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大肠杆菌(Escherichia coli)K12基因组中,仅dctA基因编码1个在有氧条件下负责摄取四碳-二羧酸的转运蛋白。为鉴定Dct A能否摄取四碳-2-羟基羧酸(如苹果酸),首先以p KD3为模版PCR扩增含有氯霉素抗性dctA基因同源臂,电转入E.coli K12/p KD46感受态细胞,筛选具有氯霉素抗性的基因敲除突变株E.coliΔdctA/p KD46。通过消除质粒p KD46构建大肠杆菌dctA基因敲除突变株E.coliΔdctA。构建dctA基因表达载体p Easy T3-dctA。通过苹果酸摄取功能互补试验,证实基因敲除菌株E.coliΔdctA丧失摄取苹果酸功能,四碳-二羧酸摄取蛋白Dct A具有摄取苹果酸功能。研究首次报道Dct A具有摄取苹果酸功能,该基因敲除突变株的构建可为其他菌株来源2-HCT转运蛋白的基因克隆与功能分析奠定基础。 相似文献
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以E. coli DH5α为出发菌株采用pKD46质粒提供λRed重组系统完成以下三步基因敲除：大肠杆菌中RND超家族多药物抗性蛋白acrAB基因并借助其与pKD3质粒的氯霉素抗性片段同源重组被敲除；大肠杆菌中MATE家族多药物抗性蛋白ydhE基因通过卡那霉素抗性筛选和蔗糖反向筛选被无痕敲除；大肠杆菌中主要负责诺氟沙星外排的MFS超家族转运蛋白mdtH基因通过与pK18mobSacB质粒中的抗性片段的同源重组被敲除。以上基因敲除不同程度导致大肠杆菌对诺氟沙星的敏感性变化，最终获得诺氟沙星敏感性为0.0125μg·mL-1的E. coli KYAH06，为大肠杆菌MdtH详细转运机制以及其他诺氟沙星外排转运蛋白鉴定和功能分析奠定试验基础。 相似文献
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为在大肠杆菌全基因组范围内筛选和鉴定与喹诺酮类抗生素耐药性相关的基因,通过对临床分离的13株大肠杆菌进行药敏试验,选择耐药谱较广泛的菌株作为研究对象,利用Mariner转座子对其基因组进行随机突变,获得转座子突变株文库,并以亲本菌株为对照筛选文库中对喹诺酮类抗生素敏感的突变体,通过套式PCR、核苷酸测序及序列比对确定突变株中转座子的插入位点及其破坏的基因。结果表明:从突变株文库中筛选得到22株分别对诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、萘啶酸敏感的突变株,其中7株对4种抗生素都敏感;插入位点分析发现,抗生素敏感突变株中被转座子破坏的基因包括ecs4206(磷酸核酮糖激酶)、ecs3959(β-D-半乳糖苷酶β亚基)、ecs3946(假定蛋白)和ecs1857(DNA结合转录调控因子)。筛选出的基因可被开发为控制或扭转大肠杆菌耐药性的作用靶点。 相似文献
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为更好地了解鸡源致病性大肠杆菌对四环素类抗生素的耐药性及耐药基因分布,从陕西省部分规模化养鸡场的病、死鸡中经分离鉴定得到158株致病性大肠杆菌。采用K-B药敏纸片法检测致病性大肠杆菌分离株对4种四环素类药物的药敏性,PCR方法检测3种四环素类耐药基因,用DNAStar软件对获得的耐药基因序列与GenBank中的相关序列进行比对。结果显示,鸡源致病性E.coli分离株对四环素、金霉素、土霉素以及多西环素的耐药率分别为88.6%、77.2%、87.3%、50.6%,3重以上耐药菌株占78.5%。四环素类耐药基因tetA、tetB的检出率分别为81.4%、20.7%,未检测到tetC基因。结果表明,鸡源致病性E.coli对四环素类抗生素普遍具有耐药性,且以多重耐药为主;耐药基因tetA的检出率与其耐药性呈正相关。 相似文献
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采用纸片琼脂扩散法检测扬州地区淋病奈瑟菌临床分离株对常用抗生素的耐药性,并研究耐药基因的定位和转移机制。对耐药菌株YZ1008分别提取染色体DNA和质粒DNA,用PCR技术检测氨苄青霉素抗性基因的定位,含抗性基因的质粒DNA转化大肠埃希菌敏感株,观察大肠埃希菌耐药性的变化。结果表明:淋病奈瑟菌扬州分离株对受试的11种抗生素具有严重的耐药性,氨苄青霉素耐药基因在染色体DNA和质粒DNA上都存在,质粒耐药基因的转移可使大肠埃希菌DH5α获得氨苄青霉素抗性。这为淋病奈瑟菌耐药性防控研究积累有益数据。 相似文献
