中普遍流行. 相似文献
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The reported incidence of clinical hepatitis E cases is rising in some non‐endemic countries, with concurrent concerns regarding potential hepatitis E virus (HEV) contamination of the blood supply. Therefore, the characterization of major potential sources of human HEV exposure is important to inform risk assessment and public health policy. A systematic review was conducted, including a comprehensive search in six electronic bibliographic databases, verified by hand‐searching reference lists of HEV reviews, and a grey literature search, of the broad research question ‘what is the evidence of the association between predictors of human HEV exposure, and HEV IgG seropositivity, in non‐endemic countries?’ Using forms designed a priori, captured studies were appraised at first‐level screening, second‐level characterization, and third‐level data extraction and risk of bias assessment. Meta‐analysis yielded summary estimates of association between potential predictors and odds of HEV seropositivity. Meta‐analysis and meta‐regression of the odds of HEV seroprevalence in specific groups characterized potential sources of HEV exposure. From 4,163 captured citations, 245 relevant studies underwent data extraction, investigating HEV seroprevalence or predictors in both healthy subjects and targeted patient groups. Across these groups, increasing age was a predictor of HEV IgG seropositivity. Both human immunodeficiency virus patients and haemodialysis patients had significantly increased odds of HEV seropositivity relative to the general population. Working with pigs, in forestry, or in hospitals, was significantly associated with increased odds of HEV seropositivity, as were consumption of meat, pork or game meat, or hunting. Chronological time was not associated with HEV seropositivity within our data sets. Further study of the distribution of potential dietary or behavioural predictors between high and lower prevalence areas within non‐endemic countries could improve our understanding of the relative importance of specific HEV transmission pathways. 相似文献
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雏鸭病毒性肝炎的分离与初步鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
取北京郊区某鸭场的病鸭肝脏制备病料,通过9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔接种,结果显示所分离的毒株能使鸡胚发育迟缓、胚爪发育畸形、肝脏变绿。分离病毒回2日龄健康雏鸭进行动物试验,能使雏鸭在2~3 d内100％发生死亡,其发病症状及剖检病理变化与自然发病的小鸭一致。分离毒株对氯仿不敏感。病毒接种于鸭胚成纤维细胞后没观察到明显的CPE。血清中和试验表明分离病毒能被I型DHV标准血清所中和,证明分离的野毒株血清型为I型DHV,且毒力很强。 相似文献
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鸭肝炎病毒单克隆抗体的研制 总被引：1，自引：0，他引：1
以反复冻融、氯仿处理、滤膜过滤、PEG反透析浓缩和分子筛层析的方法纯化DHV免疫BALB／c小鼠，同时作为包被抗原建立了筛选抗DHV阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法，经特异性和重复性试验，效果良好。经一系列融合、筛选，成功获得阳性杂交瘤细胞株4株，并制备出了腹水，分别命名为285、2E8、5E6和6C11。特性鉴定结果表明4株单抗ELISA效价均比较高且特异性好，中和特性稍差，和两株Ⅰ型标准毒以及在山东分离到的几株病毒均有交叉反应。 相似文献
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