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本文对草鱼细胞和病毒的两种大规模培养方式进行了研究和比较。静置培养条件下，细胞生长速度快，２—３天内可形成单层，单层均匀而稳定；旋转培养条件下，细胞７天左右长成单层，细胞单层面积大，病毒培养产量高。这两种培养方式所观察到的细胞病变过程及表征基本相同，病毒的ＴＣＩＤ５０／ｍｌ值稳定在６．０左右。采用这两种培养方式，可实现草鱼细胞和病毒的大规模培养。 相似文献
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草鱼出血病细胞培养灭活疫苗旋转瓶法大规模生产工艺↑（*） 总被引：3，自引：0，他引：3
Ｃａｒｅｌ氏瓶静置培养草鱼ＣＩＫ细胞,细胞２～３ｄ内长成单层,细胞单层均匀而稳定;旋转瓶培养,细胞７ｄ左右长成单层,细胞单层面积大,病毒培养产量高。２种方式所培养病毒的ＴＣＩＤ５０／ｍｌ值稳定在６．０左右。０．１％福尔马林４℃条件下灭活病毒材料１７ｄ制备疫苗,疫苗性能稳定,安全性好。疫苗效力检验结果表明,注射免疫１０ｄ和浸泡免疫１０ｄ后,免疫鱼体内血清中和抗体效价分别为１０７．９±１１．０（３）和６８．５±９．９（３）,免疫保护力分别为（７７．１±８．９）％（３）和（７３．９±８．３）％（３）,与对照组相比差异显著。本研究建立了草鱼细胞培养灭活疫苗大规模生产工艺流程,进行了较大规模的疫苗生产和生产性免疫试验,免疫草鱼成活率平均达到８５％以上。 相似文献
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旋转培养优于静置培养,它不仅表现在可形成细胞单层的面积大,单层细胞的产量高,单位面积所需的培养液(维持液)少,而且细胞生长的速度较快,细胞形成单层的时间较短,接种病毒后收获的病毒滴度也相应较高,它适宜于疫苗工厂化生产。 相似文献
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对斑节对虾进行白点综合病毒（ＷＳＳＶ）分离和提纯实验中，台湾发现了一种意想不到的病毒。病毒棒状，１４０～２００ ｎｍ×３５～５０ ｎm。密度１．１５４～１． １６２ ｇ／ｍｌ，麻醉后发现至少有 ２０、６３、１１０ ＫＤａ ３种病毒结构蛋白质。将此病毒给斑节对虾注射，迅速引起大量死亡。组织病理发现病虾的淋巴、鳃、胃、肝、胰、心脏中均有大量的嗜碱病毒粒子。电子显微镜检查病虾的淋巴器官，观察到许多发育的病毒粒子和核壳，包埋在细胞质泡中。此病毒的形态、组织病理和结构蛋白质与泰国的黄头病毒（ＹＨＶ）近似，ＲＴ—Ｐ… 相似文献
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本文从患败血病的中国对虾体内分离到多株细菌，其中三株经人工感染证实为病原菌，又经４０多项形态、生理、生化特性测试，鉴定为雷氏普罗威登斯菌（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａｒｅｔｇｅｒｉ），其主要特性为杆状，革兰氏阴性，周生鞭毛，运动，无自然游动现象，兼性厌氧，苯丙氨酸脱氨酶、柠檬酸盐利用、吲哚、甲基红反应均阳性，发酵甘露醇、肌醇、甘露糖产酸。赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、ＶＰ反应均阴性。生长最适温度、ＮａＣｌ、ｐＨ范围分别为２５℃—３０℃、０５％—１５％、７０—９０。对羧苄青霉素、先锋霉素５号、氯霉素、ＳＭＺ＋ＴＭＰ、氟哌酸、链霉素等极为敏感。雷氏普罗威登斯菌引起对虾败血病在国内外尚属首次报道。 相似文献
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为深入了解对虾白斑综合征病毒(WSSV)的致病机理和体外培养的对虾细胞对WSSV的敏感性,实验以1.5×L-15培养基培养刀额新对虾原代淋巴细胞,待细胞形成单层后接种WSSV,通过倒置显微镜、荧光显微镜、透射电子显微镜观察接种病毒后细胞的病理变化。结果显示,使用1.5×L-15培养基培养对虾淋巴组织,3 h后可观察到有细胞迁出,并能迅速形成单层,36 h后细胞的迁出汇合率可达80%,且能存活20 d以上。接种WSSV 24 h后,出现病变的细胞变圆、漂浮,细胞之间的网状结构消失,最后细胞破碎、溶解;接种WSSV 48 h后Hoechst 33342染色结果显示,感染的细胞核深染,且变形、膨大;电镜下,细胞核内含大量成簇分布的杆状病毒,细胞器被挤向细胞边缘,细胞膜轮廓模糊。研究表明,纯化的病毒粒子接种体外培养的淋巴细胞,能够使其产生明显病理变化,证明了WSSV对体外培养的淋巴细胞具有感染力,并且可在淋巴细胞中增殖。 相似文献
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草鱼出血病病毒高滴度培养方法的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本文对草鱼出血病病毒 854株高滴价培养的几种方法进行了的研究 ,现将结果报告如下 :材料和方法1 细胞 :草鱼肾脏组织细胞系 (ＣＩＫ) (左文功 ,1986 ) ,培养基为含 10 %小牛血清的ＣＡＳ。2 病毒 :草鱼出血病病毒 854株 ,维持液为 2 %小牛血清的ＣＡＳ。3 高滴价培养方法3 1 用 854株病毒接种刚生长成单层的ＣＩＫ细胞系 (区别于致密单层细胞 ,下同 )。病毒接种量为维持液量的 1/ 10 ,2 8℃吸附 6 0分钟后 ,添加维持液 ,2 8℃培养 ,观察细胞病变过程 ,测定病毒的ＴＣＩＤ50 /ｍｌ。3 2 精氨酸处理 在接种病毒时 ,向病毒液中加入浓… 相似文献
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对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒的精细结构、核酸、多肽及血清学研究 总被引：26，自引：3，他引：26