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河南省鸡致病性大肠杆菌耐药性质粒的研究 总被引：9，自引：0，他引：9
对河南省32个县市的93株鸡致病性大肠杆菌进行耐药性质粒的分析,并对其中12株100%耐庆大霉素(GM)的菌株进行耐药质粒的转化试验,成功获取了2个转化子。质粒检测结果表明:93株鸡致病性大肠杆菌可以分为49种质粒图谱类型,质粒电泳条带最多6条,最少1条,其中质粒图谱为1条条带的菌株占测试菌株的45.16%;同一地区、同一鸡场菌株的质粒图谱相同或相似,不同地区菌株的质粒图谱不同,但它们之间会有相同或相近的少量流行质粒存在。质粒转化结果表明:同一质粒可编码1个至数个抗药性基因,不同质粒可以携带相同或不同的抗性基因,证明了质粒可以传递多种耐药性,细菌的抗药性与抗药性质粒的转移有很大关系。 相似文献
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目的对1株从患者标本分离出的具有耐药性的微小脲原体hebnu3h07进行全基因组测序和生物信息学分析,为深入研究微小脲原体的基因组学特征及耐药机制提供依据。方法对从临床分离的微小脲原体hebnu3h07株进行培养鉴定并进行药敏试验,采用Ion torrent高通量测序技术对其进行全基因组测序,再使用相关软件对测序数据进行基因组组装、基因预测与功能注释、共线性分析、直系同源簇(COG)聚类分析、菌株分型和介导耐药的相关基因检测分析。结果微小脲原体hebnu3h07株对数种抗生素表现出不同程度的耐药性,其完整基因组大小为723 292bp,GC含量为25.4%,与现存3株微小脲原体完整序列比对发现其基因组序列较为保守,多位点序列分型属于ST1型,对介导耐药的基因检测发现数个突变位点。结论通过对此株抗生素耐药的微小脲原体的全基因组测序和导致耐药的基因位点分析,丰富了我国微小脲原体基因组数据,为微小脲原体的耐药机制研究提供了依据。 相似文献
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以金色链霉菌J13基因组DNA为模板,扩增金霉素C6甲基化酶基因ctcF上下游序列作为两端同源交换臂,在两臂之间添加抗性筛选标记neo基因,并在该基因上游加入组成型强启动子ermE*,以强化筛选标记.将该外源DNA序列插入到质粒pSET152,构建重组质粒pFD106.转化大肠杆菌ET12567后,经接合转移导入金色链... 相似文献
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《山东农业科学》2017,(9)
为检测山东2016年动物源大肠杆菌的抗药情况,并分析多抗高抗菌株间基因重复一致序列PCR(ERIC-PCR)基因图谱,探讨多抗高抗大肠杆菌ERIC-PCR基因分型与抗药性之间的关系,从患病动物中分离并鉴定猪源和禽源大肠杆菌110株,用琼脂稀释法测定其对10种抗生素的抗药情况,并从中挑选20株多抗高抗大肠杆菌进行ERIC-PCR,根据DNA指纹图谱进行聚类遗传分析。结果表明,猪源大肠杆菌对多类抗生素具有抗药性,对氟苯尼考、多西环素和氨苄西林的抗药率达100%,对头孢噻肟抗药率较低,为57.14%;禽源大肠杆菌也具有高度抗药性,对氟苯尼考抗药率达95.51%,对环丙沙星抗药率最低,为61.80%。ERIC分析显示,多抗高抗菌株谱型分散,为多克隆来源,其基因分型B型与抗药特性之间呈一定相关性。表明,动物源大肠杆菌抗药程度高,且呈现高度多重抗药性,对不同种类抗生素及同类抗生素不同药物之间均存在严重的抗药性。多抗高抗大肠杆菌无明显种属特性,其传播和蔓延对畜牧业发展和公共卫生安全都形成潜在的巨大风险。 相似文献
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贵阳市散养户猪、鸡源性大肠杆菌耐药性调查 总被引：3，自引：0，他引：3
为调查贵阳市散养户猪、鸡大肠杆菌的耐药情况,本文通过采集贵阳市农村散养的猪、鸡肛门拭子105份,经分离、鉴定得到96株大肠杆菌,再应用琼脂稀释法测定其对10种抗菌药物的MIC值。结果表明,96株大肠杆菌对10种药物的耐药率依次为:氟苯尼考(88.5%)、头孢噻呋钠(83.4%)、土霉素(82.3%)、阿莫西林(79.2%)、链霉素(76%)、磺胺嘧啶钠(75.0%)、恩诺沙星(71.9%)、环丙沙星(63.6%)、卡那霉素(61.4%)、庆大霉素(53.2%)。96株大肠杆菌均为多重耐药菌株,最少的对2种药物耐药,最多的对10种药物耐药。其结果说明,贵阳市散养户猪、鸡源大肠杆菌的耐药较严重。 相似文献
