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1.
高伟 《畜牧兽医科技信息》2003,(2)
江苏畜牧兽医职业技术学院陆桂平等,以K88~+菌毛结构基因保守序列为靶序列,设计合成一对可扩增长201bp的目的片段引物,成功地建立了检测肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88菌毛基因的PCR方法。进行了PCR方法的特异性试验和敏感性试验。对K99~+、F41~+,987P~+参考菌株和鼠伤寒沙门氏菌, 相似文献
2.
检测987p^＋肠毒素性大肠埃希氏菌PCR方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
以987p菌毛结构基因保守序列为靶序列，设计合成了1对可扩增459bp目的片段的引物，建立了检测肠毒素性大肠埃希氏菌987p菌毛基因的PCR方法。该方法对K88^ ( 为菌毛阳性）、K99^ 、F41^ 参考菌株和链球菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的检测结果均为阴性；该方法的敏感度可达10^2CFU，对20株腹泻仔猪粪例分离物进行检测，有1株为阳性，与血清学检测的结果一致。结果表明，此方法特异性和敏感性都很高，可用于临床987p肠毒素性大肠埃希氏菌病的快速诊断和流行病学调查。 相似文献
3.
为制备针对一些大型养猪场产肠毒素性大肠杆菌(enterotrxigenic Escherichia coli,ETEC)分离株的特异性卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY),试验对从这些养殖场分离的ETEC分离株菌毛基因类型进行了PCR鉴定,纯化该分离株的菌毛蛋白免疫蛋鸡制备IgY,对该IgY的效价、特异性和体外抑菌效果进行了检测。结果表明,该分离株具有K88和987p 两种菌毛基因,纯化后的分离株菌毛具有较强的免疫原性,经3次免疫后产生的IgY对K88和987p全菌和菌毛的效价可达到1:64 000,分离株菌毛IgY能特异地与K88和987p反应,与K99、F41无交叉反应,5 mg/mL分离株菌毛IgY在体外具有很好的抑菌效果。 相似文献
4.
为了对猪源产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）的4种主要菌毛（K88、K99、F41和987p）进行快速检测和分型，建立了检测4种菌毛的多重PCR方法。首先设计合成4对4种菌毛特异性的引物，然后用4种菌毛参考ETEC菌株优化了多重PCR方法。该方法对K88、K99、F41和987p 4种菌毛的扩增产物分别为201，314，380和459bp。对4种扩增产物分别进行酶切鉴定，结果均得到与预期一致的2个片段。对各个参考菌株不同组合的检测结果为100％符合。结果表明，该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性，可用于ETEC性腹泻的辅助诊断及ETEC菌毛抗原分型检测。 相似文献
5.
猪产肠毒素性大肠杆菌野生株K88菌毛蛋白结构基因的克隆与序列测定 总被引：1，自引：0，他引：1
根据报道的猪产肠毒素性大肠杆菌阳8茵毛结构基因DNA序列，在其保守区用Goldkey软件设计了1对引物，经PCR扩增从20株野生分离株质粒中得到17个大小在815bp左右的阳性产物，经纯化、连接、转化、筛选及核酸序列测定与分析，确认所克隆的外源基因与报道的K88菌毛(亚单位K88ab、K88ac、K88ad)蛋白结构基因序列一致，表明该菌毛蛋白结构基因的保守区间没有发生变异。 相似文献
6.
牛产肠毒素大肠杆菌毒力因子多重PCR检测方法的建立 总被引：6，自引：1，他引：6
通过多重PCR扩增产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigentic E.coli，ETEC）的毒力因子F41菌毛、K99菌毛和STa肠毒素的编码基因来检测和鉴定ETEC。试验中对影响PCR扩增的dNTP、Mg^2＋、引物浓度以及退火温度等因素进行优化，在优化条件的基础上，确定多重PCR的特异性和灵敏性，以此建立同时检测ETEC多个毒力因子的多重PCR方法。用该方法对分离于犊牛腹泻和犊牛肠毒血症的7株大肠杆菌进行检测，结果2株为F41、K99和STa阳性，4株为F41、STa阳性，1株为K99STa阳性。这与玻片凝集试验检测菌毛的结果一致。试验表明，该方法特异性强、敏感性高、简便、快速，适用于临床鉴定和检测牛ETEC菌株。 相似文献
7.