对纯化的对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ）进行了超微结构、紫外吸收、核酸类型及多肽ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的研究。同时用单克隆抗体对ＨＨＮＢＶ的两分离株和ＭＢＶ进行了血清学比较研究。用ＴＭＶ作为内标定物测得病毒粒子大小为１５０ｎｍ×４５０ｎｍ，其衣壳为两个帽状物端夹１３圈螺旋对称的园柱体结构。病毒在２６０ｎｍ处吸光系数为０．１１７ｍｇ／ｍＬ／ＯＤ２６０。病毒核酸为双链ＤＮＡ，分子量大于３５×１０６ｄ。病毒囊膜有１２种主要多肽。病毒衣壳有两种主要多肽。从寿光（ＨＨＮＢＶ—９３７）和青岛（ＨＨＮＢＶ—９３８）分离到的病毒种在ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和抗ＨＨＮＢＶ—９３７单抗ＥＬＩＳＡ反应上没有显著差异。ＨＨＮＢＶ与斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）在抗原决定簇上存在差别。 相似文献
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用圆柱形细胞培养瓶,对草鱼吻端组织ZC—7901细胞适应旋转培养条件进行了研究,测定了细胞接种浓度、旋转速度及细胞生长速度等有关参数。试验表明ZC—7901细胞能适应于旋转培养,适应后的细胞对草鱼出血病病毒仍具有敏感性。 相似文献
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通过对成年似鲇高原鳅(Triplophysa siluroides)外周血细胞涂片及中肾、肝脏和脾脏组织的印片进行瑞氏(Wright’s)、过碘酸雪夫氏(PAS)和苏丹黑B(SBB)染色,观察各类血细胞形态、大小、分布及细胞化学特征。结果表明:似鲇高原鳅血细胞可分为红细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞,各类血细胞的发生(除血栓细胞)均可分为原始、幼稚和成熟三个阶段。外周血中红细胞比例最多,为97.56%,白细胞中血栓细胞数量最多占52.86%,居白细胞的首位;三种粒细胞中嗜中性粒细胞数量最多占30.25%。粒细胞的主要发生场所在中肾占45.18%,红细胞的主要发生场所在脾脏,占71.62%,肝脏中未见原始血细胞。在中肾中同时可见嗜酸性、嗜碱性和嗜中性三种粒细胞的发生。各阶段的白细胞PAS染色均显示阳性,但只有各阶段的粒细胞SBB染色显示阳性。 相似文献
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采用脂质体法成功地使gfp基因转入鲫囊胚细胞株CAB细胞基因组，获得了具有G418抗性的细胞。以转化细胞为供体，银鲫卵为受体，核移植得到了转基因的囊胚和原肠胚；并发现4℃处理细胞24h能显著改善核移植胚胎的发育。 相似文献
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Cryopreservation of trout primordial germ cells 总被引：2，自引：0，他引：2
T. Kobayashi Y. Takeuchi G. Yoshizaki T. Takeuchi 《Fish physiology and biochemistry》2003,28(1-4):479-480
A method for cryopreserving trout primordial germ cells (PGCs) was established. Trout PGCs were successfully cryopreserved with high survival by freezing with medium containing 1.8 M ethylene glycol. Transplantation experiment revealed that frozen/thawed PGCs colonized and proliferated in the recipients' gonads. 相似文献
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体外培养细胞对研究生物的资源保护、功能基因及病害发生机理与防治等均具有重要意义。然而,目前海洋双壳贝类中可以长期存活的组织细胞是有限的。本研究采用植块法启动栉孔扇贝(Chlamys farreri)心脏细胞的原代培养,通过优化培养基的方法,建立了可使其长期存活的原代培养体系。根据组织块迁出细胞的数量和细胞存活时间,确定L-15是3个培养基(L-15,M199,L-15+M199)中最适宜栉孔扇贝心脏细胞的基础培养基。通过三因子三水平正交实验,得出栉孔扇贝心脏细胞适宜的添加物组合:L-15基础培养基中添加5%胎牛血清、50 mmol/L牛磺酸和6 mmol/L Ca~(2+)。原代培养产物中以心肌细胞为主要的细胞类型,其中部分心肌细胞在原代培养14 d内可进行节奏性搏动;部分细胞可局部形成心肌束和肌管样结构;心肌细胞在体外存活时间达2个月。本研究将为栉孔扇贝基础生物学和功能基因的研究提供细胞平台。 相似文献
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鲤鱼尾鳍细胞的体外培养及其生长状态的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用组织块培养法，对鲤鱼尾鳍组织进行培养，在28℃温度下，用添加20％胎牛血清的M199培养基进行培养，在此过程中，对培养的细胞进行观察及研究，描述了细胞形态及其它相关细胞生物学特征。 相似文献