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1.
参照GenBank中已发表的ApxⅣ基因序列,以自行分离的App DNA为模板,利用PCR方法扩增出ApxⅣ3′端,大小为552bp的保守基因序列。将PCR产物克隆到pMD18-T Simple Vector中,获得重组质粒pMD-ApxⅣ,对其重组质粒pMD—ApxⅣ进行BamHⅠ、HindⅢ双酶切,并将酶切产物克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建了重组表达质粒pET—ApxⅣ。将表达质粒转化至大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明pET—ApxⅣ在BL21中成功表达,并能被App阳性血清所识别,具有良好的免疫原性。表达蛋白的分子质量约为39．5KOa。利用HiTrap FF crude columns将表达的蛋白进行了纯化。 相似文献
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为探讨1型鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)p25蛋白的免疫原性,从RA 1型基因组DNA中扩增出p25基因全长ORF,生物信息学分析显示其为含有完整保守结构域PRK00110的一未知功能保守蛋白.p25基因经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a(+)-p25.测序正确后,将重组表达质粒pET-32a(+)-p25转入E.coli Rosetta,并成功进行了诱导表达.SDS-PAGE分析表明,表达的重组蛋白与预期大小一致,表达产物主要以可溶性形式存在;Western blotting检测显示,该蛋白具有良好的免疫原性. 相似文献
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试验旨在克隆羊种布鲁氏菌LpxB基因并进行原核表达和蛋白的生物信息学分析。以布鲁氏菌M5-90株基因组为模板,参照GenBank中M5-90株基因组DNA序列,用DNAMAN软件设计1对引物,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增得到大小为1 188 bp的LpxB基因,将其连接入pMD20-T载体上,构建pMD20-T-LpxB重组质粒,将其转化到E.coli DH5α感受态细胞中,经BamH Ⅰ和 Xho Ⅰ双酶切鉴定正确后扩大培养。将BamH Ⅰ和 Xho Ⅰ双酶切获得的LpxB片段连接入pET-28a,构建重组质粒pET-28a-LpxB,转化到E.coli BL21（DE3）中,双酶切鉴定正确后扩大培养。经IPTG诱导其表达,用SDS-PAGE和Western blotting对蛋白进行鉴定。运用DNAMAN、BioEdit等软件对LpxB基因编码的氨基酸序列进行分析。结果表明,本研究成功克隆了LpxB基因并进行了蛋白表达,在LpxB蛋白二级结构中,α-螺旋、伸展链、β-折叠和无规卷曲分别占52.41%、14.94%、8.10%和24.55%。 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(7):1178-1182
用real-time PCR方法扩增家兔PepTⅠmRNA序列,通过原核表达体外获得家兔PepTⅠ蛋白,旨在制备多克隆抗体。试验通过RT-PCR方法成功扩增出2 001bp的家兔PepTI基因片段,设计特异性引物成功扩增出抗原表位相对集中的1 071bp大小的片段,构建重组表达质粒,获得融合蛋白。结果显示:家兔PepTⅠ基因片段成功的连接到pMD18-T载体上,重组克隆载体双酶切后回收目的片段分别连接到原核表达载体pET-32a、pET-28a,经转化提取质粒测序验证后表明,成功构建原核表达载体pET-32a-P、pET-28a-P,将重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)后IPTG诱导,成功表达出PepTⅠ融合蛋白,目的蛋白相对分子质量大小约为44 000,与预期试验结果相符。结果表明:本试验成功扩增出家兔PepTⅠmRNA序列,并且通过原核表达获得家兔PepTI融合蛋白。 相似文献
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非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72在大肠杆菌中的表达 总被引：1，自引：1，他引：1