为建立以彩色二氧化硅微球(CSN)为载体,快速检测产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)菌毛K88ab、K99、987p和F41的新型凝集技术,本研究采用反相微乳液法制备二氧化硅微球,将其与菌毛单因子血清偶联制成免疫彩色二氧化硅微球(ICSN),通过优化反应条件建立了快速检测ETEC菌毛的方法。特异性试验结果显示,ICSN只与携带其对应菌毛的菌株发生反应,与携带其它菌毛的菌株无交叉反应;敏感性试验结果显示菌液的最小检出浓度为1.0×10~6cfu/m L~5.1×10~6cfu/m L;稳定性试验显示4℃保存30 d,ICSN特异性、敏感性无明显变化;双盲样品检测准确率为100%。本研究有助于ETEC菌毛的快速检测和幼畜大肠杆菌性腹泻的诊断。 相似文献
8.
为快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌毛(K88和K99)和毒素(STa)基因,本研究设计合成了针对K88、K99和STa基因的3对特异性引物,对K88、K99和STa基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、K99和STa的多重PCR方法.该方法对Kss、K99和STa基因的扩增产物分别为237 bp,314 bp和166 bp;此外,该方法具有良好的灵敏性和特异性.本实验建立的多重PCR方法为致幼畜腹泻ETEC的检测提供了快速准确方法.用所建立的多重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果2株为K99/STa阳性,1株为STa阳性. 相似文献
9.
为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314 bp;最终确定dNTP终浓度0.4 mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25 μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。 相似文献
10.
《中国兽医杂志》2016,(4)
为建立一种简单、快速、灵敏、准确的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)检测方法,根据产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88)和毒素(STa和LT)基因分别设计合成了1对引物,对K88、STa和LT基因扩增条件进行优化,建立了检测K88、STa和LT的三重PCR方法。该方法对K88、STa和LT基因的扩增产物分别为499 bp,190 bp和373 bp;此外,该方法具有良好的灵敏性和特异性。本实验建立的三重PCR方法为致幼畜腹泻ETEC的检测提供了快速准确方法。用所建立的三重PCR方法对实验室从临床腹泻样品中分离的120株大肠杆菌进行检测,结果 9株为K88/LT/STa阳性,14株为K88/LT阳性,21株K88/STa阳性,13株LT/STa阳性,8株K88阳性,2株LT阳性,12株STa阳性。 相似文献
11.
为建立一种可以同时扩增大肠杆菌(E.coli)F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因保守序列的多重PCR检测方法,本研究设计合成5对分别针对F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的特异性引物,以具有相应菌毛基因的E.coli参考菌株DNA为模板,通过对多重PCR反应条件的优化,建立了检测F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的多重PCR方法。所建立的多重PCR方法能够特异性扩增F4、F5、F6、F41、F18菌毛基因的目的片段,大小分别为770 bp、533 bp、422 bp、643 bp和1140 bp,该方法对沙门氏菌、猪丹毒杆菌、巴氏杆菌以及无菌毛基因的E.coli等参考菌株均无特异性扩增片段,检出F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的最低活菌浓度分别为5.3×10^5cfu/mL、3.7×10^6cfu/mL、3.1×10^5cfu/mL、3.7×10^7cfu/mL、6.9×10^5cfu/mL。用不同批次的引物和试剂进行3次多重PCR检测均能扩增出目的条带,表明建立的多重PCR方法有很好的批内和批间重复性。对90株大肠杆菌临床分离菌株菌毛基因进行检测,F4阳性率为3.33%,F5阳性率为2.22%,未检测到F6、F41和F18阳性菌株,其检测结果与常规单一PCR的检测结果一致。研究表明:建立的E.coli菌毛基因多重PCR分型方法具有很好的特异性、敏感性和重复性,可用于E.coli分离菌株菌毛基因型的快速鉴定,同时提高了检测效率。 相似文献
12.
PCR技术在鼠金黄色葡萄球菌检测中的初步研究 总被引：5，自引：0，他引：5
根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列 ,设计并合成一对特异性的引物 ,利用PCR技术扩增nuc基因片段。对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增。结果金黄色葡萄球菌PCR产物出现 6 6 8bp的特异性DNA扩增片段 ,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段 ,证实了合成的引物对金黄色葡萄球菌具有特异性。将抽提的金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释 ,测定此PCR体系的敏感性。结果显示 ,该PCR体系能检出 3pg金黄色葡萄球菌DNA ,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需 4h。因此 ,研究所建立的扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌的PCR方法 ,具有快速、可靠、敏感和特异的特点 ,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时的检测 ,适合应用于实验大小鼠的监测 相似文献
13.
