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为了构建Ⅰ型鸭肝炎病毒双拷贝VP1基因的原核表达质粒,试验采用RT-PCR技术扩增鸭肝炎病毒VP1基因,将其连接到克隆载体pGEM-T Easy中得到重组克隆质粒pGEM-T-VP1,阳性克隆质粒经鉴定正确后,分别用BamHⅠ、XholⅠ、BglⅡ进行酶切,重组后得到pGEM-T-2VP1,然后将双拷贝VP1基因亚克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,得到重组质粒pET-30a(+)-2VP1。结果表明:得到了含有目的基因的阳性克隆。说明Ⅰ型鸭肝炎病毒双拷贝VP1基因原核表达质粒构建成功。 相似文献
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口蹄疫病毒O／China／99株VP1基因植物种子特异性表达载体的构建及农杆菌的导入 总被引：4，自引：0，他引：4
根据植物组成型表达质粒pBin438的限制性酶切位点及FMDV VP1的核苷酸序列设计并合成引物，从种子特异性启动子7S质粒pU8—2质粒中扩增7S启动子，经HindⅢ和BarnHⅠ酶切，与经同样双酶切的植物组成型表达载体pBin438大片段连接，经酶切、PCR鉴定及序列分析，种子特异性表达载体p7SBin438构建完成。从FMDV VP1基因的pGEM—VP1质粒中扩增VP1基因，经BarnHⅠ和SalⅠ双酶切后，与p7SBin438质粒酶切后的大片段连接，经酶切、PCR及测序鉴定，FMDV VP1基因已置于种子特异性启动子7S下游，成功构建了FMDV VP1基因的种子特异性表达载体p7SBin438-VP1。通过三亲交配法，将表达载体p7SBin438-VP1导入根癌农杆菌，为研究FMD可饲疫苗奠定了基础。 相似文献
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采用PCR技术，从大肠杆菌K99中扩增出0．54kb的K99菌毛抗原基因，然后将其克隆到pUCm—T载体上，用Bgl Ⅱ鉴定K99插入的方向并测序。选择目的基因片段插入方向正确的重组质粒经BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切后，通过T4连接酶与同样经BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切合成的耐热肠毒素ST Ⅰ核苷酸序列连接，通过PCR方法鉴定分析和核苷酸序列测序分析，证明插入的K99-ST Ⅰ融合基因片段具有正确的核苷酸序列。 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(9):1476-1483
参考GenBank中登录的猪细小病毒(PPV)(M38367.1)基因序列,设计1对可以扩增出约1.6kb PPV VP2基因片段的特异性引物,上、下游引物的5′端均引入BamHⅠ酶切位点,PCR扩增得到VP2目的片段后,连接到pMD18-T载体中得到重组质粒pMD-VP2。取本实验室构建的含绿色荧光蛋白标记基因的伪狂犬病毒(PRV)通用转移质粒pG和构建好的pMD-VP2质粒,用BamHⅠ对质粒pG和pMD-VP2进行酶切,然后用CIAP对酶切产物进行去磷酸化处理,纯化回收后将VP2基因插入pG质粒中获得重组伪狂犬病毒转移质粒pGVP2。用脂质体转染法将PRV HB-98株全基因组与质粒pGVP2共转染ST细胞,得到携带有PPV VP2外源抗原基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组伪狂犬病毒rPRV-VP2株。结合VP2基因PCR扩增和绿色荧光观察,经5轮病毒空斑纯化得到了纯化的重组病毒rPRV-VP2株。 相似文献
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猪轮状病毒国内分离株JL94 VP7基因克隆与真核表达质粒的构建 总被引：3，自引：1，他引：2
用MA104细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株JL94。利用一对根据Genebank中已发表的轮状病毒VP7基因cDNA序列而设计并合成的引物，通过逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）从JL94毒株扩增出VP7基因全长cDNA。将其插入pMD18-T载体中，构建了重组质粒pMD18-T-JL94/VP7,并对其进行了HindⅢ，HindⅢ和BamH I的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定，证明pMD18-T-JL94/VP7的插入基因为轮状病毒的VP7基因。重新设计一个带有Kozak序列的上游引物，通过PCR扩增出带有Kozak序列的vp7基因并将其插入pMD18-T载体中构建了重组质粒pMD18-T-VP7,酶切鉴定其大小和方向后，与真核表达载体pcDNA3.1( )分别用HindⅢ和BamH I双酶切，胶回收纯化后连接。经酶切和核苷酸序列检测鉴定，成功地构建了真核表达质粒pcDNA-VP7。 相似文献