利用PCR技术，从含非洲猪瘟（ASFV）P72基因的克隆质粒BBBBPr4中扩增出1．94kb的P72基因．将P72基因和表达栽体pET-30c（＋）分别用限制性核酸内切酶Fba Ⅰ／XHoⅠ和BamHⅠ／XHoⅠ进行双酶切，然后在T4DNA连接酶作用下，将P72基因定向克隆至栽体pET-30c（＋）中相应位点上，并转化至宿主菌BL21（DE3）中，得到了重组菌株BL21（DE3）（pET—ASFvP72）。经PCR鉴定，构建的重组菌株中合有P72基因。重组菌株BL21（DE3）（pET-ASFVP72）经IPTG诱导后，其表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析，结果表明衣壳蛋白P72基因可以在受体菌中高效表达，达到了菌体总蛋白的34％，表达产物的分子量约为78Ku，并能被ASFV抗体所识别。 相似文献
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鸡柔嫩艾美耳球虫ZJ株5401基因在大肠杆菌中的表达 总被引：2，自引：1，他引：2
根据E．tenella子孢子表面抗原5401基因序列设计合成特异性引物，引物两端分别加上EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点及保护碱基，用RT-PCR方法从E．tenella孢子化卵囊扩增出881bp的片段。将重组克隆质粒pGEM-T5401用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后，电泳回收目的片段，克隆到同样经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切的表达载体pET-30a中，得到重组表达质粒pET-30a-5401，把重组表达质粒转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导，表达出了His-5401融合蛋白。Western印迹结果表明表达产物为大约66．2ku的蛋白。 相似文献
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根据GenBank中纤连蛋白结合蛋白A基因（fnbA）序列设计了1对特异性引物，以金黄色葡萄球茵基因组DNA为模板，进行PCR扩增；结果获得了3600bp的DNA片段。将PCR产物克隆至pGEM T easy载体中，成功地构建了克隆质粒pGEM—fnbA。以HindⅢ和XhoⅠ双酶切pGEM-fnbA和pET28a（＋），将纯化的基因fnbA亚克隆至pET28a（＋）中，构建了原核表达质粒pET28a-fnbA，并将其转化至E．coli BL21（DE3）感受态细胞中，经1mmol／LIPTG诱导和SDSPAGE分析，在约165ku处出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带。Western—blotting分析表明，该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性。 相似文献
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根据猪卵泡抑素(follistatin,FS)基因编码区序列(GenBank登录号:M36512.1)设计并合成1对引物,经PCR扩增获得了FS基因成熟肽序列,将其克隆入pMD18-T载体并转化E.coli DH5α感受态细胞,进行PCR、双酶切及测序验证。然后将其克隆到表达载体pRSET-A的BamHⅠ和HindⅢ酶切位点之间,构建重组质粒pR-FS并转化E.coli BL21(DE3) 感受态细胞,再经PCR、双酶切和测序验证。转化重组质粒pR-FS的重组菌经IPTG诱导后的表达产物进行SDS-PAGE分析,分子质量与预期相符,为26.1 ku左右,经0.2 mmol/L IPTG诱导3 h之后表达量达到最高,约占总菌体蛋白的30%。表达产物可经Ni-NTA凝胶纯化。以上结果表明正确完成了猪FS基因成熟肽序列的克隆及其在大肠杆菌中的表达及纯化。 相似文献
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为获得HDAg抗原,以含有ORF5编码区基因的pETHD质粒为模板进行PCR扩增得到500bp大小片段,经过BamHⅠ、HindⅢ双酶切,与载体pET-30a连接,构建重组表达质粒pET-30a/HDAg,再转入细胞BL21(DE3),经过IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,表达蛋白分子质量约27ku,经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达95%以上。将纯化的蛋白经HRP标记,初步建立ELISA捕获法,通过对24份标本检测和交叉反应试验,结果表明表达的抗原具有很好的反应原性和特异性,为建立丁型肝炎早期检测试剂盒提供材料。 相似文献