动物性食品源大肠杆菌O血清型鉴定及其K88菌毛基因检测 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究对河北省冀东地区农贸市场和超市采集的生猪肉、生鸡蛋和生羊肉等分离得到的20株大肠杆菌进行大肠杆菌血清型鉴定;并检测不同血清型大肠杆菌的K88菌毛基因。采用常规方法进行大肠杆菌的O血清型鉴定,用PCR方法检测K88菌毛基因。分离鉴定的20株大肠杆菌有7种血清型,包括O38、O78、O88、O11、O107、O91、O9,其中O38、O78为优势血清型菌,均占分离菌株的25%(5/20)。在分离的动物性食品源大肠杆菌中有30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增呈阳性。结果表明,O78、O38为冀东地区动物性食品源大肠杆菌常见血清型,30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增阳性。 相似文献
14.
The phenotype of 21 weaned piglets, concerning adhesion of Escherichia coli possessing K88ab, K88ac or K88ad fimbriae to pig cells, was determined in an in vitro assay. Comparison was made with adhesion of these three K88 variant strains to buccal mucosal epithelial cells and to erythrocytes (haemagglutination) in the same piglets. Whereas adhesion of the three K88 variant strains to intestinal villi was piglet specific, buccal cell adhesion (BCA) and haemagglutination (HA) were not. The K88ab strain was weakly adhesive or non-adhesive in the BCA and negative in the HA test. K88ac strains consistently gave negative and K88ad consistently gave positive results in both assays. After washing the bacteria with phosphate-buffered saline, the K88ab strain revealed a positive HA test. Neither the BCA, nor HA test can be used to determine the pig intestinal adhesive phenotype. 相似文献
15.
本研究旨在建立一种快速鉴定致猪水肿病大肠埃希菌的多重PCR检测方法.分别针对大肠埃希菌16S rDNA、志贺毒素Stx2e A亚基和菌毛F18ab A亚基保守序列设计合成3对特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性检测.结果显示,阳性对照菌株扩增产物大小分别为1 062、733和313 bp.特异性和灵敏性检测结果表明,与肠炎沙门菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、支气管败血波氏杆菌和猪链球菌等猪常见致病菌均无交叉反应;菌体直接扩增法最低检出量为1 875 CFU.利用建立的多重PCR检测方法对分离收集的128株大肠埃希菌进行鉴定,得到36株致猪水肿病大肠埃希菌,其中30株既有菌毛F18ab又产志贺毒素Stx2e,另外6株仅产志贺毒素Stx2e.结果表明,本试验所建立的多重PCR检测方法对致猪水肿病大肠埃希菌的快速诊断和流行病学调查具有一定的应用价值. 相似文献
16.
The P fimbriae F11 and F165 that have been demonstrated on Escherichia coli septicaemic strains in poultry and calves, respectively, possess a nearly identical major subunit that demonstrates a serological cross-reaction. A polyclonal antibody-based sandwich ELISA (sELISA) that was specific for both F11 and F165 fimbriated strains was compared with a PCR method to detect F11/F165 fimbriated strains, in a collection of E. coli strains isolated from diseased animals. Of 298 isolates tested, 36 were positive by PCR of which only 14 were sELISA positive. There were no sELISA positive but PCR negative results. The 36 PCR positive isolates comprised 11 avian strains of which 10 were sELISA positive, 20 bovine strains of which 4 were sELISA positive and 3 ovine strains, 1 porcine strain and 1 equine strain all of which were sELISA negative. The F11/F165 incidence of 10.7% in 103 poultry and 18.3% in 109 bovine isolates demonstrates a moderate level of these factors in E. coli septicaemic cases in Northern Ireland. 相似文献
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4型菌毛、毒素及蛋白酶在动物源气单胞菌的检测 总被引：1，自引：0，他引：1
将来源于鱼、猪、犬等９种动物的１８株气单胞菌分离株通过ＡＤ（氨苄青霉素－糊精）培养基纯化。另以大肠杆菌束状菌毛相关（ｂｆｐ－ｒｅｌａｔｅｄ）基因的ＰＣＲ引物对ＥＢ１（ＧＡＴＴＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＧＴＧＣ）—ＥＢ２（ＧＧＡＴＴＡＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＡＴＡＴ）扩增,用ｄｉｇｏｘｉｎｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ标记,构建核酸探针,作斑点杂交试验,用以检测上述气单胞菌菌株的４型菌毛,同时以溶血试验检测其毒素,用脱脂奶溶蛋白圈试验检测其蛋白酶。结果显示,在１８个菌株中,４型菌毛、毒素和蛋白酶均为阳性者为１０株（５５．６％）;３项指标均无肯定的阳性结果者４株,两者合计共１４株,占检测总数约８０％（１４／１８）,提示这３种毒力因子存在较高的相关性。所有鱼源株（５株）三项指标皆为阳性;４株猪分离株三项指标均为阳性者占一半;其它动物分离株检测结果无明显规律性 相似文献