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经PCR、克隆鉴定、酶切获得PPVZ带有PvuⅡ酶切位点的TK1基因片段。将带有PvuⅡ酶切位点的TK1基因片段与经相同酶切的PUC19载体片段连接,获得重组质粒PUC19-Z。用限制性内切酶NcoⅠ对阳性重组质粒PUC19-Z进行单酶切(TK基因内存在一个NcoⅠ位点),经PCR、克隆鉴定、酶切获得质粒pGJP-5带有NcoⅠ酶切位点的P7.5基因片段,将此片段与经同样酶切的PUC19-Z连接,经酶切和PCR鉴定,筛选出正向插入的重组质粒即为鸽痘病毒插入载体。 相似文献
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根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的包含有EcoRV和xhoⅠ酶切位点的引物，用该特异性引物从Ⅰ型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1，以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体，经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆，测序证明目的基因正确插入了表达载体，转化宿主菌RossetaⅡ，用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达，收集菌液进行SDS-PAGE电泳，Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明，VP1在大肠杆菌RossetaⅡ中表达量较高，表达产物的分子量约为48ku、并能被Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清所识别。Ⅰ型鸭肝炎病毒VPI蛋白在大肠杆菌RossetaⅡ中表达产物具有免疫原性。 相似文献
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利用反转录－聚合酶链反应（RT－PCR）扩增出A群猪轮状病毒（PRV）G5型OSU株长度约为1．0kb的基因片段，将其克隆到pMD18-T载体上进行测序鉴定，证明为该PRV的VP7蛋白基因，与已发表的该PRV，VP7基因序列的同源性为99．8％，将该基因黏端克隆至表达载体PblusBAChis C质粒中，酶切及PCR鉴定表明获得了PRV－VP7蛋白基因与PblueBAChisC质粒的阳性重组子，纯化该重组质粒并与线性杆状病毒DNA分子Bac-N-Blue共转染昆虫细胞sf9,5d后收获重组病毒，通过对重组杆状病毒DNA分子的酶切及PCR鉴定，确定PRV－VP7基因已正确投入，将经3次蚀斑筛选纯化后的该重组杆状病毒接种于sf9细胞大量增殖后，获得了重组杆状病毒PRV－VP7蛋白的真核表达。 相似文献
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提取亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒总RNA，用特异性引物通过RT—PCR反应获得了约750bp的核酸片段，将其与pGEM—T Easy载体连接，并转化大肠埃希氏菌JM109。重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序，证明所克隆的片段含有完整的VP1基因；将重组质粒与表达载体pcDNA3．1( )分别用Barn HⅠ和Eco RⅠ双酶切后连接，构建成重组表达质粒，转化宿主菌DH5α，筛选阳性克隆。测序结果证明，目的基因正确插入到表达载体中，命名为pcDNAV；用同样方法将IL-18基因插入pcDNAV中，命名为pcDNAVI。用pcDNAVI免疫豚鼠，2周后加强免疫1次，每周用ELISA检测豚鼠血清中的抗体水平。结果表明，pcDNA VI可引发机体产生体液免疫。 相似文献
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本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。 相似文献
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以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。 相似文献
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本试验旨在研究两种绿头鸭（白羽绿头鸭和绿头鸭）肌肉营养组成和价值,为绿头鸭肉产品的开发利用提供基础数据和理论依据。选择白羽绿头鸭和绿头鸭60只（每个品种各30只,公母各半）,依照国家标准测定胸肌粗蛋白质、粗脂肪、胆固醇含量及氨基酸、脂肪酸、微量元素和维生素的组成和含量,并对胸肌进行氨基酸评价及脂肪酸营养价值评价。