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在动物的异常行为中以刻板行为最为常见,而咽气癖又是马最常见的口部刻板行为之一。作者就咽气癖在生理方面和心智方面对马体产生的影响、行为基础、诱因的研究进展及常见的防治措施进行综述。 相似文献
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在归纳总结RFLP和PCR-RFLP标记技术的原理、优缺点的基础上,系统论述了其在牦牛遗传育种研究中的应用现状,并提出了个人的建议和看法。 相似文献
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再探草坪的起源与演化及其概念——中文·汉语的“草坪”一词及其他 总被引：4，自引：1，他引：3
初步考证中文·汉语的“草坪”一词及相关文史资料。再次证明中国自古分布有天然草坪。文字记载早在西汉武帝建元年间 (公元前 138年 )已大面积栽培草坪 ,于今至少有 2 139年历史。当时的草坪科学技术水平已有相当高度 ,发现并选用了结缕草 (Zoysiaspp .) [或狗牙根 (Cynodondactylon) ]和“戾莎 (Carexspp .)”等草坪草 ;发明了大面积整理地形、地貌及平整土地 ,针对不同生活型的草坪草采取“布”或“攒”等不同的建植草坪方式。嗣后 2 0 0 0年 ,处于移植天然草坪为“人工草坪” ,向人工草坪演化的过渡阶段。期间 ,于南齐·昏侯 (499～ 5 0 1)又发明了“满铺草坯”建植草坪等技术。所有的发现、发明不仅沿用至今 ,而且导致清道光朝 (182 1～ 185 1)诞生了中国式人工草坪。现代草坪缘鸦片战争 (184 0 )而传入。相伴近、现代草坪的普及 ,于清道光、咸丰年间 (184 0～ 186 1) ,市郊农村已有“草坪专业户”与“草坯专业户” ,至 2 0世纪 5 0～ 70年代 ,“草坪”一词先后被列入“词 (辞 )典”和“百科全书”等。 中文·汉语自古以来的草坪概念“平的草地” ,“长草若毛 ,‘剥’取似皮的草地表层”都清楚地规定了 :草坪是一类特殊的草地 相似文献
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锌硒对后备猪繁殖性能及仔猪发育的影响 总被引：11，自引：0，他引：11
本试验研究了锌硒对后备公母猪繁殖性能和哺乳仔猪成活率的影响。在２月龄公母猪和哺３乳仔猪日粮中添加不同剂量的锌和硒,试验与对照组比较,后备母猪排卵率和产仔性能均有明显提高;后备公母初次采精时间提前,睾丸大小,射精量,精子活率和精子密度均显著提高,精子畸形率降低; 相似文献
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本研究旨在比较安静型和紧张型湖羊在行为和生长及屠宰性能上的差异,并进行生长及屠宰性能和行为指标的关联分析。试验通过Pen Score法筛选安静型和紧张型各5只湖羊进行试验。结果表明:安静型湖羊的采食时间(3.17 h/d)显著高于紧张型湖羊(2.63 h/d)(P<0.05),但舔毛次数(0.33次/d)却显著低于紧张型湖羊(0.73次/d)(P<0.05)。安静型湖羊的胴体重(21.68 kg)显著高于紧张型湖羊(19.44 kg)(P=0.05),且眼肌面积(21.11 cm^2)也显著高于紧张型湖羊(14.63 cm^2)(P<0.05)。进一步相关性分析发现,试验羊的采食时长与胴体重、干物质采食量、眼肌面积、平均日增重均存在显著正相关关系(P<0.05);而料重比与舔毛次数存在显著负相关关系(P<0.05)。综上所述,安静型湖羊较紧张型湖羊具有更好的生长及产肉潜力,而且采食时长和舔毛次数等行为与生长及屠宰性能有一定的关联,可用于进一步探究动物性情与生长及屠宰性能的关联。 相似文献
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袁博 《畜牧兽医科学(电子版)》2021,(5):91-92
鸡养殖中禽霍乱疾病的出现主要是由于多杀性巴氏杆菌感染的一种传染性疾病,主要会导致鸡只出现急性败血症和机体炎症反应等,慢性型感染会导致鸡只出现皮下及机体内脏器官、关节等的化脓性炎症反应。禽霍乱疾病在鸡养殖全年均会出现,尤其是在气温变化较大的时期疾病爆发的可能性更高。禽霍乱疾病在急性爆发的情况下病死率相对较高,同时短期内即会出现死亡的情况,难以进行有效的治疗,易导致鸡养殖户出现严重的经济损失。该文主要对鸡禽霍乱疾病的流行病学特点、临床症状及相关的防治措施进行论述。 相似文献