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【目的】了解广州市售肉类食品源大肠埃希菌的污染和耐药情况。【方法】自2011年7月至8月,从广州市各大农贸市场和超市采集市售肉类样品310份,其中猪肉253份,鸡肉57份。采用选择性培养基分离鉴定大肠埃希菌Escherichia coli,琼脂稀释法测定大肠埃希菌对19种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)。【结果】310份样品中共分离到213株大肠埃希菌,分离率为68.7%,其中猪肉源177株,鸡肉源36株。受试菌株对复方新诺明、链霉素和四环素的耐药率超过75.0%,对氨苄西林、萘啶酸、氯霉素、新霉素、氟苯尼考、磷霉素、环丙沙星、安普霉素、恩诺沙星、庆大霉素和头孢唑啉的耐药率为10.0%~60.0%,而对头孢西丁、头孢曲松、头孢他啶、黏菌素和阿米卡星表现较为敏感,耐药率小于5.0%。鸡肉源大肠埃希菌对头孢唑啉、头孢西丁、头孢曲松、头孢他啶和磷霉素的耐药率均高于猪肉源大肠埃希菌,差异极显著(P0.01)。213株大肠埃希菌中82.2%为多重耐药菌。【结论】广州市售肉类食品存在较为严重的多重耐药大肠埃希菌污染,且鸡肉源大肠埃希菌耐药性较猪肉源大肠埃希菌严重。 相似文献
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以分离自宁波市市售鸡肉中的一株大肠埃希菌ECCNB12-2为研究对象,使用微量肉汤稀释法进行最小抑菌浓度(MIC)测定,结果显示,该菌株对氨苄西林、庆大霉素、大观霉素、四环素、氟苯尼考、磺胺异恶唑、复方新诺明、头孢噻夫、恩诺沙星、氧氟沙星等10种抗生素耐药。采用第三代高通量测序技术对该菌株进行全基因组测序,随后对基因组完成图进行获得性耐药基因、毒力因子、质粒水平转移元件预测。菌株ECCNB12-2染色体基因组大小为5 539 489 bp,GC含量为50.37%,同时携带有4个质粒,大小分别为147 451 bp(pTB-nb1)、139 752 bp(pTB-nb2)、82 252 bp(pTB-nb3)、253 793 bp(pTB-nb4)。获得性耐药基因预测结果显示,染色体基因组、质粒pTB-nb1及质粒pTB-nb4上共携带有40个获得性耐药基因,同时菌株基因组检测出12个毒力因子。质粒水平转移元件预测结果显示,pTB-nb4质粒包含完整的水平转移系统,理论上具有高度的自主接合转移潜力。以上研究表明,分离自市售鸡肉样品的ECCNB12-2菌株是一株高风险的多重耐药菌株,反映了市售鸡肉中细菌耐药状况的严重性,相关研究结果为食源性细菌耐药安全风险评估提供了参考。 相似文献
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耐药性体外传递和耐药菌体内生存选择性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】为了进一步验证GyrA基因突变与氟喹诺酮耐药性的关系，阐明与染色体无关的细菌耐药性或耐药基因垂直传递和水平传递特点，阐明控制抗菌药使用对控制细菌耐药性的作用。【方法】用PCR方法扩增了细菌GyrA和ParC基因；用耐四环素（TE）、氨苄青霉素（AMP）、复方新诺明（SXT）的大肠杆菌做供体菌，对TE、AMP、SXT敏感的大肠杆菌作受体菌，进行了体外结合传递试验；用耐药菌株在营养琼脂上垂直传递20代；在2组不携带耐药菌的SPF鸡消化道内分别接种多重耐药大肠杆菌和沙门氏菌，接种后混合饲养。【结果】发现耐环丙沙星（CIP）和恩诺沙星（ENR）菌株的GyrA基因表达的氨基酸第73和78位发生改变，parC基因表达的氨基酸没有变化；对TE、AMP、SXT的抗性能够在大肠杆菌之间水平传递，TE的结合传递频率为3×10-7；连传20代后菌株耐药性不变；耐药菌接种后3 d，2组鸡均分离到接种的菌株，但随时间推移，耐环丙沙星的菌株逐渐减少，23 d后消失。【结论】表明细菌对氟喹诺酮药的耐药表型与GyrA基因突变密切相关；细菌的非染色体耐药基因既能水平传播又能垂直传递，耐药菌能在鸡群中迅速扩散，但如果没有抗菌药的压力，又会很快从宿主体内消除。 相似文献
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食源性大肠杆菌耐药性检测 总被引：2，自引：0，他引：2