结果显示,白羽绿头鸭肌肉粗蛋白质含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;两种绿头鸭肌肉中均检测到17种含量大于0.01%的氨基酸,其中白羽绿头鸭肌肉苏氨酸、组氨酸、丝氨酸和脯氨酸含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,赖氨酸、谷氨酸和精氨酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到13种含量均大于0.01%的脂肪酸,其中白羽绿头鸭硬脂酸和油酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到9种矿物质元素（钠、镁、钾、钙、锰、铁、铜、锌和硒）,两种绿头鸭差异不显著（P>0.05）;检测到8种维生素,白羽绿头鸭肌肉维生素B1含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,维生素D和维生素E含量显著低于绿头鸭（P<0.05）。两种绿头鸭肌肉氨基酸比例接近世卫组织推荐的理想模式,富含人体所需的矿物质元素和维生素,具有广阔的开发利用前景。 相似文献
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应用光镜和透射电镜技术，观察了3～6月龄比格犬甲状腺的显微和超微结构。结果表明，比格犬甲状腺实质由滤泡和滤泡旁细胞构成。滤泡呈圆形或椭圆形，直径20．22～220．00μm，平均90.80μm；由单层立方上皮细胞围成，细胞高度3．04～7.11μm，平均5.18μm，电镜下可见功能状态不同的两型滤泡上皮细胞；滤泡旁细胞很多，直径4．40～8．82μm，平均6．23μm，位于滤泡之间或镶嵌于滤泡上皮细胞之间，也可聚集在一起形成滤泡样结构，胞质内含有大量的分泌颗粒，电镜下也可见两种类型的滤泡旁细胞。 相似文献
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R. Cole J. Schumacher R. Wilhite J. Newton J. Schumacher 《Equine Veterinary Education》2014,26(2):93-97
The accuracy of a technique for centesis of the bicipital bursa using a 9 cm, spinal needle inserted through the tendon of the biceps brachii muscle was evaluated. A veterinary radiologist who had no previous experience of performing centesis of the bicipital bursa and an equine clinician who had little experience in performing the procedure, attempted to inject a solution of aqueous radiopaque contrast medium into the bicipital bursae of 8 horses using an approach in which the bursa was accessed by directing a needle through the tendon of origin of the biceps brachii muscle until cartilage in the lateral portion of the intertubercular groove was contacted. Centesis of the bicipital bursa using this approach in horses having no signs of disease of the bursa was consistently successful if the cubital joint was flexed and the scapulohumoral joint extended. 相似文献
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莱克多巴胺属于β-兴奋剂,在动物性产品中残留量过高会危害人类健康。本试验采用酶联免疫法来检测甘肃部分地区猪肉中莱克多巴胺的残留量,根据酶联免疫试剂盒检测出猪肉中莱克多巴胺的检出限为24 μg/kg,以莱克多巴胺的6种标准品测得莱克多巴胺的标准曲线,以此检测甘肃部分地区猪肉中莱克多巴胺的残留量是否超出检出限,并分析不同地方莱克多巴胺残留量存在差异性的原因。 相似文献
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杨传兰 《四川畜牧兽医学院学报》2008,(1):29-32
随着社会的发展,不作为侵权责任承担的研究成为必要,文中以不作为侵权责任承担的法理基价值础作为切入点,从义务-责任原理和社会价值方面探讨了不作为侵权责任承担的基本理论,分析了其承担责任的构成要件,进而提出了一些不成熟的建议,以期对我国的侵权行为法的研究有所裨益。 相似文献
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魏静 《四川畜牧兽医学院学报》2009,(4):28-32
在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。 相似文献