采用美国临床实验室标准化委员会(National Committee of Clinical Laboratory Standard 简称NCCLS)推荐的琼脂稀释法,以大肠埃希氏菌ATCC25922、粪肠球菌ATCC29212和金黄色葡萄球菌ATCC29213为质控菌株,对411株分离自鸡肉和凉拌菜的大肠杆菌进行了6大类共12种抗生素的药敏性检测.结果表明受试菌株对四环素的耐药率(98.3%)最高,其次是链霉素(71.3%)、奈定酮酸(68.4%)、阿莫西林(67.6%)、氨苄青霉素(61.8%)、环丙沙星(50.6%)、氯霉素(48.4%)、卡那霉素(40.6%)、庆大霉素(36.7%),所有受试菌株对阿米卡星的敏感性最强,仅有11.9%(49)的耐药率,其次是头孢西丁(14.1%)和头孢哌酮(29.9%).247(60.1%)株分离菌表现5重以上耐药性,其中鸡肉分离株占236株. 相似文献
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吉林省部分地区鸡源大肠杆菌耐药性监测 总被引：5，自引：0，他引：5
以吉林省部分地区临床分离的43株鸡源大肠杆菌为研究对象,采用常规的药敏试验方法,对其耐药性进行监测。结果表明:吉林省部分地区鸡源大肠杆菌普遍耐药,耐药菌株大多数为多重联合耐药。本研究所采用的15种抗生素中,抑菌作用最强的是兽医临床上尚未使用的头孢唑啉和丁胺卡那霉素,其次为头孢哌酮和卡那霉素;大肠杆菌对四环素、氨苄青霉素、青霉素等药物表现出100%的耐药性。 相似文献
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河南部分地区17株禽源大肠杆菌的耐药性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]研究河南地区禽源大肠杆菌耐药性的变化,为临床药物使用提供参考。[方法]从河南省部分地区鸡场有大肠杆菌病典型症状的病例（鸡）采集病料,分离出禽源性大肠杆菌17株,检测其对24种抗生素的耐药性。[结果]24种药物中有21种药物的耐药率〉70％,其中链霉素、青霉素、阿奇霉素万古霉素、氯霉素、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、四环素、泰乐菌素10种药物的耐药性达90％,青霉素、阿奇霉素、氯霉素、泰乐菌素4种药物的耐药性达100％。[结论]河南省部分地区禽源大肠杆菌对常见抗生素耐药性增强,抗性增加。 相似文献
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动物、环境及饲养员多重耐药大肠杆菌的PFGE分型研究 总被引：3，自引：0，他引：3
【目的】了解养殖场多重耐药大肠杆菌耐药性的传播机制，探讨人、动物与环境间耐药菌垂直克隆传播的可能性。【方法】采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法对分离自养殖场动物、环境和饲养员的86株耐药谱相近多重耐药大肠杆菌进行DNA指纹图谱分型，比较菌株之间的亲缘关系。【结果】37株鸡场来源大肠杆菌可分为20种PFGE分型；49株猪场来源大肠杆菌可分为24种PFGE分型；同一动物、环境或饲养员采样点分离菌株PFGE指纹图谱相同者较多；同一养殖场不同动物个体、养殖场环境不同采样点、动物和环境以及饲养员和环境都存在PFGE指纹图谱完全相同菌株；鸡场和猪场都发现有属同一PFGE分型的来自动物、饲养员和环境的菌株；86株菌全部对环丙沙星、氨苄西林、链霉素、四环素、多西环素和复方新诺明耐药，相同PFGE分型的菌株其耐药谱型不一定相同。【结论】养殖场动物、环境及饲养员之间存在多重耐药大肠杆菌的克隆传播。 相似文献
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采用微生物培养和影印法对家养禽类鸡、鸭和肉鸽肠道可培养细菌抗生素抗性的种类、数量和分布进行了调查.结果表明:在调查的鸡、鸭和肉鸽3种禽类中,肠道可培养细菌抗生素抗性的分布非常普遍,所有测试细菌至少可以抗一种抗生素,抗5种以上抗生素的细菌占测试细菌的比例分别为75.0%、58.9%和97.4%;个别细菌对测试的10种抗生素均具有抗性.在抗生素方面,肠道可培养细菌对萘啶酮酸、盐酸四环素、盐酸克林霉素、磺胺嘧啶和红霉素的抗性分布比较广泛.提取细菌基因组并扩增16S rRNA基因,并对这些细菌进行分子鉴定的结果表明,分离的肠道可培养细菌为埃希氏大肠杆菌.在美国国家生物技术信息中心数据库进一步搜索的结果显示:与肠道可培养细菌同源性大于99%的细菌广泛分布于不同的环境、宿主和病原菌中,表明这些肠道可培养细菌抗生素抗性是一个潜在的环境微生物以及人体病原菌抗生素抗性的传播来源. 相似文献